结直肠癌组织Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达与预后相关性分析

杜阳峰，蔡娟，罗方，杨红飞，肖泽民

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，主要的临床症状为大便习惯改变、腹痛、便血等，严重者会危及生命安全[1-2]。该病早期症状不明显且难诊断，寻找一种有效的结直肠癌标记物受到广大研究者的青睐[3]。其中，锌指转录因子(Snail)能够促进上皮细胞-间充质细胞转换，抑制基因表达[4]；上皮黏附素(E-cadherin)对调节细胞粘附、维持细胞形态具有重要作用[5]；丝/苏氨酸激酶-3(pim-3)能够调控细胞增殖、分化、凋亡[6]；人表皮生长因子受体-2(Her-2)能够抑制癌细胞凋亡，促进分裂，增加其侵袭力，促进肿瘤血管生成[7]。鉴于此，本文为了分析结直肠癌组织Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达与预后相关性，选取2017年2月至2018年2月湖南省常德市第一人民医院肿瘤科接诊的32例结直肠癌患者组织标本和32例患者肠息肉组织标本进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月至2018年2月湖南省常德市第一人民医院肿瘤科接诊的32例结直肠癌患者组织标本，定为研究组。对照组选取同期在我院治疗的32例息肉患者肠息肉组织标本。研究组入选标准：①依据《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》[8]中的诊断标准，经活检和病理检查学确诊为结直肠癌患者；②预计存活期≥6个月者；③患者及家属意识清楚，且知情本次研究，在知情书上签字。排除标准：①存在听力、视力或精神障碍者；②一周内有特殊用药史者；③合并有其他心肝肾等严重并发症者。对照组纳入标准：①经肠镜检查和病理检查确诊为肠息肉患者；②患者及家属意识清楚，且知情本次研究，在知情书上签字。排出标准：①在听力、视力或精神障碍者；②不接受本次研究者；③合并有其他心肝肾等严重并发症者。本次研究已经得到医院伦理委员会的认证。

研究组患者32例，男21例，女11例；年龄27～71岁，平均年龄(48.33±16.12)岁；病理类型：管状腺癌、乳头状腺癌、黏液细胞癌各14、11、7例；分化程度：低中高分化分别为12、17、3例；肿瘤部位：结肠18例，直肠14例。对照组32例，其中，男20例，女12例；年龄27～73岁，平均年龄(48.51±16.63)岁。研究组和对照组在性别和年龄等方面的差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 试剂及药品

多克隆兔Snail抗体(批号：B20170208，采购厂家：北京奥博星生物技术有限责任公司)，稀释浓度为1∶100；多克隆兔E-cadherin抗体(即用型，批号：B20170110；采购厂家：北京中杉金桥生物技术有限公司)；多克隆羊pim-3抗体(批号：B20170204；采购厂家：美国Santa Cruz公司)；单克隆鼠Her-2抗体(批号：B20170210；采购厂家：武汉博士德生物工程有限公司)；免疫组染色(SP)试剂盒、二氨基联苯胺(DBA)显色试剂盒(采购厂家：北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3 方法

先用10%甲醛固定结直肠癌组织标本和肠息肉组织标本，然后用石蜡包埋进行切片，切片厚度为4 μm，并用免疫组织化学SP染色处理。按照购买试剂盒的操作说明进行操作[9]。

结直肠癌患者组织标本和肠息肉组织标本Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达情况：Snail阳性细胞：细胞核发现棕黄色颗粒；Her-2阳性细胞：细胞膜中发现棕黄色颗粒；E-cadherin阳性细胞：细胞核或细胞浆发现棕黄色颗粒；pim-3阳性细胞：细胞质发现棕黄色颗粒。在400倍镜下发现Snail阳性细胞、Her-2阳性细胞<10%判定为阴性，≥10%判定为阳性。发现pim-3阳性细胞、E-cadherin阳性细胞<25%判定为阴性，≥25%判定为阳性。

术后随访12个月后，统计患者术后生存率，并制作生存曲线，分析末次检查研究组结直肠癌组织标本Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达情况与预后的关系。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组结直肠组织标本Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达情况比较

相比于对照组的E-cadherin阳性率，研究组明显更低；相比于对照组的Snail、pim-3和Her-2阳性率，研究组明显更高，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。免疫组织化学SP染色Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2在正常结直肠组织标本和结直肠癌组织中的表达，如图1所示。

表1 研究组和对照组结直肠组织标本Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达情况比较 [n(%)]

2.2 研究组患者术后12个月的生存状况

研究组患者术后随访12个月，随访率为100%，其死亡率为25.00%(8/32)，生存率为75.00%(24/32),见图2。

图2 研究组患者术后12个月的生存曲线

2.3 研究组结直肠组织标本Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达与预后相关性分析

随着标本Snail、pim-3和Her-2阳性率提高，患者死亡率提高，预后较差，见表2。

表2 研究组结直肠组织标本Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达与预后的相关性 [n(%)]

3 讨论

结直肠癌在全球范围内恶性肿瘤中的发病率和死亡率均为第5位，且在我国呈明显上升的趋势，逐渐得到医学界的重视[10-11]。另外，该病早期症状不明显，随着癌症肿瘤的增大而出现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现为贫血、体质量减轻等全身症状[12]。研究表明[13-14]，该病病因不明，早期诊断标记物和改善预后的标记物不清楚。故研究与结直肠癌发生、预后、转移相关的标志物具有重要的临床意义[15-16]。

因此，本文为了分析结直肠癌组织Snail、pim-3、E-cadherin和Her-2表达与预后相关性，选取湖南省常德市第一人民医院肿瘤科接诊的32例结直肠癌患者组织标本和治疗的32例息肉患者肠息肉组织标本进行研究。结果显示，相比于肠息肉组织标本，结直肠癌患者组织标本E-cadherin阳性率明显更低，Snail、pim-3和Her-2阳性率明显更高。分析其原因，E-cadherin是存在于人体上皮细胞起连接细胞、传递细胞内信号的上皮黏附素。而E-cadherin的减少会使得细胞间黏结下降，有利于恶性肿瘤细胞的转移和扩散[15]，故本次研究发现，结直肠癌患者组织标本E-cadherin阳性表达率更高。另外，Snail是E-cadherin的靶基因，且能够抑制E-cadherin的转录，从而加速促进细胞间松动，促进恶性肿瘤细胞的扩散和转移。故E-cadherin阳性表达与Snail阳性表达具有负相关性。并且Her-2具有抑制癌细胞凋亡、促进分裂、增加其侵袭力、促进肿瘤血管生成的作用；pim-3具有促进癌细胞细胞增殖、分化的作用；同时有研究报道[17]，Her-2的活化能够导致细胞恶变潜能增加，还能够下调E-cadherin，增加肿瘤细胞的侵袭性；而pim-3能够使得凋亡分子Bad磷酸化，进而失去活性，使得肿瘤细胞凋亡减缓，急剧增加肿瘤细胞数量。

另外，本文对手术治疗的32例结直肠癌患者术后进行随访，其随访率为100%。并在随访过程中记录患者死亡率为25.00%(8/32)，生存率为75.00%(24/32)。且发现Snail、pim-3和Her-2阳性患者死亡风险较高。大量研究表明，E-cadherin的表达缺失会增加结直肠癌患者的死亡率[18-19]，这与本文研究结果一致。并且我们发现Snails、Her-2、pim-3的阳性表达与E-cadherin的阳性表达成反比，E-cadherin的表达缺失使得Snail、pim-3和Her-2阳性率增加，使患者死亡率增加，这均与研究报道的pim-3、Her-2高表达，患者预后极差结果一致[20]。提示说明E-cadherin的表达缺失，Snails、Her-2、pim-3的表达增强与直肠癌的预后有较大的相关性，其可作为预测直肠癌预后的重要因素。但是，本次研究中随着E-cadherin阳性率增加，患者生存率增加，死亡率降低，差异无统计学意义，这是由于本次研究所选样本数量较少所致。

综上所述，Snail、pim-3和Her-2参与了结直肠癌的发病进程，且与患者术后生存率有密切的关系。