直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查对新生儿溶血病的 诊断价值研究

张玉芹，李 岩，张文哲，刘利华

（1.济宁医学院附属医院输血科，济宁 272000；2.济宁医学院附属医院检验科，济宁 272000）

新生儿溶血病（hemolytic disease of thenewborn，HDN）是指由于母婴血型不合，引起免疫性溶血性贫血、黄疸的一类疾病［1］。胎儿的血型基因通常由父母双方决定，而婴儿从父亲方面遗传了母亲所缺乏的红细胞抗原，刺激了母亲的免疫系统，并产生IgG 抗体通过胎盘进入胎儿体内，从而导致抗原抗体免疫反应，引起新生儿红细胞溶血被破坏［2］。目前临床主要通过直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验对HDN 进行确诊［3］。通常母婴ABO 型引起的HDN 较为常见，Rh 血型所致的HDN较为少见，但其导致的HDN 溶血病严重程度远高于其他血型，预后较差，因而在临床中需进行不规则抗体筛查，从而排除不规则抗体的存在［4］。本研究探究直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查对新生儿溶血病的诊断价值，以期为临床诊断与防治HDN 提供依据，报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2018 年8 月～2020 年8 月来送检的216 例新生儿及其母亲血液样本，纳入标准：①新生儿临床表现为高胆红素症，怀疑为HDN，②均为出生14d 内新生儿；③患儿母亲非近亲结婚。排除标准：①患儿母亲存在输血史、过敏史；②患儿母亲存在血液系统病史；③存在严重心脏、肝、肾重大疾病或脑部严重缺血缺氧患儿；④其他原因引起的黄疸。男110 例，女106 例，平均日龄（3.98±2.06）d。

1.2 检测方法 采用EDTA-K2 抗凝管采集患儿及其母亲静脉血3.0～5.0mL，ABO、Rh 血型鉴定采用血型卡进行检测；采用溶血3 项试验（直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验）诊断HDN，若母婴之间ABO、Rh 血型不同，需进一步进行不规则抗体筛查试验，所有操作按《全国临床检验操作规程》［5］及试剂说明书参照执行。①直接抗人球蛋白试验采用试管法，试管法：将患儿血液样本中血清及红细胞进行分离，将红细胞用0.9%NaCl 溶液洗3 次，配成3～5%的悬液。取红细胞悬液1 滴加广谱抗人球蛋白试剂2 滴，离心，观察其结果。②抗体释放试验：取压积红细胞1mL，用生理盐水洗3 次后，加等体积生理水混匀，置于55℃水浴箱中10min，取出离心留上层清液，加入待测抗体对应抗原红细胞，放置37℃水浴30min 后，采用生理盐水离心清洗3 次，加入抗人球蛋白试剂，离心后取出观察凝聚强度。③游离抗体试验：取洁净试管做好标记，加入新生儿血清2 滴，分别加入标准A、B、O 红细胞悬液1滴，37℃水浴30min，采用生理盐水清洗3 次，除去上清液后，加入抗人球蛋白试剂Ig-G 2 滴，离心后，观察有无聚聚。④不规则抗体筛查：按照长春博讯生物技术有限责任公司抗人球蛋白检测卡说明书进行。⑤母亲血清抗体效价检测：取孕妇血清200μL，加入等量2-Me试剂处理血清中Ig-M 抗A、抗B 抗体，消除干扰后，采用盐水倍比稀释法测定Ig-G 抗体效价。

1.3 判断标准 直接抗人球蛋白试验以出现凝聚为阳性，抗体释放试验、游离抗体试验以可与新生儿红细胞反应的抗体为阳性。HDN 诊断标准［6］：溶血3 项实验均为阳性可确诊为HDN；如仅有抗体释放试验阳性也可确诊为HDN；直接抗人球蛋白试验或游离抗体试验为阳性+抗体释放试验阳性也可确诊为HDN，单独直接抗人球蛋白试验或游离抗体试验为阳性不可确诊为HDN。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0 统计学软件进行统计分析，计量资料以mean±SD 表示，采用t 检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 男性与女性新生儿中HDN 发生率比较 在216例送检血样中，确诊为HDN 的患儿共99 例，其中男性48 例，女性51 例，两者比较差异无统计学意义（P＞0.05），结果见表1。

表1 男性与女性新生儿中HDN发生率比较（n，%）

2.2 ABO 系统及Rh 系统中HDN 发生率比较 在ABO 系统患儿中，HDN 发生率为50.27%，Rh 系统HDN 发生率为17.24%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05），Rh 系统中发生HDN 的1 例为抗-E 溶血，4例为抗-D 溶血，结果见表2。

表2 ABO系统及Rh系统中HDN发生率比较（n，%）

2.3 A、B 血型发生HDN 结果 在187 例ABO 系统患儿中，A 型发生HDN 的概率为62.20%，B 型为40.95%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05），结果见表3。

表3 A、B血型发生HDN结果（n，%）

2.4 溶血相关实验结果 99 例诊断为HDN 患儿中，单独抗体释放试验为阳性患儿2 例（2.02%），直接抗人球蛋白试验+抗体释放试验阳性0 例，游离抗体试验+抗体释放试验阳性55 例（55.56%），三项试验均为阳性患儿42 例（42.42%），结果见表4。

表4 溶血相关实验结果

2.5 抗体效价 在187 例ABO 系统患儿中，抗体效价＜64 患儿共112 例，HDN 发生率为36.36%，抗体效价=64 患儿共34 例，HDN 发生率为79.41%，抗体效价=128 患儿共23 例，HDN 发生率为86.96%，抗体效价=256 患儿共18 例，HDN 发生率为88.89%；抗体效价=64、抗体效价=128 抗体效价=256 患儿的HDN 发生率均高于抗体效价＜64 患儿的HDN 发生率，差异有统计学意义（P＜0.05），结果见表5。

3 讨论

HDN 是常见的新生儿免疫溶血性疾病，临床表现为不同程度的贫血、黄疸、肝脾肿大等症状［7］。在母体妊娠中，母婴血液系统独立，而在妊娠后期会出现胎盘局部破裂出血，胎儿红细胞进入母体，当胎儿从父亲方面遗传来的红细胞抗原为母体缺乏时，会刺激母体产生免疫性抗体IgG，又经过循环进入胎儿体内，使其产生不同程度的溶血现象，从而出现HDN 的症状［8］。虽然大部分患儿临床症状较轻，但是高胆红素症会导致神经损害，严重者可出现全身水肿、核黄疸，甚至导致死亡，因此早期诊断HDN 并及时进行治疗尤为重要［9］。临床一般采用溶血3项试验诊断HDN，直接抗人球蛋白试验是检测新生儿红细胞是否存在IgG 类抗体致敏性，由于新生儿红细胞抗原发育不完全，其红细胞所带抗原部位数目只有成人红细胞数目的25%～50%，会导致直抗试验出现假阴性，因此还需进行游离抗体试验、抗体释放试验，这两项则是检测患儿血清中IgG 类抗体存在情况［10-11］。我国常见的是ABO 系统的HDN，但是Rh 血型系统较为少见，但其预后较差，仍需要通过不规则抗体筛查进行确诊［12］。

表5 抗体效价

本研究中，在216 例送检血样中，确诊为HDN 的患儿共99 例，其中男性48 例，女性51 例，两者比较差异无统计学意义，说明性别对患病率无明显影响。在送检血样中，86.57%为ABO 系统患儿，其HDN 发生率为50.27%；13.43%为Rh 系统，其HDN 发生率为17.24%，两组HDN 发生率比较有差异，证实ABO 系统的HDN 患病率高于Rh 系统。人体血清中极少见天然的Rh 抗体，多因妊娠或输血引起，因此在临床实践中，对HDN 患儿进行不规则抗体筛查意义重大，有助于避免其他血型系统抗体引起的HDN 漏检［13］。红细胞血型系统中最复杂的系统即Rh 系统，按照免疫原性，强弱程度为D ＞E ＞c ＞C ＞e，一般常规检测D 抗原，而本研究中，Rh 系统中发生HDN 的1 例为抗-E 溶血，4 例为抗-D 溶血，说明在临床中应加强对其他分型检测。临床上通常仅考虑RhD HDN，而忽略了其他分型，但约52.12%的E 抗原阴性患者妊娠或输血中会产生抗E，且随二胎政策开放，其他Rh 分型HDN 发生率不断升高，因此需加强对其他分型检测［14］。

在187 例ABO 系统患儿中，A 型发生HDN 的概率为62.20%，高于B 型的40.95%，说明A 型HDN 发生率高于B 型。因为胎儿红细胞上的A 位点（即抗原决定簇），较B位点多，因此A 型血婴儿发生HDN 率高于B 型，这与前人研究［15］较为一致。溶血3 项试验临床操作简单便捷，能为临床早期诊断提供依据，为临床治疗提供参考。本研究中，99 例诊断为HDN 患儿中，单独抗体释放试验为阳性患儿2 例（2.02%），直接抗人球蛋白试验+抗体放释放验阳性0 例，游离抗体试验+抗体释放试验阳性55 例（55.56%），三项试验均为阳性患儿42 例（42.42%），证实应用溶血3 项试验能为HDN 的预防和治疗提供有价值的诊断依据。本研究中，随ABO 系统母体效价升高，HDN发生率也在升高，而抗体效价=64、抗体效价=128 抗体效价=256 患儿的HDN 发生率均高于抗体效价＜64 患儿的HDN 发生率，说明抗体效价≥64 视为有发生HDN的风险，且抗体效价越高，发生HDN 的风险越大，但是ABO 系统HDN 的严重程度也不能由单一的效价高低进行判断，也会受到胎盘屏障作用等影响［16］。

综上，早期进行溶血3 项试验及不规则抗体筛查，对早期确诊HDN 及防治疗具有较好价值。