NAFLD患者血清炎症因子、T细胞亚群水平及意义

罗娟,闫再宏,郭文有

非酒精性脂肪肝疾病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种代谢应激性肝损伤，与胰岛素抵抗(IR)和遗传易感性密切相关，其病理变化与酒精性肝病相似，但该病患者无过度饮酒史的临床病理综合症[1]。NAFLD患者罹患肝硬化、肝癌和其他相关并发症风险增加[2]。非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)是NAFLD进展的关键阶段，NASH的持续存在可能诱发肝癌的发生[3]。研究发现，多种细胞因子参与了NAFLD的病理生理过程，并在NAFLD的发展中发挥了关键作用，包括白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)以及白介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)[4]。肝脏是人体重要的免疫器官，在人体的免疫中发挥重要作用，T细胞是细胞免疫反应的效应细胞，其CD4+T细胞和CD8+T细胞亚群的数量和功能异常可能与慢性肝病进展的密切相关[5]。IL-1RA作为体内唯一一种天然拮抗剂，具有抗炎作用，能够减轻IL-1和IL-18引起的一系列生理和病理反应，但与NAFLD炎症程度及病程进展的相关性尚不明确。为了探讨NAFLD患者血清炎症因子、T细胞亚群水平及意义，本研究选取2018年1月至2019年12月在我院治疗的NAFLD患者进行研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2019年12月在我院就诊的NAFLD患者89例(NAFLD组)。其中非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者30例，男性19例，女性11例；年龄29～59岁，平均年龄(44.6±9.7)岁；ALT 67～310 U/L,平均(204.4±89.2)U/L；AST 58～266 U/L，平均(163.3±67.3)U/L。非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL)患者59例，男性35例，女性24例，年龄27～66岁，平均年龄(45.9±10.1)岁；脂肪肝程度：中度30例，重度29例。纳入标准：①患者符合《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南》中NAFLD的诊断标准[6]；②NAFL为中重度患者；③本研究经我院医学伦理委员会批准，患者及家属知情同意。排除标准：①入选前3个月有保肝药物治疗史；②有病毒性肝炎、自身免疫性肝病、肝豆状核变性等其他类型肝病；③其他因素导致的脂肪肝。采用年龄匹配原则，选取同期体检健康者60例作为对照组，NAFLD组和对照组一般资料比较见表1。

表1 NAFLD组和对照组一般资料比较

1.2 实验方法

清晨空腹抽取纳入对象6 mL静脉血，3 000 r/min离心10 min，取上清液，采用流式细胞法检测T细胞亚群CD4+、CD8+T细胞的水平，流式细胞仪购于常州必达科生物科技有限公司，操作过程严格遵循说明书。采用双抗夹心 ELISA 法测定血清IL-1RA、IL-1β、IL-18 IL-1RA 水平(ELISA KIT, R&D)。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 NAFLD组和对照组血清炎症因子、T细胞亚群比较

NAFLD组血清IL-1β、IL-18和CD4+T细胞明显高于对照组(P<0.05)，而IL-1RA和CD8+T细胞明显低于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 NAFLD组和对照组血清炎症因子、T细胞亚群比较

2.2 NASH和NAFL患者血清炎症因子、T细胞亚群比较

NASH和非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL)患者性别、年龄、吸烟和饮酒比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。NASH患者血清IL-1β、IL-18和CD4+T细胞明显高于NAFL患者(P<0.05)，而IL-1RA和CD8+T细胞明显低于NAFL患者(P<0.05),见表4。

表3 NASH和NAFL患者一般资料比较

表4 NASH和NAFL患者血清炎症因子、T细胞亚群比较

2.3 血清炎症因子、T细胞亚群鉴别NASH的价值

血清IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T细胞、CD8+T细胞诊断NASH的ROC曲线下面积分别为0.694、0.808、0.669、0.872和0.742，P均<0.05，见图1和表5。

图1 各指标鉴别NASH与NAFL的ROC曲线

表5 各指标对NASH与NAFL的鉴别诊断价值

3 讨论

NAFLD的关键步骤NASH的发病机制较为复杂，目前公认的机制是脂肪酸沉积和氧应激炎症因子的“二次打击理论”[7]。NASH已成为当今世界上最重要的公共卫生问题之一,临床NASH检测“金标准”肝活检具有局限性，探索简单且可重复的无创血清学检测已成为NASH的研究热点[8]。无创诊断是NASH诊断和治疗的必然发展方向，但目前缺乏令人满意的NASH指标无创诊断指标。

IL-1RA是一种由单核巨噬细胞分泌分子量为22～25 KD的酸性糖蛋白，与IL-1结构同源，可以竞争性地与IL-1受体结合而不激活靶细胞，抑制IL-1的生物活性，从而影响人体的病理和生理活动，在NAFLD发展进程中发挥抗炎作用[9-12]。本次研究结果显示，NAFLD患者的IL-1β水平显著高于对照组，而IL-1RA显著低于对照组，提示IL-1β在NAFLD患者中发挥促炎作用，而IL-1RA对炎症的抑制作用减弱。IL-18水平增加可以进一步激活T细胞和巨噬细胞分泌一系列炎性细胞因子和粘附分子，促进炎症的持续发展，使患者病情恶化，本次研究结果显示，NAFLD患者的IL-18水平明显高于对照组，发挥促进炎症发展的作用。NASH组的IL-1β和IL-18水平显著高于非NASH组，表明该指标与NASH患者的病情发展密切相关，并可能反映了NAFLD的严重程度。

肝脏作为人体的免疫器官，在免疫调节中具有重要作用，T细胞是执行细胞免疫反应并在体液免疫反应中起重要作用的效应细胞，可以分为CD4+T细胞和CD8+T细胞两个亚群[13-14]。CD8+T细胞对靶细胞具有细胞毒作用，对免疫应答中的主要应答细胞CD4+T细胞发挥调节性免疫抑制作用，两者相互影响维持人体细胞免疫反应的平衡[15-16]。研究表明，NAFLD患者机体免疫调节异常，NAFLD患者外周血T细胞亚群的变化可能参与NAFLD患者肝脏慢性损伤的进程[17-18]。本研究结果显示，NAFLD组外周血中CD4+T细胞水平明显高于对照组，而CD8+T细胞水平明显低于对照组；NASH组外周血CD4+T细胞水平明显高于NAFL组，CD8+T细胞水平亦更低。由NAFLD患者的T细胞亚群变化引起的细胞免疫紊乱的可能原因是患者机体反应性氧化代谢产物增加导致脂质过氧化、细胞因子增多。CD4+T细胞参与免疫应答过程，因此NAFLD患者机体CD4+T细胞增加，其活化后促炎性细胞因子大量分泌，发挥更强的促炎作用，导致促炎和抗炎作用失衡。NAFLD患者外周血中CD4+T细胞增加，人体的CD8+T细胞在一定程度上对CD4+T细胞起调节性免疫抑制作用，使人体处于免疫平衡状态，但是一旦失衡则表现为CD4+T细胞增加而CD8+T细胞减少。

血清学指标的检测具有简单易行的优点，可以动态观察NAFLD的发展过程，并直观地反映出临床治疗效果[19-20]。目前，关于NAFLD患者外周血T细胞亚群和炎性因子的变化及其与NAFLD和NASH进展和程度的相关性的研究很少。本研究通过检测NAFLD患者外周血IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T细胞和CD8+T细胞水平，结果显示血清IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T细胞、CD8+T细胞诊断NASH灵敏度和特异性较高，对于判断NAFLD的临床类型和程度具有一定的临床价值。同时，提示或可通过纠正免疫疾病来预防NAFLD的发展，为NAFLD提供新的思路。

综上所述，NAFLD患者血清IL-1β、IL-18、IL-1RA、CD4+T细胞和CD8+T细胞水平异常，在鉴别NASH中有一定诊断价值。