乳粉中沙门氏菌检验能力验证结果分析

王 盈

（中国铁路哈尔滨局集团有限公司 哈尔滨铁路疾病预防控制中心海拉尔分中心，内蒙古 海拉尔021000）

沙门氏菌是一种常见的引起人类、动物发病及食物中毒的食源性致病菌之一，极易污染水源、食品等，对人类健康造成危害，在食品检测中具有重要意义[1-2]。此次能力验证由市场监督管理局监管、食品检验检测中心承担，是考核实验室能力的一次检测，此次的能力验证不仅是对检测人员的考察，对促进实验室发现问题、提高检验检测水平也有积极意义[3-4]，针对考核情况进行分析。

1 材料与方法

1.1 样品

样品编号为SLM9-19010 和SLM9-19016，为2 个西林瓶密封的质控球，由某食品检验检测中心提供。

1.2 培养基、试剂及仪器

缓冲蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋(BS)琼脂、HE琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂、沙门氏菌属显色培养基、三糖铁(TSI)琼脂、蛋白胨水靛基质试剂、尿素琼脂、氰化钾(KCN)培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、生化鉴定试剂盒，均购置于北京某公司。所有培养基及试剂均验证合格并在有效期内。

采用恒温恒湿培养箱(BSC-250，36℃)、电热恒温培养箱(DHP-420，42℃)、立式压力蒸汽灭菌锅(BXM-30R)。

1.3 方法

根据组织方要求，样品前处理应按照作业指导书进行，后续检测依据《食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4—2016)[5]进行。

1.3.1 样品前处理

检测前，先将未开启的质控球置于室温条件下，待恢复至室温后(约15 min)，无菌操作打开编号SLM9-19010 和SLM9-19016 西林瓶的铝塑盖和胶塞，用25 mL 无菌生理盐水完全溶解质控样品，振荡混匀。待溶解后，吸出放入无菌瓶中，反复用稀释液清洗西林瓶内壁，回收清洗液放入上述无菌瓶中。此溶液即为待测样品溶液，记为SLM9-19010 待测样品溶液和SLM9-19016待测样品溶液。

1.3.2 预增菌和增菌

将SLM9-19010和SLM9-19016待测样品溶液分别转移至盛有225 mL灭菌的BPW均质袋中，振荡混匀，于36℃培养箱培养18 h；预增菌后轻轻摇动培养过的样品混合物，分别吸取1 mL预增菌液转种于10 mL TTB增菌液和10 mL SC增菌液中，TTB混合增菌液于42℃培养箱培养24 h，SC混合增菌液于36℃培养箱培养24h；10 mL TTB增菌液和10 mL SC增菌液做空白对照。

1.3.3 分离培养

用直径3 mm的无菌接种环取增菌液1环，划线接种于BS琼脂、XLD琼脂、HE琼脂和沙门氏菌属显色培养基平板；BS琼脂在36℃下培养48 h，XLD琼脂、HE 琼脂、沙门氏菌属显色培养基平板在36℃下培养24 h，并做空白对照，培养结束后观察菌落生长情况。

1.3.4 生化鉴定

在HE琼脂、XLD琼脂、沙门氏菌显色、BS琼脂平板上挑取可疑菌落，分别接种在三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺，接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验管、对照管各1 支同时接种蛋白胨水、尿素、KCN 培养基及营养琼脂平板于36℃培养24 h；为确保生化鉴定结果，同时采用沙门氏菌生化鉴定试剂盒进行鉴定，根据试剂盒说明书从新鲜培养的单个纯菌落用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，同时接种于三糖铁生化管，24 h后观察结果。

2 结果与分析

2.1 选择性平板分离

将增菌液划线与多个平板进行划线培养，2 份样品SLM9-19010和SLM9-19016在各平板上的菌落形态如表1所示。

表1 选择平板上的菌落形态

2.2 菌落的生化反应

样品SLM9-19010在各个平板上都没有典型菌落。样品SLM9-19016 在各个平板上都有典型菌落。挑取SLM9-19016 中2 个HE 琼脂平板蓝绿色中心带黑色菌落(编号分别为SLM9-19016-1，SLM9-19016-2)，2 个XLD琼脂平板黑色菌落(编号分别为SLM9-19016-3和SLM9-19016-4)，2 个沙门显色培养基淡紫色菌落(编号分别为SLM9-19016-5和SLM9-19016-6)，2个BS琼脂平板黑色带金属光泽菌落(编号分别为SLM9-19016-7和SLM9-19016-8)进行生化鉴定，以上菌落经过营养琼脂平板纯化培养后，再进行沙门氏菌生化鉴定试剂盒鉴定，结果如表2所示。

表2 SLM9-19016生化反应结果

根据生化鉴定结果SLM9-19016-1到SLM9-19016-8都为同一种菌，并且为沙门氏菌属；SLM9-19010 未检出沙门氏菌。

3 结论与讨论

3.1 检测结果

本次能力验证通过预增菌和选择性增菌后，用HE琼脂、XLD琼脂、沙门氏菌显色、BS琼脂平板进行筛选，平板上均出现可疑沙门氏菌，尤其在沙门显色培养基中出现了典型菌落，经分离纯化后进行生化试剂盒鉴定，鉴定出SLM9-19010 未检出沙门氏菌，SLM9-19016检出沙门氏菌属。

3.2 分析讨论

（1）样品分离。在打开样品进行初步分离时，必须按照要求操作，在室温放置一段时间，同时增菌液的次数按要求加入且反复吹打，尽量使西林瓶内的所有细菌都洗脱出来，如果样品中所含细菌量少，不按此步骤易造成细菌漏检。

（2）避免交叉污染。在实验过程中最好使用带滤芯的枪头以防吸液时样液冲入移液器而污染其他样品。在样品开启前、预增菌和增菌、接种TTB增菌液和SC增菌液、划线分离过程中每个样品应独立进行，防止样品之间交叉污染和样品混淆。

（3）培养基选择。本次按照国家标准规定方法进行检验时，沙门氏菌的选择性分离培养尤为重要，因其在不同的培养基上生长状态不一，BS琼脂培养基需要培养48 h；沙门显色培养基属于强选择性培养基，沙门菌属在此培养基的菌落易识别。检测采用了BS琼脂、HE琼脂、XLD琼脂、沙门氏菌属显色培养基，多种培养基可以相互佐证以给予更好的证据支持。

（4）平板分区划线。在平板进行细菌分离中，划线培养是很重要的一步，在分区划线时，应进行多区划线，避免菌落出现弥漫性生长，从而不好挑取单个纯种菌落进行生化实验。进行生化鉴定时，选用多个特征性菌落可以避免漏筛，生化鉴定应选择品质较好的试剂且需把控质量。

（5）生物安全。在整个实验过程中应注意生物安全，避免操作人员被感染，实验结束后对培养物尽快进行无害化处理，避免污染环境。

4 结束语

参加能力验证是实验室保持技术能力的一种有效方式，此次对乳粉中沙门氏菌的检验，考察检验人员技术能力，使实验室可以发现问题、及时改进纠正，确保检验检测达到质量要求。