达州县级兽医实验室检测能力比对结果分析

赵小波，刘俐君通信作者，李 成，杨 青，黎丁箕，郑永刚，王 勤

(1.达州市动物疫病预防控制中心，四川 达州 635000；2.达州市职业技术学院，四川 达州 635000)

0 引言

开展兽医实验室检测能力比对，是评价兽医实验室检测技术水平，加强兽医实验室质量控制的有效方法[1]，更是强化兽医实验室检测能力建设，提升动物疫病监测预警水平的重要举措[2]。2020年10月，达州市动物疫病预防控制中心组织全市7个县级兽医实验室进行了检测能力比对，并对检测结果进行分析，以期有针对性地改进提高。

1 材料与方法

1.1 比对项目

共设H5亚型禽流感抗体(H5-AI Ab)、O口蹄疫抗体(O-FMD Ab)和非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸检测3个比对项目。其中H5-AI Ab检测采用HI方法，按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)进行[3]；O-FMD Ab检测采用竞争ELISA方法、ASFV核酸检测采用RT-PCR方法，参照试剂盒说明书进行。

1.2 比对材料

1.2.1 检测试剂

市中心统一提供禽流感病毒H5亚型(Re-11)血凝抑制试验抗原(哈尔滨维科生物技术有限公司、批号2019009)和标准阴性、阳性血清；口蹄疫病毒O型竞争ELISA抗体检测试剂盒(批号020092017)和非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒(批号040222012)由青岛立见诊断技术发展中心提供；DNA提取试剂由各实验室自备。

1.2.2 比对样品

每个项目每个县准备比对样品5份，并设置重复样品。其中H5-AI Ab检测比对样品抗体滴度设置﹤1 log 2、4 log 2和7 log 2 3个参考值(哈尔滨维科生物技术有限公司制备)；O-FMD Ab、ASFV核酸检测比对样品设置阴性、阳性和弱阳性3个参考值(青岛立见诊断技术发展中心制备)。经市中心验证后制备盲样。

1.3 评判标准

H5-AI Ab检测：检测结果与参考值一致或±1；O-FMD Ab和ASFV检测：阳性、弱阳性样品检测结果为“阳性”，阴性样品检测结果为“阴性”。

2 结果

2.1 总体结果

3个比对项目平均符合率92.33%，H5-AI Ab、O-FMD Ab、ASFV核酸检测符合率分别为94.29%、94.29%、88.57%。2个县全部正确，3个县符合率为93.33%，如表1所示。

表1 各县实验室比对结果统计

2.2 H5-AI Ab

2个实验室检测结果与参考值完全一致；参考值为7log2的样品，1个实验室检测结果相差2个滴度，3个实验室相差1个滴度；参考值为4log2的样品，5个实验室相差1个滴度。各实验室的重复样品，检测结果一致。

2.3 O-FMD Ab

有5个实验室O-FMD Ab检测结果全部正确；A县1份阴性样品检测为阳性，B县将1份弱阳性检测为阴性。

2.4 ASFV核酸

3个实验室检测结果与参考值完全一致；另外4个县弱阳性样品检测结果为阴性。各县强阳性和阴性样品检测结果较准确，弱阳性的检出率低。

3 讨论

从比对结果看，达州市县级兽医实验室具备此3种方法检测相应动物疫病的能力。但个别实验室个别项目检测结果仍有偏差，还需查找原因加以改进提高。

血凝抑制试验受器材、稀释液、抗原、待检血清、红细胞、人员操作及其他因素影响，试验结果易出现偏差[4]。个别实验室测定抗原滴度较高，导致比对结果抗体滴度偏高。个别样品检测结果偏倚方向与其余4份样品不一致，可能是由于加样不准确或主观结果判读有误导致。而ELISA试验不易受主观因素影响，个别样品结果有误可能是加样造成污染或加样量不足导致。

为适应非洲猪瘟防控需要，2020年达州市首次将RT-PCR方法纳入比对项目。但ASFV弱阳性样品符合率较低，而影响RT-PCR试验的因素包括检测试剂和检测仪器的灵敏度、样品的病毒含量及人员操作等。本次出现假阴性的可能原因有如下几点。一是弱阳性样品CT值接近临界值，病毒含量低，各县核酸提取试剂的提取效率不同导致个别实验室检测失败。二是个别实验室购置的简易RT-PCR检测仪器灵敏度有待比对，移液器等未定期进行质量检定。三是病毒核酸检测技术刚在县级实验室普及，操作不熟练。工作实践中，环境、唾液、猪肉产品等样品病毒含量通常较低，所以病毒核酸检测能力急需提高。

4 结语

达州市县级兽医实验室检测能力仍需加强。一是强化实验室建设，配置精良仪器设备并定期检定更新。二是定期开展培训，提升人员素养。定期开展实验室间、检测人员间、仪器设备间比对，及时发现问题整改。三是完善实验室质量管理体系和生物安全管理体系，严格操作程序，规范实验活动。