脂肪血浆制备冷沉淀的可行性研究*

曹鸿霖，刘晋洪，曾凌晓，徐筠聘,李庚娣，郑瑶玲

(1.广东省深圳市宝安区中心血站业务科 518101；2.广东省深圳市血液中心副主任室 518035；3.广东省深圳市宝安区中心血站供血服务科 518101；4.广东省深圳市血液输血医学中心研究所 518035;5.广东省深圳市宝安区中心血站质管科 518101；6.广东省深圳市宝安区中心血站献血服务科 518101)

血液是治疗缺血患者的特殊资源[1]。近年来临床用血需求大幅度增加，街头志愿无偿献血人数亦逐年增长，然而在血液捐献前由于食用过高的含脂肪食物或吸烟，都会造成献血中乳糜血，形成不同程度的脂肪血浆，这一现象在国内外输血技术研究中得到高度重视。如PEFFERT等[2]对无偿献血者的脂肪血浆进行研究指出，这种脂肪血浆含有一定量的三酰甘油，因脂肪血浆造成报废的情况仍然较多[2]。

无偿献血所获得血液的一种宝贵资源，向医疗机构提供安全优质的血液是采供血机构的宗旨[1],采供血机构除了对采集的血液进行输血相关传染病项目检测外，还要对血液的外观、量等项目进行控制。因此合理加工每一种成分血,减少血液的报废,也是成分血制备工作中的一项重要内容。脂肪血浆无统一判定标准，采供血机构工作人员采用目测法进行筛选，造成了血浆报废标准的不统一；其次，《全血及成分血质量要求》中血浆质量标准为外观无重度乳糜，说明轻度及中度脂肪血浆可以用于临床，但部分临床医生不易接受，也是造成血浆报废的重要因素之一。广东省深圳市宝安区中心血站近5年每年的脂肪血浆报废率居外观不合格率首位[3]，如何将脂肪血浆的报废率降低成为亟待解决的一大难题,目前有文献报道降低脂肪血浆的报废率主要方法是采血前的控制，主要的措施有:(1)血液机构在招募献血者时应根据不同季节、不同人群采取相应的对策，及时做好招募前的宣传、征询及献血前注意事项的告知工作，让献血者在献血前合理控制饮食[4]。(2)献血前两餐素食并餐后献血可大大减少脂肪血浆[5]。(3)在街头采血屋利用制作的脂肪血浆对照图谱进行采血前乳糜血的初筛，能有效降低脂肪血浆报废率[6]。以上文献报道停留在血液采集前对献血人员宣传方面，为了降低脂肪血浆报废率，避免血液浪费，本研究通过利用不同程度(轻、中、重度)的脂肪血浆制备冷沉淀，然后测定纤维蛋白原(Fib)及Ⅷ因子(FⅧ)水平，经过统计学分析其质量能否达到国标要求，外观判定是否符合国标要求，同时检测原料浆及冷沉淀中三酰甘油(TG)水平并进行统计学比较分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集广东省深圳市宝安区中心血站2016年9月至2017年2月成分科全血分离时报废的轻、中、重度脂肪血浆(全血6～8 h分离，传染性指标及转氨酶检测合格，每组50袋，每袋2 U)。

1.2 脂肪血浆判断

脂肪血依据中华人民共和国国家卫生行业标准WS550-2017《全血及成分血质量监测指南》中附录A测定血液乳糜程度的方法进行判断[7]，乳糜指数小于或等于2为轻度脂肪血浆；乳糜指数>2～5为中度脂肪血浆；乳糜指数大于5为重度脂肪血浆。

1.3 仪器与试剂

TG用LW100全自动生化分析仪(美国贝克曼公司)检测；FⅧ和Fib水平用CA550全自动凝血分析仪(德国西门子)检测；大容量低温离心机(上海桂宁实验器材有限公司，型号Cryofuge 6000i)；低温操作台、三洋4 ℃贮血冰箱、MBF21血浆速冻机、泰尔茂热合机。

1.4 方法

留取轻、中、重度脂肪血浆每组50袋,每袋2 U，留取10 mL测定TG水平。将所有留取样品(2 U，50袋)速冻。严格按照《血站技术操作规程》制备冷沉淀，将各组血浆按每层放置9袋互不重叠的方式置4 ℃冰箱10～12 h融化，然后离心分离(离心速度3 880 r/min，温度4 ℃，时间10 min)，将留下的20～30 mL血浆与沉淀物混合，1 h内速冻，制成冷沉淀凝血因子。将制备好的冷沉淀凝血因子在37 ℃水浴箱融化，测定Fib、FⅧ及TG水平。

1.5 统计学处理

2 结 果

2.1 冷沉淀FⅧ、Fib水平合格率

轻、中、重度3组脂肪血浆制备的冷沉淀FⅧ水平合格率分别为92%、6%，0,Fib合格率均为100%，见表1。

表1 轻、中、重度脂肪血浆制备的冷沉淀Ⅷ、Fib水平合格率[n(%)]

2.2 冷沉淀FⅧ、Fib水平比较

轻、中、重度3组脂肪血浆制备的冷沉淀Ⅷ因子水平只有轻度组达到国标要求，中、重度组不符合国标要求，Fib水平各组均达标，见表2。

表2 轻、中、重度脂肪血浆制备的冷沉淀FⅧ、Fib水平

2.3 原料浆和冷沉淀中的TG水平比较

原料浆与制备的冷沉淀中TG水平比较，轻、中度组差异有统计学意义(P<0.05)，重度组差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 原料浆和冷沉淀中的TG水平比较

2.4 冷沉淀外观要求

轻度组脂肪血浆制备的冷沉淀外观符合国标要求，中、重度组冷沉淀混有乳糜微粒外观不合要求，见图1。

A:轻度组；B：中度组；C：重度组。

3 讨 论

饮食中的脂肪被肠细胞吸收并以乳糜微粒和极低密度脂蛋白(VLDLs)的形式转运至循环系统[8]，当过多的乳糜微粒在人体未能完全吸收消化时，血清就从透明的淡黄色液体变成乳白色的黏稠液体，医学上称为“乳糜血”[9]，乳糜血又称“脂肪血浆”，主要是指血浆中TG水平过高[2]。在血液捐献中，脂肪血浆产生的主要原因是献血者在献血前进食高脂肪、高蛋白食物。输注脂肪血浆可能产生过敏、发热、脂肪栓塞等不良反应[10]，因此血站每年都会报废大量的脂肪血浆，这在一定程度上造成了血液资源的浪费。近年国内文献报道无偿献血血液因非检验因素报废的情况，以脂肪血浆占比最高[11-15]。为了避免血液浪费，国内外大部分学者都在研究如何从采血源头控制脂肪血浆的产生，如加大无偿献血知识宣传力度，普及无偿献血生理知识，严格体检征询等方法[9,16-17]，取得一定成效，但仍然不能完全杜绝。本研究的目的是探讨轻、中及重度脂肪血浆可否作为制备冷沉淀的原料浆，以达到再利用的目的，进一步降低其报废率。

冷沉淀是采用特定的方法，将保存期内的新鲜冰冻血浆在1～6 ℃融化，经离心移除大部分血浆后，剩余的冷不溶解物质于1 h内速冻呈固态而制备的成分制剂[18]，含有FⅧ、Fib、纤维结合蛋白、血管性血友病因子，主要应用于部分血液疾病的治疗和临床大出血及大量输血伴出血患者的抢救，近年来临床使用量呈明显增多趋势[19-21]。

新鲜冰冻血浆一部分在临床中用于补充凝血因子，另一部分作为制备冷沉淀凝血因子原料浆。本项研究利用全血采集6～8 h分离的不同程度脂肪血浆制备冷沉淀，从结果可以看出轻度组脂肪血浆制备冷沉淀中FⅧ水平合格率高(92%)，中度组低(6%)，重度组完全不合格(0)，Fib水平各组均合格(100%)。此外，轻度组冷沉淀中FⅧ水平均数达标，且95%CI也符合国标《全血及成分血质量要求》要求，中、重度组中FⅧ水平均数不达标，95%CI下限也不符合国标要求，Fib水平均数各组均达标。本项研究发现冷沉淀溶解后，在中、重度组残留的乳糜微粒不溶解影响检测结果，需要多次稀释才能测出FⅧ和Fib水平。由于FⅧ因子是一种不稳定的凝血因子，在体外半衰期较短易失活[22]，FENDERSON等[23]研究发现在任一温度下(1～6 ℃或21～24 ℃)保存4 h和24 h FⅧ水平显著下降，而Fib均未观察到水平的显著变化。在本研究过程，中、重度组多次反复稀释易造成FⅧ失活水平下降，导致冷沉淀质量不符合国标要求；Fib较为稳定[24]，各组水平均符合要求。

本研究显示，轻、中度组冷沉淀中TG水平较原料浆中的TG水平下降，两组均数比较差异有统计学意义(P<0.05)，但在中度组制备冷沉淀的过程中，乳糜微粒不能随血浆完全进入转移袋，仍有大部分残留在冷沉淀中；在重度组中，与原料浆中的TG相比冷沉淀中含量略有下降，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)，实际分离过程中乳糜微粒几乎不能进入转移袋，绝大部分残留在冷沉淀中。乳糜微粒可微溶于水、比重小，其血浆在4 ℃静置16～24 h可以分层(上层为奶油样，下层透明)[2]，本研究脂肪血浆(原料浆)在4 ℃冰箱放置时间为10～12 h，中、重度组的TG水平较高，乳糜微粒不能完全分层，这可能是造成冷沉淀中混有乳糜微粒的原因。

冷沉淀外观国标要求肉眼观察呈黄色澄清液体，无色泽异常、蛋白析出、气泡及重度乳糜等情况，本研究可以看出中、重度组冷沉淀中含有乳糜微粒，尤其在重度组更明显，且颜色混浊，完全不达标。

综上所述，根据本研究结果发现轻度脂肪血浆尚可作为制备冷沉淀的原料浆，中、重度脂肪浆则不能作为原料浆。此研究可为输血技术学发展提供科学参考数据。