HR-HPV感染患者微量元素与阴道微环境中细胞因子的相关性研究

王珊珊，任静静，程旭红

（新乡市中心医院检验科，河南新乡 453700）

高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）持续感染是宫颈癌发生的必要因素，但仅存在HR-HPV 感染不足以将已感染细胞转化为肿瘤细胞，也可能是HR-HPV 感染病程中炎性反应和免疫反应的调控发生了改变［1-2］。微量元素通过多种途径调节炎症反应及免疫细胞因子的分泌，多项研究证实，微量元素含量异常与HPV 感染、宫颈高级别病变及宫颈癌有密切关系［3-6］，但HR-HPV 患者微量元素与细胞因子的相关性研究报道较少且不全面。本研究探讨HR-HPV 感染患者血清微量元素及阴道微环境中细胞因子的差异，以及微量元素与细胞因子间的相关性，为寻找HPV 的治疗开辟新思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2017 年1 月至2019 年5 月新乡市中心医院收治的66 例感染HR-HPV 宫颈病变患者，根据临床诊断分为宫颈上皮内瘤（CIN）Ⅰ组20 例［平均年龄（43.02±8.43）岁］、CIN Ⅱ～Ⅲ组25 例［平均年龄（42.17±9.62）岁］及宫颈癌组21 例［平均年龄（45.17±8.89）岁］。择取同期该院体检的20 例健康女性作为对照组［平均年龄（47.33±7.81）岁］。纳入标准：①年龄≥24 周岁；②HR-HPV 感染经病理诊断确诊为CIN 患者、宫颈癌Ⅰ期患者；③无其他宫颈疾病和恶性肿瘤；④无自身免疫疾病或使用免疫抑制剂治疗史。排除标准：①妊娠、哺乳期妇女；②1 周内有性行为、阴道用药；③心、肺、肝、肾功能异常。本研究通过医院伦理委员会批准，患者及其家属知情同意。4 组一般资料比较，差别无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 阴道微环境中细胞因子检测 生理盐水充分冲洗阴道壁上1/3 及宫颈阴道部，用专用试剂管于后穹窿吸取灌洗液，离心取上清分装，-80℃保存备用。恢复室温后采用酶联免疫吸附法检测γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）水平，试剂盒购自武汉优尔生生命科学装备有限公司，操作步骤按试剂盒说明书进行。

1.2.2 清微量元素检测 采集外周静脉血分离血清，采用电子耦合-等离子体原子发射光谱仪进行检测血清中锌、硒、铁、锰、钴等微量元素。

1.3 统计学方法

数据分析采用SSPSS 19.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（）表示，比较用方差分析，进一步两两比较用SNK-q 检验；相关性分析用Pearson 法；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4 组血清中微量元素水平比较

4 组铁、锰、钴等微量元素含量比较，差异无统计学意义（P＞0.05），但均在正常值范围内。对照组血清中锌、硒水平＞CINⅠ组＞CIN Ⅱ～Ⅲ组＞宫颈癌组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 4 组阴道微环境中细胞因子水平比较

4 组阴道微环境中细胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-10、TNF-α 水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 血清中锌含量与阴道微环境中细胞因子的相关性分析

血清锌含量与阴道中IFN-γ、TNF-α 水平呈正相关（r=0.573 和0.612,P=0.007 和0.009）；而与阴道中IL-10、TGF-β 水平呈负相关（r=-0.193和-0.416,P=0.002 和0.003）。

表1 4 组血清中微量元素水平比较（）

表1 4 组血清中微量元素水平比较（）

注：1）与对照组比较，P＜0.05；2）与CIN Ⅰ组比较，P＜0.05；3）与CIN Ⅱ～Ⅲ组比较，P＜0.05。

表2 4 组阴道微环境中细胞因子水平比较（,pg/mL）

表2 4 组阴道微环境中细胞因子水平比较（,pg/mL）

注：1）与对照组比较，P＜0.05；2）与CIN Ⅰ组比较，P＜0.05；3）与CIN Ⅱ～Ⅲ组比较，P＜0.05。

3 讨论

微量元素对人类的生存和健康起着至关重要的作用，已有研究证实，微量元素与感染性疾病及恶性肿瘤的发生密切相关［3-7］。本研究发现，HR-HPV 患者的锌含量明显降低，且随着临床分期的加重锌含量显著降低，而各组铁、锰、钴水平比较无差异，这与ABULIZI 等［8］研究指出血清镍和硒低水平与HPV 感染和CIN Ⅱ有关的结果不一致，而与张媛媛等［9］和文彩虹［10］研究锌是宫颈疾病组、宫颈癌的保护性因素的结果一致。本研究结果提示，锌含量的降低与HR-HPV 感染的发生及宫颈病变的进展有关，这可能与微量元素是维持机体免疫自稳、免疫监测和免疫应答所必需、其在体内的失衡可造成免疫调节的紊乱有关。

IFN-γ、TNF-α 主要是由Th1 细胞分泌的炎性因子，参于细胞免疫发挥抑制病毒复制和抗肿瘤作用［11-13］。IL-10 是下调或抑制炎性因子分泌的Th2 细胞因子［14］，具有免疫抑制活性。TGF-β 是一类多肽类的生长因子，能够抑制机体淋巴因子活化杀伤细胞（ILAK）的产生和NK 细胞的活化、减少细胞因子的产生［14］。本研究结果显示，随着宫颈病变的发展，血清中IFN-γ、TNF-α 水平逐渐降低，而血清中IL-10、TGF-β 水平在CIN 组及宫颈癌组明显升高，表明HR-HPV 感染患者发生了免疫应答的紊乱及多种免疫细胞因子的异常，即机体发生了细胞免疫的调节异常，偏向于免疫抑制的Th2 细胞优势应答，且随着病变发展Th2 优势应答越明显，这与研究报道Th1/Th2 漂移是HRHPV 持续感染和宫颈癌发生的重要因素一致［15-17］。

本研究结果还发现，机体锌含量与阴道微环境中IFN-γ、TNF-α 呈正相关，而与阴道微环境中IL-10、TGF-β 呈负相关。这提示HR-HPV 感染病程中锌的缺乏与Th2 优势应答密切相关、造成CD4+T 细胞免疫应答紊乱，这可能是由于锌参与多种催化酶活性中心的构成。当机体内轻度缺锌时，血清胸腺素的活性显著下降，影响T 细胞功能，包括异基因细胞毒、抑制功能及IL-12 的产生功能等，造成Th1 和Th2 细胞功能的不平衡［18-19］。本研究HR-HPV 病毒载量CIN Ⅰ组＜CINⅡ～Ⅲ组＜宫颈癌组也证实Th1 细胞清除HPV 及抗肿瘤能力减弱。IL-10 通过激活JAK1/STAT3 信号传导通路促进E6、E7 癌基因蛋白表达，加剧癌变的发生；同时E6、E7 癌基因蛋白反式激活IL-10 过表达，形成恶性循环［20］。总之Th1/Th2 漂移是HR-HPV 持续感染和宫颈癌发生的重要因素。

综上所述，HR-HPV 感染患者血清微量元素锌显著降低，其与疾病发生、发展中免疫反应的异常密切相关。