miR-200a和YAP1在肺癌的不同表达及病理学意义

宰国真 李维山 何晓燕

非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者占肺癌患者的85%，且大约70% 的患者处于中晚期。近几年在我国发病率逐渐上升，患者的生活及健康受到严重影响［1-2］。近年来，随着遗传学、分子生物学等科学实验室检测方法的飞速发展，其在临床实践中的广泛应用，肺癌的诊断和治疗也取得了一定的进展［3］。然而缺乏有效的早期发现和诊断方法，大多数患者在被发现时失去了手术的机会，导致患者存活时间不到10%［4］。Yes 相关蛋白1（YAP1）是一种多功能细胞内心和转录共活剂，在正常细胞的信号转导和基因转录调控中发挥作用［5］。研究发现，miR-200a 的异常表达量与恶性肿瘤的发生和发展有一定的关系，miR-200a 的表达量在大多数恶性肿瘤中受到抑制或激活，其作用类似于肿瘤抑制基因或肿瘤基因［6］。目前YAP1 蛋白及miR-200a 在肺癌中的表达量研究很少，作用机制也不清楚。基于此，本研究为探讨非小细胞肺癌中miR-200a 与YAP1 表达量在癌组织和癌旁组织的相关性及其临床病理意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年7月至2020年6月本院和济源市肿瘤医院收治的259 例非小细胞肺癌患者术后切除的肿瘤组织及癌旁组织为本次研究对象。纳入标准：①本研究所有患者均符合《美NCCN 非小细胞肺癌治疗指南》［7］对非小细胞肺癌的诊断标准；②所选患者均为初次治疗且未接受放化疗，临床病理资料完整。排除标准：①患者合并全身感染或者其它肿瘤患者；②近3 个月有影响miR-200a、YAP1 表达量水平的相关药物及手术治疗者；③有严重心、肝、肾疾病等对本实验有干扰者。

1.2 RT-PCR 方法检测miR-200a及YAP1的表达量

实验所需引物由上海生工生物科技有限公司合成。miR-200a 上游引物：5′-AGTATGTCAGTAGCATGACGAGGT-3′；miR-200a 下游引物：5′-ATTGATGGCAGTAGCAGTAGCTAA-3′。YAP1上游引物：5′-ACCCACAGCTCAGCATCTTC-3′；YAP1下游引物：5′-TCATGGCAAAACGAGGGTCA-3′。

用TRIZOL 试剂（Invitrogen）按照操作说明书提取肺癌组织、癌旁正常组织的总RNA，提取的RNA 经NanoDrop2000C（美国，Thermo Scientific）检测其浓度和纯度，A260/A280 比值在1.9 左右视为后续实验使用样本。以其为模板严格按照PrimeScript RT reagent Kit 反转录试剂盒（日本，Takara）说明书要求逆转录合成cDNA，采用SYBR Green PCR 试剂盒（美国，Thermo Fisher Scientific）进行PCR，终体积25 μL。每个样本设三个复孔。扩增条件为：预变性95℃10 min，进入循环，95℃15 s，58℃30 s，扩增40 个循环。以U6 作为内参照校正，用2-△△Ct法分析基因的相对表达量。

1.3 统计学方法

数据处理运用SPSS 25.0 统计进行分析；计数资料以用（±s）表示，符合正态分布的计量平均数资料并行t检验或单因素方差分析；计数资料以n（%）表示，行卡方检验；预测效能应用ROC 曲线评价；P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-200a、YAP1 表达量与非小细胞肺癌病理特征关系

miR-200a 与YAP1 表达量在癌组织和癌旁组织的平均年龄、性别、病理类型、肿瘤大小比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。miR-200a 表达量与YAP1 表达量的分化程度、淋巴结转移比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 miR-200a 与YAP1 表达量在癌组织和癌旁组织中的比较

miR-200a、YAP1 在非小细胞肺癌组织表达量比癌旁组织较高，YAP1 的非小细胞肺癌组织表达量水平明显高于miR-200a 的表达量水平，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 miR-200a、YAP1 与非小细胞肺癌的关系

ROC 曲线显示，miR-200a 面积0.689 比YAP1的0.666 大，miR-200a 与非小细胞肺癌关系密切，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3、图1。

3 讨论

研究表明，YAP 是Hippo 通路的核心效应因子，其主要生物效应是调节细胞之间的接触抑制，保持细胞增殖和凋亡之间的平衡［8］。YAP 的过度表达量会导致接触抑制的丧失、细胞增殖过多和凋亡不足［9］。目前miR-200a 的异常表达量与恶性肿瘤的发生和发展密切相关。研究发现，miR-200a 在神经母细胞瘤中的表达量明显低于相邻组织。通过靶向AP-2γ 基因抑制肿瘤细胞增殖和肿瘤可以实现miR-200a 的上调节表达量，miR-200a在乳腺癌中的表达量减少［10-12］。在多种肿瘤细胞中发现miR-200a 基因过表达量促进肿瘤发生发展，但目前为止国内外相关文献研究甚少，所选患者中miR-200a、YAP1 在非小细胞肺癌组织表达量比癌旁组织较高。

本研究为探讨结果提示miR-200a 与YAP1 在非小细胞肺癌的增殖表达量中有重要意义。YAP1是Hippo 的主要下游效应因子，可以调节组织平衡、器官体积和肿瘤形成［13］。Hippo 的某些成分可以抑制细胞增殖，促进凋亡，调节干细胞和祖细胞的增殖，从而在调节器官体积方面发挥重要作用［14］。Hippo 信号失活可导致YAP1 去磷酸化积聚于细胞核中，然后向上调节转录因子，从而调节与细胞增殖、干细胞活性和抗凋亡相关的基因表达量［15］。

miR-200a、YAP1 对非小细胞肺癌ROC 曲线显示，miR-200a 的ROC 曲线下面积0.689 比YAP1 的0.666 大，差异有统计学意义。提示miR-200a、YAP1 表达量水平与非小细胞肺癌临床病理严重程度呈正相关。研究发现，miR-200a 可以通过靶向EGFR 抑制肺癌细胞的入侵和转移，也可以通过靶向TSPAN1 来抑制肺肿瘤细胞的入侵［16］。

本研究存在一定局限性。首先，本研究纳入的样本主要为鳞癌和腺癌，对于其他类型的非小细胞肺癌未进行纳入研究，可能导致研究结果不具有普遍性；其次，所选样本数量较少，研究结果可能存在差异；最后，未进行生存分析及长期随访，对非小细胞肺癌中miR-200a 与YAP1 表达量在癌组织和癌旁组织的相关性未能进行长期研究。

综上所述，miR-200a、YAP1 表达量水平与非小细胞肺癌临床病理严重程度呈正相关，对非小细胞肺癌诊断有一定预测价值。

表1 miR-200a、YAP1 表达量与非小细胞肺癌病理特征关系分析Table 1 Analysis of the relationship between the expression of miR-200a，YAP1 and the pathological characteristics of non-small cell lung cancer

表2 miR-200a 与YAP1 表达量在癌组织和癌旁组织中的比较（±s）Table 2 Comparison of the expression levels of miR-200a and YAP1 in cancerous tissues and adjacent tissues in cancerous tissues and adjacent tissues（±s）

表2 miR-200a 与YAP1 表达量在癌组织和癌旁组织中的比较（±s）Table 2 Comparison of the expression levels of miR-200a and YAP1 in cancerous tissues and adjacent tissues in cancerous tissues and adjacent tissues（±s）

组别癌组织癌旁组织t/χ2值P 值n 259 259 miR-200a 表达量1.78±0.52 0.62±0.06 35.664 0.000 YAP1 表达量2.78±0.79 1.62±0.50 19.968 0.000

表3 miR-200a、YAP1 与非小细胞肺癌的关系比较Table 3 Comparison of the relationship between miR-200a，YAP1 and non-small cell lung cancer

图1 miR-200a、YAP1 与非小细胞肺癌的ROC 曲线Figure 1 ROC curve of miR-200a，YAP1 and non-small cell lung cancer