丁子香酚和香芹酚可溶液剂气相色谱分析方法

王广成 许艳秋 陈丙坤 谢树林 吴春先 高立明

(四川省农药检定所，四川成都，610041)

1 前言

丁子香酚，又名邻丁香酚、4-烯丙基-2-甲氧基苯酚等，主要存在于丁香油、肉桂叶油、肉桂皮油、樟脑油和肉豆蔻油等中,作为治疗性杀菌剂,丁子香酚具有杀菌谱广、毒性低的特点,能迅速治疗多种农作物、水果感染的真菌、细菌性病害[1-3]；香芹酚:，又名2-甲基-5-异丙基苯酚等，广泛存在于天然植物的精油中，目前主要用作食品添加剂和饲料添加剂等,同时，香芹酚还用作植物源生物农药,具有杀虫(螨)、杀菌防病及调节植物营养作用[4-6]。丁子香酚和香芹酚同为植物源生物农药，都具备高效、低毒和环境友好的特点，作为新型环保农药有较大使用前景。

目前，国内外关于在中药材、兽药和饲料等中的丁子香酚和香芹酚的气相色谱或液相色谱分析方法已有相关报道[7-12]，但采用程序升温的气相色谱内标法同时检测丁子香酚和香芹酚的质量分数的方法未见报道，因此本文建立了丁子香酚和香芹酚的程序升温气相色谱内标分析方法，为丁子香酚和香芹酚的质量检测提供了简便、有效的分析方法。

2 实验部分

2.1 仪器

Agilent7890A气相色谱仪(带FID检测器和工作站，安捷伦科技(中国)有限公司)；色谱柱：(Agilent DB-1 30m×0.32mm×0.25μm，安捷伦科技(中国)有限公司)。

2.2 试剂和溶液

丁子香酚标准品(98.5%，山东西亚化学股份有限公司)；香芹酚标准品(98.5%，山东西亚化学工业有限公司)；丁子香酚·香芹酚可溶液剂(丁子香酚1.6%，香芹酚0.5%，XX公司生产)；磷酸三苯酯(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)；丙酮(分析纯，成都市科隆化学品有限公司)；内标溶液配制：称取磷酸三苯酯0.6g于100 mL容量瓶中，加入丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

2.3 色谱操作条件

柱温(程序升温)：120℃保持2min，以15℃/min升至280℃，保持10min；气化室温度：280℃；检测器温度：280℃；载气(N2)：1.0 mL/min；氢气(H2)：40mL/min；空气(Air)：400mL/min；分流比：50∶1；进样体积：1 μL；保留时间：香芹酚约5.6 min、丁子香酚约6.1 min、磷酸三苯酯约13.1min。典型色谱图见图1和图2。

1-香芹酚(5.638min) 2-丁子香酚(6.146) 3-磷酸三苯酯(13.100min)

1-香芹酚(5.640min) 2-丁子香酚(6.148) 3-磷酸三苯酯(13.100min)

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制

称取丁子香酚标样0.09g(精确到0.0002 g)、香芹酚标样0.03g(精确到0.0002 g)于25.00mL容量瓶中，用移液管准确添加5.00mL内标溶液，加入适量丙酮超声溶解，冷却至常温后用丙酮稀释定容至刻度，备用。

2.4.2 试样溶液的配制

称取试样5.5g(精确至0.0002 g)于25.00 mL容量瓶中，用移液管准确添加5.00mL内标溶液，加入适量丙酮超声溶解，冷却至常温后用丙酮稀释定容至刻度，加入无水硫酸钠脱水，取上清液备用。

2.4.3 测定

在上述色谱条件下，待仪器稳定且基线平稳后，连续进入多针标样溶液，直至相邻两针丁子香酚(香芹酚)与磷酸三苯酯的峰面积比值的相对变化<1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的次序进行测定。

2.5 计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针丁子香酚(香芹酚)标样峰面积和内标物峰面积的比值分别进行平均，试样中丁子香酚(香芹酚)的质量分数ω按下式计算：

式中：r1——标样溶液中丁子香酚(香芹酚)峰面积与内标峰面积比值的平均值；

r2——试样溶液中丁子香酚(香芹酚)峰面积与内标峰面积比值的平均值；

m1——称取丁子香酚(香芹酚)标样的质量，g；

m2——称取试样的质量，g；

ω1——标样中丁子香酚(香芹酚)的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 内标溶液的选择

为了准确测定香芹酚、丁子香酚的质量分数，需要选择一合适内标物，本文使用癸二酸二丁酯、磷酸三苯酯、邻苯二甲酸二丁酯等多种常用的内标物质进行试验，样品在7—10min有杂质干扰，其中邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯与待测样品中的杂质出峰位置重叠，干扰其含量的测定，磷酸三苯酯的保留时间为13.1min，在待测物质后面，与样品中的有效成分分离良好，且没有杂质干扰，样品各组分杂质能达到较好的分离，峰形对称。通过对相同条件下的出峰情况的比较，确定磷酸三苯酯为内标物质。

3.2 分析方法的线性相关性

分别称取98.5%丁子香酚标准物质0.0224g、0.0647g、0.0829g、0.1028g、0.1974 g于25.00mL容量瓶中，准确添加内标溶液5.00 mL(磷酸三苯酯质量浓度为6.074mg/mL)，用丙酮溶解并稀释定容。按上述色谱操作方法测定，以丁子香酚与磷酸三苯酯的质量比为横坐标，峰面积之比为纵坐标绘制标准曲线，得到丁子香酚的线性方程为y=0.9247x-0.0008，R2=0.9998。结果见表1和图3。

图3 丁子香酚分析方法的线性相关性图

表1 分析方法的线性相关性试验结果

分别称取98.5%香芹酚标准物质0.0196、0.0286、0.0327、0.0373、0.0572g于25.00 mL容量瓶中，准确添加内标溶液5.00 mL(磷酸三苯酯质量浓度为6.074mg/mL)，用丙酮溶解并稀释定容。同样条件下对香芹酚进行测定，以香芹酚与磷酸三苯酯的质量比为横坐标，峰面积之比为纵坐标绘制标准曲线，得到香芹酚的线性方程为y=1.1298x-0.0251，R2=0.9998。结果见表2和图4。

表2 分析方法的线性相关性试验结果

图4 香芹酚分析方法的线性相关性图

3.3 分析方法的精密度

对同一份含有丁子香酚和香芹酚可溶液剂试样采用上述方法进行5次平行分析测定，测得试样中丁子香酚平均含量为1.63%，标准偏差为0.0152，变异系数为0.93%；香芹酚平均含量为0.558%，标准偏差为0.00445，变异系数为0.79%，经由Horwitz公式检验，方法的精密度结果符合要求，数据见表3。

表3 分析方法的精密度试验结果

3.4 分析方法的准确度

于25.00 mL的容量瓶中称取适量已知含量的丁子香酚和香芹酚可溶液剂为本底，平行称取5份，分别加入一定量的丁子香酚标样和5.00mL香芹酚标准溶液(2.82mg/mL、2.74mg/mL)，准确加入5.00 mL内标溶液，用丙酮稀释定容，无水硫酸钠脱水，取上清液备用。按上述色谱条件对丁子香酚(香芹酚)的质量分数进行测定并计算回收率。实验获得了丁子香酚的平均回收率为99.99%，香芹酚的平均回收率为100.25%，结果见表4。

表4 分析方法的准确度试验结果

4 结论

本文通过对气相色谱分析条件的选择与优化，建立了丁子香酚和香芹酚可溶液剂的程序升温气相色谱内标分析方法。实验结果表明：本方法对丁子香酚和香芹酚质量分数测定的准确度和精密度高、线性关系良好，并且操作简便、效率高，可以作为丁子香酚和香芹酚复配制剂的有效分析方法。