猪流行性腹泻病毒与大肠杆菌混合感染的诊断与分析

李璐璐1，关昕睿1，王子璇1，郭晓玉1，穆英丽1，解佳1，陈立功1★，王学静1,2★

（1.河北农业大学动物医学院，河北保定071001；2.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000）

2020 年11 月， 河北某养殖场初生仔猪发生呕吐、腹泻，为了确定其病因，对该场发病仔猪进行了临床症状观察、病理学剖检、腹泻病毒分子生物学诊断和细菌学诊断，初步判定该场仔猪发生了猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）和大肠杆菌的混合感染，现将结果汇报如下。

1 发病情况

2020 年11 月初河北某养殖场初生仔猪开始发生呕吐、腹泻，主诉发病仔猪为该养猪场产房3～10 日龄仔猪， 其中3～7 日龄仔猪发病率为100%，死亡率为75%～100%；8～10 日龄仔猪发病率为60%，死亡率为20%～30%。

2 临床症状

发病仔猪主要表现为水样腹泻和排黄色稀便，部分仔猪哺乳后发生呕吐， 发病后2～3 天后开始脱水，脱水严重个体在昏迷中死亡。

3 剖检病变

取3 头病死猪剖检病变主要为消瘦。 腹股沟淋巴结、颌下淋巴结和肠系膜淋巴结呈红褐色（3/3）。胃内有未消化奶块，胃黏膜瘀血（3/3）。 小肠腔内充满黄色稀薄液体（3/3）。部分仔猪肾脏见针尖大小出血点（1/3）。其他脏器未见肉眼可见病变。

4 腹泻病毒分子生物学诊断

取腹泻死亡仔猪的小肠和肠系膜淋巴结等组织，立即进行研磨。 研磨病料经8000 转/分钟4℃离心2分钟， 提取离心后上清液中病毒RNA，然后进行反转录，取cDNA 分别进行PEDV、 传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、 猪 轮 状 病 毒 （Porcine rotavirus，PoRV） 及 猪 丁 型 冠 状 病 毒（Porcine deltacoronavirus，PDCoV） 的PCR 扩增。PCR 产物经2% 琼脂糖凝胶电泳， 结果表明腹泻仔猪病料呈PEDV 阳性（见图1），呈TGEV、PoRV和PDCOV 阴性（电泳图略）。

5 细菌学检测

取小肠内容物分别接种于麦康凯琼脂培养基平板、伊红美蓝培养基平板和十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基平板，37℃培养24～48 小时。 十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基平板未见细菌生长。 麦康凯培养基上可见边缘整齐、稍突起、表面光滑湿润， 粉红色或深红色的圆形菌落；伊红美蓝培养基上呈紫黑色带金属光泽的圆形菌落。 代表性单菌落纯化后进行革兰氏染色、镜检。 结果镜下可见纯化细菌为革兰氏阴性短小杆菌，不形成芽孢。根据以上特征可初步判断该细菌为大肠杆菌。 用纸片扩散（K-B）法检测该大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考、林可霉素、庆大霉素、新霉素、恩诺沙星、多西环素和红霉素等8 种抗菌药物的敏感性。 药敏试验结果表明，大肠杆菌仅对新霉素和庆大霉素高敏；对恩诺沙星低敏；对其余5 种药物均耐药。

6 讨论与分析

据猪场管理人员介绍，该猪场所有母猪均接种过PED 疫苗，但根据临床症状观察、病理学剖检、腹泻病毒分子生物学诊断和细菌学诊断结果，初步判定该猪场初生仔猪发生了猪流行性腹泻与大肠杆菌混合感染。 建议采取以下措施：

6.1 加强初生仔猪的饲养管理

图1 PEDV PCR 产物电泳结果

PED 可以发生于幼龄仔猪、育肥猪和母猪， 但10 日龄内哺乳仔猪更为易感PEDV。 2020 年冬季较为寒冷，因此，在冬季应做好猪舍，尤其是产房的通风、干燥和保温工作。

6.2 及时调查PED 免疫失败原因

本试验结果表明该猪场发生了PED 免疫失败的现象。 导致PED 免疫失败因素较多， 如免疫程序不合理；疫苗因运输、保存不当或疫苗取出后在免疫接种前受到日光的直接照射，均会影响免疫效果；此外，新的PEDV 变异毒株的出现， 也可能是当前该病流行的原因。

6.3 治疗方法

发病仔猪应立即隔离，及时对猪舍、用具等进行彻底消毒。 发病早期给腹泻仔猪注射敏感抗菌药物，适当补充葡萄糖氯化钠溶液，日龄稍大的仔猪部分成活。

6.4 优势血清型大肠杆菌疫苗的接种

产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)也可致仔猪发生腹泻，致初生仔猪腹泻大肠杆菌O 血清型众多，这可能是当前猪场很少使用大肠杆菌疫苗的原因。 因此，大肠杆菌耐药日趋严重情况下，应使用适于该地区的优势血清型大肠杆菌疫苗为母猪进行接种。