抗苗勒管激素Ⅱ型受体、促卵泡激素受体、促黄体生成素受体与卵巢储备关系

1 资料与方法

1.1 研究对象

采用前瞻性研究方法选取2016年12月30日—2019年5月30日天津爱维医院进行体外受精-胚胎移植的女性。纳入标准：均行体外受精-胚胎移植；可获得取卵过程中单个优势卵泡液及剩余卵泡液；年龄≥20岁；获得本人及家属同意并自愿参加研究；依从性可。排除标准：合并肿瘤、自身免疫性疾病、凝血功能异常、甲状腺疾病、肾上腺功能异常、泌乳素水平异常及糖尿病者；合并肾脏、肝脏及心功能不全者；纳入研究前服用激素类或避孕类药物；卵巢手术史者；吸烟者。该研究被天津市中医药研究院附属医院伦理委员会批准。

1.2 分组标准

①卵巢功能正常：月经规律且性激素水平在正常范围，仅因输卵管因素行体外受精-胚胎移植，影像学检查排除多囊声像变化。②DOS：月经规律或稀发，FSH为12～40 IU/L，排除POF。③POF：FSH>40 IU/L，雌二醇(E2)<73 pmol/L，且闭经时间>6个月，年龄<40岁。

1.3 体外受精-胚胎移植

使用促排卵药物后监测卵泡发育情况，超过2个卵泡直径>1.7cm时注射250ug重组人绒毛膜促性腺激素。36～38 h后在超声引导下取卵，在胚胎培养72 h后进行1～2个胚胎移植。

1.4 检测方法

1.4.1血清性激素均于重组人绒毛膜促性腺激素注射日抽取患者血液，FSH、AMH、LH、E2、孕酮(P)均由天津市中医药研究院附属医院和天津爱维医院检验科检测。

1.4.2 RNA 于取卵日获取卵泡液及卵泡颗粒细胞，采用qRT-PCR法检测AMHRⅡ、FSHR、LHR mRNA的相对表达量。使用Trizol 法提取RNA，建立20 μl RNA多聚酶反应体系。PCR扩增及逆转录条件(取1ul 总RNA)：42℃反应60 min，72℃反应5 min；20 μl Real-time PCR反应体系：2μl dNTP Mixture，1μl逆转录酶，0.5μl RNase inhibitor，反应条件：95℃变性4 min，95℃变性45 sec，53℃复性45 sec，72℃延伸90 sec，72℃温育10min，共30个循环。采用Thermo NANO 检测RNA浓度，使用7500 Software v 2.06软件分析数据，以β-actin为内参计算相对表达量。

1.5 统计分析

2 结果

2.1 基础资料及激素水平

共纳入研究女性110例，根据卵巢功能分为卵巢功能正常组(40例)、DOS组(37例)、POF组(33例)。POF组年龄、体质指数、FSH、LH高于正常组和DOS组，窦卵泡个数、获卵个数、AMH、E2、P低于正常组和DOS组(P<0.05)。见表1。

表1 各组基础资料及性激素水平比较

2.2 激素受体表达情况

AMHRⅡ、FSHR、LHR相对表达量，POF组最低、DOS组次之、正常组最高(均P<0.05)。见表2。

表2 各组性激素受体表达情况

2.3 不同卵巢储备女性AMHRⅡ、FSHR、LHR间表达相关性

在正常组，FSHR与LHR、AMHRⅡ表达量均呈正相关(r=0.35、0.31，P<0.05)，LHR与AMHRⅡ表达量呈正相关(r=0.45，P<0.05)。在DOS组，FSHR与LHR、AMHRⅡ表达量呈正相关(r=0.35、0.31，P<0.05)，LHR与AMHRⅡ表达量无相关性(r=0.10，P>0.05)。在POF组，FSHR与AMHRⅡ表达量呈正相关(r=0.40，P<0.05)，与LHR表达量无相关性(r=0.08，P>0.05)，LHR与AMHRⅡ表达量无相关性(r=0.12，P>0.05)。

3 讨论

POF是一种卵巢功能障碍疾病[6]。目前，卵巢功能异常的发病机制尚未完全了解，临床评估卵巢储备能力对早期发现POF、预测生育能力和绝经年龄具有重要意义。卵巢储备减少通常被称为卵泡和卵母细胞的数量或质量下降，卵泡发生与颗粒细胞中表达的AMH、LH、FSH密切相关[7]。

FSHR改变都可能降低FSHR与其配体间连接和信号传递，可能导致卵巢储备减少。既往研究证实，FSHR基因多态性与卵巢储备功能异常相关[8]。卵巢储备功能下降患者FSH水平升高[9]。本研究POF组FSHR最低，DOS组次之，正常组最高，提示卵巢储备功能下降患者FSHR表达下调。既往研究在POF患者中观察到FSHR的功能缺陷[10]。有研究在闭经女性中鉴定出多种FSHR失活突变和多态性，提示卵巢储备功能下降女性FSHR存在失活和突变[11]。Cordts等[11]研究也观察到POF组和DOS组FSHR表达下调，但差异不大，可能与研究病例数较少有关。

本研究中，POF组LH高于正常组和DOS组，AMH低于正常组和DOS组，且POF组AMHRⅡ、LHR相对表达量均低于DOS组和功能正常组，提示POF和DOS患者LH、AMH及相应受体水平异常，随着卵巢储备能力降低，LH、AMH表达水平降低。有研究证实，LHR的表达与卵泡大小呈正相关[12]；LHR受体降低可导致妊娠率降低，增加LHR受体可提高临床妊娠率[13]。血清AMH水平可反映卵巢功能[9]。AMH与AMHRⅡ结合后抑制核内CYP19 mRNA表达，并降低细胞色素酶P450活性，导致雌激素分泌下调，抑制始基卵泡的募集[14]。

本研究相关性分析显示，在卵巢功能正常组，FSHR与LHR、AMHRⅡ呈正相关，LHR与AMHRⅡ呈正相关，与既往研究相符[15]。在DOS组，FSHR与LHR、AMHRⅡ呈正相关；在POF组，FSHR与AMHRⅡ呈正相关。提示AMHRⅡ、LHR、FSHR改变可能参与了卵巢储备下降的发生。既往研究也认为，不同卵巢储备女性颗粒细胞AMHRⅡ、LHR、FSHR表达差异较大，随着卵泡数目及药物反应差异，细胞表面受体量存在显著差异[15]。

综上所述，不同卵巢储备女性AMHRⅡ、FSHR、LHR表达量存在差异，可能与卵巢储备异常的发生机制有关。