三种不同方法检测乙型肝炎病毒表面抗原阳性结果分析

周洁玲，詹宇基（湛江市职业病防治所，广东 湛江524000）

乙型肝炎病毒（HBV）感染具有发病率高、传染性强的特点，目前乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）是HBV感染的主要标志物，但HBsAg检测中受仪器、样本、操作方法等因素的影响，加上大部分患者感染初期血浆中HBsAg浓度较低，易造成漏诊现象，不利于患者的早期治疗及疾病防控［1，2］。本研究着重分析胶体金免疫层析法（GICA）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测、化学发光免疫分析法（CMIA）检测HBsAg阳性结果，旨在改善HBV感染的诊断现状。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月～2019年12月在我所体检发现的疑似HBV感染患者235例作为研究对象，其中男130例、女105例；年龄18～55（35.46±3.80）岁；体质量49～70（58.60±3.85）kg。所有体检人员均签署知情同意书。

1.2 方法 清晨采集所有患者空腹静脉血5ml，常规分离血清，取上清液检测；保证标本未出现脂血、溶血、黄疸等现象。

1.2.1 GICA检测 使用HBsAg胶体金试剂（潍坊市康华生物技术有限公司，条型：50人/盒）检测，将血清样本滴入试管中，将测试点有金标记抗体端插在血清内。判断标准：测试条纤维素膜上出现2条红色线即为HBsAg阳性，仅出现1条红线且靠近吸水滤纸端为阴性，若无红色线条出现为检测失败。严格按照仪器操作手册及试剂使用说明操作。

1.2.2 ELISA检测 根据双抗体夹心法原理，使用抗HBsAg单克隆抗体包被酶联反应板（12孔×8条），将试管中试剂移至18℃～25℃的室温下30min，将50ml的洗液使用去离子水稀释20倍后摇匀备用，将待测样本使用稀释液稀释后，反应板中每孔加100μl，并设阴性对照孔，置于37℃环境中温育1h后去除孔内液体，洗涤液注满各孔，静止5s后甩干，重复5次后拍干，每孔加入显色剂A、底物显色液各50μl，轻轻震荡后置于室温暗处显色5～10min，再于每孔中加入50μl酶结合物稀释液，选择450nm的酶标仪波长，先试用空白孔校零，后测定各孔的A值。结果判断标准：Cut off值=2.1×N（为阴性对照平均A值），N值应＜0.15，否则试验不成立。

1.2.3 CLIA检测 选择全自动化学发光免疫分析系统（迈瑞公司，型号：CL-1200i）及仪器配套的HBsAg试剂、校准品、质控品，操作步骤严格按照说明书进行，以检测结果＞0.08IU/ml为HBsAg阳性。

1.3 观察指标 （1）记录三种检测方法的HBsAg阳性检出率。（2）以HBV-DNA检测结果为金标准，评估GICA、ELISA、CLIA检测HBsAg阳性的灵敏度、特异度、准确度，以a表示真阳性，b表示假阳性，c表示假阴性，d表示真阴性，敏感度=a/（a+c），特异度=d/（b+d），准确度=（a+d）/n。

1.4 统计学方法 数据采用SPSS 23.0软件处理，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBsAg检测结果GICA、ELISA、CLIA的HBsAg阳性检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 GICA、ELISA、CLIA检测效能分析235例体检者中，经HBV-DNA检测确诊110例，CLIA检测HBsAg阳性的敏感度、特异度、准确度均高于GICA、ELISA，且ELISA高于GICA，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2、3。

表3 GICA、ELISA、CLIA检测HBsAg阳性结果比较

3 讨论

HBsAg是HBV表面的一种糖蛋白，是在患者感染约1～2个月内血清中出现的一种特异性标记物，维持时间较长，甚至可维持终生，且HBsAg水平异常可表明机体出现与HBV感染有关的肝硬化、肝癌、肝炎等疾病［3，4］。因此，选择准确的HBsAg检测方式对早期诊治HBV感染意义重大。

本研究结果显示，CLIA检测HBsAg阳性的敏感度、特异度、准确度均高于GICA、ELISA检测，且ELISA高于GICA。分析原因在于，GICA具有操作简单、步骤简单、获得判断结果快等优点，GICA受外界因素影响较小，检测成本较低，且无需专业的辅助仪器设备，对操作人员技术水平的要求较为宽松［5，6］。但GICA无法进行定量分析，仅能用于定性分析，适用于门诊、急诊、流行病学调查等，GICA诊断HBV感染的敏感度较低，易造成漏诊现象，不利于患者早期诊治。ELISA作为常用HBsAg检测方式，具有检测设备要求低、无放射性核素污染等优点，可及时对HBsAg进行定性分析，但ELISA检测过程受到洗涤、反应、加样本量时间、试剂平衡时间、样本溶血浓度等因素的影响，影响灵敏度。此外，ELISA检测过程中若使用双孔检测，则易出现假阴性结果，且ELISA操作中存在人为误差，检测的加样、洗板等重复操作，易影响诊断准确度，故严格掌控检测的流程与注意事项较为关键［7，8］。CLIA是一种综合了电化学发光技术的检测方式，通过超顺磁性微粒包被技术、酶标记技术，可增加检测的敏感度，且CLIA通过化学发光微粒子免疫分析系统可实现检测自动化、标准化，继而缩短检测时间，降低漏诊率，同时能减轻医务人员压力，检测结果直观可靠，利于临床早期准确诊断，为后续治疗提供依据，但CLIA检测的仪器、试剂等成本较高，较多基层单位无法作为常规检测方式，推广存在一定困难［9，10］。

表2 GICA、ELISA与CLIA检测效能分析（n）

综上所述，三种检测方法中，CLIA检测HBsAg阳性敏感度、特异度、准确度最高，ELISA其次，GICA最低，建议优先选择CLIA，ELISA、GICA可在需要时作为补充或替代。