9种杀菌剂对桉树轮斑病原菌室内毒力测定

邹东霞，钟雅婷，廖旺姣，罗 辑

（广西壮族自治区林业科学研究院 广西优良用材林资源培育重点实验室，广西南宁 530002）

桉树（Eucalyptusspp.）是广西重要的用材林速生树种，随着人工林的大面积种植，病虫害的危害日趋严重[1]。桉树人工林病害种类多，危害程度严重。据统计，广西桉树病害的种类多达38 种，其中桉树轮斑病原菌（Pilidiella eucalyptorum、P.diplodi⁃ella）是桉树主要真菌性病害之一[2-3]。该病害主要危害叶片，感病初期，叶片出现针头状紫色斑点，之后斑点逐渐扩大，中间呈淡黄褐色，叶片边缘的病斑有褪绿赤色晕圈，条件适宜时病斑上可形成少量褐色至黑色子实体。病斑有明显轮纹，每一轮纹上可形成一轮褐色至黑色子实体[3]。

目前，植物真菌性病害的防治主要为化学防治。化学杀菌剂有很多类型，不同类型的杀菌剂作用机理不同，对植物病害的防治效果也不同。苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑和腈菌唑是三唑类杀菌剂，其作用机理是通过抑制P450 酶（CYP51）抑制羊毛甾醇向麦角甾醇转化，破坏病原菌细胞膜功能，最终导致细胞死亡，对担子菌、子囊菌和半知菌等大多数真菌性病害均有效[4]。吡唑醚菌酯和嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，通过干扰敏感真菌病原体线粒体内膜上复合物Ⅲ（细胞色素bc1 复合物）Qo位点的功能来抑制线粒体呼吸作用[5]。吡唑醚菌酯可用来防治香蕉大茎点菌（Macrophoma musae）引起的香蕉黑痣病[6]、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）引起的水稻纹枯病[7]等，嘧菌酯被用在防治立枯丝核菌引起的马铃薯黑痣病[8]、古巴假霜霉（Pseudoperonos⁃pora cubensis）引起的霜霉病[9-10]等病害。甲基硫菌灵又名甲基托布津，是广谱内吸性苯并咪唑类杀菌剂，该药剂主要是通过影响病原菌菌丝的形成、干扰病原菌的细胞分裂、使细胞壁中毒和使孢子萌发长出的芽管畸形等作用杀死病原菌[11]。甲基硫菌灵对枸杞尾孢（Cercospora lycii）引起的枸杞白粉病、苹果链格孢菌（Alternaria mali）引起的苹果斑点落叶病及水稻纹枯病等具有很好的防治效果[12-14]。此外，一些植物源杀菌剂对一些植物病原菌有较好的抑制效果[15-18]。关于杀菌剂对桉树轮斑病原菌的抑菌效果未见报道。本研究选取了文献报道中对植物真菌性病害具有较好防治效果的杀菌剂，使用不同杀菌剂对桉树轮斑病原菌进行室内毒力测定，筛选出抑菌效果较好的杀菌剂，为该病害林间的化学防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试病原菌

于广西壮族自治区国有东门林场实验基地（107°46'E，22°19'N）采集感病的桉树叶片，采用组织分离法进行病原菌分离培养。对经过致病性测定的菌株进行形态学和分子生物学鉴定。桉树轮斑病原菌被鉴定为P.eucalyptorum和P.diplodiella，与黄翠流等[3]报道的结果一致。菌株保存于4 ℃冰箱备用。

1.2 供试培养基

采用PDA 培养基对病原菌进行分离、纯化、保存及活化等。

1.3 供试杀菌剂

供试杀菌剂的剂型、有效成分及生产厂家等信息见表1。

表1 供试杀菌剂剂型、有效成分及生产厂家Tab.1 Formulation,active ingredients and manufacturer of tested fungicides

1.4 方法

采用菌丝生长速率法进行测定[19]。分别将不同供试杀菌剂用无菌水稀释成5 种不同浓度的药液，浓度设置的原则为5 种浓度的抑制率控制在10%～90%。

用移液枪分别吸取不同浓度杀菌剂药液1 mL，加入50 mL 溶解后冷却至55 ℃左右的无菌PDA 培养基中，充分混匀，分装至内径为90 mm的无菌培养皿中，待培养基冷却凝固后备用。每个浓度设置3次重复，用无菌打孔器（D=6 mm）取培养好的病菌菌饼，接种至含杀菌剂的PDA 平板中央，以没有杀菌剂的PDA平板为对照，置于25 ℃恒温培养箱中培养7天后，采用十字交叉法测定菌落直径，并计算菌丝生长抑制率。

1.5 数据处理

采用DPS 13.01 软件求出各杀菌剂对病原菌的毒力回归方程、EC50值及R值。

2 结果与分析

不同浓度的杀菌剂对2种病原菌具有不同程度的抑制作用。9 种杀菌剂对桉树轮斑病原菌（P.eu⁃calyptorum）的EC50值为80%乙蒜素EC > 70%甲基硫菌灵WP > 25%嘧菌酯SC > 0.3%丁子香酚SL >20%丙环唑ME＞25%腈菌唑EC＞43%戊唑醇SC＞25%吡唑醚菌酯SC＞10%苯醚甲环唑ME（表2）。其中，毒力最强的是10%苯醚甲环唑ME，EC50值为0.011 6 mg/L；其次是25%吡唑醚菌酯SC，EC50值为0.045 3 mg/L；毒力最弱的是80%乙蒜素EC，EC50值为6.839 3 mg/L。

表2 不同杀菌剂对桉树轮斑病原菌（P.eucalyptorum）室内毒力测定Tab.2 Determination of different fungicides'toxicity on P.eucalyptorum in laboratory

续表2Continued

9种杀菌剂对桉树轮斑病原菌（P.diplodiella）的EC50值为80%乙蒜素EC＞70%甲基硫菌灵WP＞25%嘧菌酯SC＞0.3%丁子香酚SL＞25%腈菌唑EC＞25%吡唑醚菌酯SC＞10%苯醚甲环唑ME＞20%丙环唑ME＞43%戊唑醇SC（表3）。其中，毒力最强的是43%戊唑醇SC，EC50值为0.047 3 mg/L；其次是20%丙环唑ME，EC50值为0.085 7 mg/L；毒力最差的是80%乙蒜素EC，EC50值为2.809 9 mg/L。

表3 不同杀菌剂对桉树轮斑病菌（P.diplodiella）室内毒力测定Tab.3 Determination of different fungicides'toxicity on P.diplodiella in laboratory

续表3Continued

3 结论与讨论

本研究结果表明，9种杀菌剂对2种桉树轮斑病原菌具有不同程度的抑制作用。其中，对P.euca⁃lyptorum毒力最强的是10%苯醚甲环唑ME，其次是25%吡唑醚菌酯SC，毒力最弱的是80%乙蒜素EC；对P.diplodiella毒力最强的是43%戊唑醇SC，其次是20%丙环唑ME，毒力最弱的是80%乙蒜素EC。建议对这些杀菌剂进行林间防治试验进一步验证其防治效果。

供试的杀菌剂中有2 种植物源药剂（0.3%丁子香酚SL 和80%乙蒜素EC），其中，0.3%丁子香酚SL对桉树轮斑病原菌具有很好的抑制效果，对病菌的毒力强于化学杀菌剂25%嘧菌酯SC 和70%甲基硫菌灵WP。丁子香酚是从百部（Stemona japonica）和丁香（Eugenia caryophyllata）等中药材中提取溶菌性化合物研制而成的，是具有广谱、高效和安全特性的植物源杀菌剂。该杀菌剂对白术叶斑病菌（Pho⁃ma herbarum）[15]、苹果树腐烂病菌（Valsa mail）[16]、人参灰霉病菌（Botrytis cinerea）[17]、樱桃茎腐病菌（Phy⁃tophthora nicotianae）[18]等抑制作用显著。由于植物源杀菌剂易降解且对环境友好，林间防治时可适当选用。

本研究只对9种药剂的单剂进行了室内毒力测定，关于化学药剂之间的复配剂、化学药剂与植物源药剂复配剂是否具有增效作用以及在林间的防治效果等，还需进一步研究。