水温和孵化装置对大口黑鲈优鲈3号受精卵孵化的影响

肖善势，张爱菊，罗伟，郝雅宾，费晨阳，周志明*

(1.浙江省淡水水产研究所中国水产科学研究院东海水产研究所浙江研究中心 农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室，浙江 湖州 313001； 2.湖州湖旺水产种业有限公司，浙江 湖州 313000)

大口黑鲈(Micropterussalmoides)是鲈形目、太阳鱼科、黑鲈属的一种肉食性鱼类，原产美国密西西比河流域，于1983年引进中国，具有生长快速、抗病强、营养丰富且味道鲜美的特点，是我国重要的名优淡水养殖品种[1-2]。大口黑鲈优鲈3号是以大口黑鲈优鲈 1号与大口黑鲈北方亚种引进群体作为亲本选育出的新品种，其生长速度更快，比优鲈1号平均提高17.1%[3]。目前，大口黑鲈人工繁殖多是半人工的形式，即自然交配产卵、人工孵化[4]，而水温是人工孵化的关键因素之一。有研究[5-6]表明，水温可通过影响孵化酶的分泌及活性来影响孵化率：过低水温会放缓胚胎的发育速度；较高水温会影响胚胎的分裂、分化，降低孵化酶的活性。因此，设置适宜的孵化水温十分重要。至今，有关水温对鱼类胚胎发育影响的研究较多[7-11]，但由于大口黑鲈产黏性卵，繁殖时亲鱼将卵产在鱼巢上，受精卵计数困难，不利于计算孵化率和出苗率，有关大口黑鲈优鲈3号最适孵化温度的研究较少[4]。因此，本研究通过设置不同的温度梯度和孵化装置，探究大口黑鲈优鲈3号胚胎孵化的适宜水温及装置，以期为提高大口黑鲈优鲈3号孵化率和出苗率提供一定的数据参考。

1 材料与方法

1.1 受精卵的获取

试验在湖州湖旺水产种业有限公司的繁殖基地进行，亲鱼在公司温棚中培育。受精卵的获取采用人工鱼巢、自然交配产卵的方式获得。将两片50 cm×30 cm的棕片用铁丝固定在一起做成鱼巢，用竹片将鱼巢固定在亲鱼池池底，以鱼巢能平铺在池底为准。鱼巢距离岸边约1.5 m，鱼巢间距1.0～1.5 m。待观察到亲鱼产卵后将棕片取出，计数受精卵。

1.2 方法

试验设20、22、24、26和28 ℃共5个孵化用水温度梯度。孵化用水为基地沉淀池水经过滤、灭菌处理后的水，置于60 L加盖泡沫箱中。用加热棒进行控温，水温变化幅度不超过0.5 ℃。试验开始前一天将水温加热到设计温度，并开启增氧泵24 h连续曝气，孵化期间孵化水体溶氧在7 mg·L-1以上，pH 7.5～8.5。

取出后的棕片置于盆中，轻轻抖动棕片使黏附在其上的受精卵掉落，每300粒受精卵为一组置于泡沫箱中的孵化装置。孵化装置为自制孵化框(用80目筛绢网黏附在直径25 cm的带孔塑料筐内，框内外水体可自由交换，以保证孵化框内溶氧充足)和孵化盆(直径20 cm的不锈钢盆)。为避免水体温差过大对受精卵造成的应急反应，将泡沫箱内水体温度在2 h内缓慢从26 ℃逐步升/降到设置温度。孵化框组和孵化盆组分别设2次和3次重复。为保证水中溶氧充足，孵化盆组每4 h换水1次，更换用水为泡沫箱中的水。计算孵化率和出苗率[12]。

1.3 数据处理

用Excel 2013和SPSS 20.0对数据进行统计分析。采用独立样本t检验和单因素方差分析，P< 0.05为差异显著，P< 0.01为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 对受精卵孵化时间的影响

观察发现，在孵化盆组中试验4 h，26 ℃处理胚胎发育已至肌节效应期；28 ℃处理胚胎多数在肌节效应期，同时，有少量受精卵达到心跳期。试验12 h，28 ℃处理已全部出膜；26 ℃处理发育至出膜期，仅少数未出膜；24 ℃处理胚胎处于出膜期，但未出膜数量明显多于26 ℃处理；22 ℃处理仍处于心跳期，仅少量出膜；20 ℃处理处于心跳期，未发现出膜仔鱼。试验23 h，仅20 ℃处理少量未出膜，其他各处理均已完全出膜。孵化盆和孵化框的大口黑鲈优鲈3号受精卵在20～28 ℃水温下均可孵化，但各温度处理孵化所需时间不同，随着水温的升高仔鱼出膜所需时间逐渐变短，28 ℃处理出膜最快。

2.2 对受精卵孵化率和出苗率的影响

试验结果(图1)显示，2种孵化装置的孵化率不同，整体上随着水温的增高，孵化率呈先升高、后降低的趋势。除26 ℃水温处理孵化框组孵化率高于孵化盆组外，其他各温度下均低于孵化盆组。但独立样本t检验分析发现，孵化装置对孵化率的影响无显著差异。孵化盆中各温度处理出膜仔鱼在24～72 h陆续死亡，导致各温度处理平游仔鱼数量为0。孵化盆组中孵化率最大值和最小值分别出现在24和26 ℃处理，为67.3%和39.4%。

图1 在孵化盆和孵化框装置下不同水温处理的孵化率

采用孵化框孵化时，20～26 ℃处理孵化率和出苗率均呈增加趋势，在26 ℃达到最大值，分别为66.0%和62.5%(图1～2)；在28 ℃水温下孵化率和出苗率均最低，分别为27.2%和23.5%。多重比较发现，28 ℃处理孵化率同24和26 ℃处理孵化率之间差异显著，其余各处理之间差异不显著；26 ℃处理与20、22和28 ℃处理之间出苗率差异显著，24与28 ℃处理出苗率之间差异显著，其余各处理之间出苗率差异不显著。

图2 在孵化框装置下不同水温处理的出苗率

3 小结与讨论

鱼类属于变温动物，其整个生活史都不同程度地受到水温的影响。水温是决定鱼类胚胎发育时间、孵化率、出苗率的重要因子。在一定水温范围内，胚胎发育速度与孵化水温成正比，当水温升高时，发育加快；而当水温降低时则发育缓慢[13]。胡振禧等[14]研究发现，斑鳜胚胎发育最适水温为20～26 ℃，在此温度区间通过提高水温可缩短孵化时间，但当水温达28 ℃时，孵化率显著下降。也有研究[15]报道，大口黑鲈在17～28 ℃水温下可自然繁殖。本研究共设5个温度处理，发现水温在20～28 ℃时，大口黑鲈优鲈3号受精卵均可孵化，同时，温度越高胚胎发育越快，出膜时间越短，与四川华鳊(Sinibramataeniatus)[16]、拉萨裸裂尻鱼(Schizopygopsisyounghusbandi)[17]、大口黑鲈(Micropterussalmoides)[18]和条石鲷(Oplegnathusfasciatus)[19]等的胚胎发育对水温的响应一致。由此说明，在不影响孵化率的情况下，可以适当提高水温来缩短大口黑鲈优鲈3号受精卵孵化时间。试验结果显示，各温度处理下优鲈3号孵化时数小于吴庆龙等[20-21]的研究结果。分析可能是由于以下3个原因造成：1)人工控温使亲鱼池水温保持在25 ℃上下，水温较高；2)采集鱼巢前受精卵在高水温环境下已经开始发育；3)试验中为避免胚胎应激反应，逐步升/降温的过程中也可能对孵化时长造成一定的影响。

孵化盆和孵化框对孵化率的影响差异不显著。但孵化盆组出膜仔鱼陆续死亡，出苗率为0，可能是由于孵化盆水体过小，没有形成一定的水流，单个仔鱼占据的水体空间过小导致的结果；也可能是由于初孵仔鱼喜侧卧于鱼巢[20]，而孵化盆表面过于光滑，与天然鱼巢差异过大所致。说明在孵化盆中的小水体静水条件下可进行大口黑鲈优鲈3号的受精卵孵化，但不宜作为初孵仔鱼培育装置。

试验表明，孵化框的孵化效果较好，水温26 ℃时孵化率和出苗率均达最大值，分别为66.0%和62.5%。24和26 ℃处理孵化率、出苗率差异不显著，当水温达28 ℃时孵化率和出苗率显著低于24和26 ℃处理。冯晓宇等[4]研究认为，大口黑鲈优鲈1号孵化期间水温可控制在20～26 ℃，最佳孵化水温为22～24 ℃，与本研究结果基本一致，但最适孵化水温略低于本研究的24～26 ℃，可能与大口黑鲈多次产卵有关，不同批次的受精卵质量不同。鱼类胚胎孵化受孵化酶的影响，而水温则是影响孵化酶分泌及活性的重要物理因子，在适宜水温之内，提高水温可刺激孵化酶的分泌、加快孵化进程，但过高的水温会降低孵化酶的活性甚至是不可逆性的失活，导致胚胎畸形、死亡、无法出膜[22-24]。同时，较高的水温也不利于初孵仔鱼对卵黄囊的利用、生长和器官分化，导致初孵仔鱼体长较短[25-27]，进而影响出苗率。因此，研究认为，24～26 ℃是大口黑鲈优鲈3号的适宜孵化温度，在孵化时可尽量提高水温缩短胚胎发育时间。