不同产地白英中澳洲茄胺的含量测定

梁 锐，高太祥，赵 峰，李珊珊，王 瑞

（山西中医药大学，山西 晋中 030619）

白英为茄科茄属植物白英（Solanum lyratum Thunb）的干燥全草，又名鬼目草、白毛藤、毛千里光、金线绿毛龟、葫芦草等，以全草及根供药用，具有清热利湿、解毒消肿、抗癌等功效。白英为常用抗癌中草药，用于治疗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌等各种癌症，临床上应用越来越广泛［1-4］。对白英的化学成分及药理研究表明，白英主要含皂苷类、甾体生物碱类、有机酸、黄酮类等，是白英药理作用的主要有效成分［5-7］。本研究建立了HPLC 法测定白英中澳洲茄胺含量的方法，为石英药材的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

Agilent1260 高效液相色谱仪（安捷伦公司）；AB-135S 十万分之一电子天平（METTLER 梅特勒集团）；FA/JA 1004 万分之一分析天平（上海天平仪器厂）；KV5200 超声波仪（昆山超声仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（上海申胜生物技术有限公司）；澳洲茄胺对照品（MUST-12052101，成都曼思特生物科技有限公司）；白英对照药材（批号：121316-201003，中国食品药品检验研究院）；乙腈（色谱纯，GRACE COMPANY INC.）；乙酸乙酯（分析纯，天津市北辰方正试剂厂）；甲醇（分析纯，天津市进丰化工有限公司）；盐酸（分析纯，浓度：36%～38%，天津市耀华化学试剂有限责任公司）；氨水（分析纯，浓度：25%，天津市科密欧化学试剂有限公司）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；白英药材为购买或自采，经山西中医药大学鉴定教研室裴香萍副教授鉴定为茄科茄属植物白英的干燥全草。

2 含量测定

2.1 色谱条件

Agilent SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；进样量：10 μL。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

2.2 对照品溶液的制备

精密称取澳洲茄胺对照品1.0 mg 于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制得0.105 mg/mL 澳洲茄胺对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

称取白英药材（过50 目筛）0.5 g，精密称定，置于150 mL 三角瓶中，依次加入1 mol/L 盐酸10 mL 和甲醇20 mL，超声处理40 min，过滤。滤液转移至250 mL 圆底烧瓶中，向滤液中加入6 mol/L 盐酸12.5 mL，回流水解1 h，趁热挥去甲醇，放冷，用浓氨水调pH 值至10。用乙酸乙酯萃取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置于水浴锅上90 ℃挥干溶剂，残渣加甲醇少量多次溶解，定容于10 mL 容量瓶中，即得供试品溶液［8］。

2.4 标准曲线的制备

取对照品溶液，分别进样4、6、10、12、16、18 μL，测得澳洲茄胺的峰面积。以进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=4791.6X-230（r=0.999 6）。结果表明，澳洲茄胺对照品在0.4 μg～1.8 μg 范围内，呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

称取白英药材（浙江）0.5 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备，制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL 重复进样6 次，测定澳洲茄胺峰面积，计算其含量的RSD 值为0.7%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性实验

称取白英药材（浙江）0.5 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备，制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，在0、2、4、6、8、10、12、24 h 测定澳洲茄胺峰面积，计算其含量的RSD 值为3.1%。结果表明：澳洲茄胺在24 h 内有良好的稳定性。

2.7 重复性实验

称取白英药材（浙江）6 份，每份0.5 g，精密称定，按“2.3 供试品溶液的制备”项下方法制备，制得供试品溶液6 份，分别精密吸取供试品溶液10 μL，测定澳洲茄胺峰面积，计算其含量的RSD 为1.6%，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率实验

称取浙江白英药材6 份，每份0.25 g，精密称定，按“2.3 供试品溶液的制备”项下方法制备，用浓氨水调pH 值至10，分别加入0.105 mg/mL 澳洲茄胺对照品1 mL，用乙酸乙酯萃取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置于水浴锅上蒸干，残渣加甲醇少量多次溶解，定容于10 mL 容量瓶中，即得供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液10 μL，测定澳洲茄胺的峰面积，计算其回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验

2.9 专属性实验

精密移取甲醇溶剂10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，在澳洲茄胺的保留时间没有色谱峰出现，说明溶剂甲醇不影响澳洲茄胺的测定，方法的专属性良好。

2.10 样品含量测定

分别称取不同产地的白英药材0.5 g，精密称定，照“2.3 供试品溶液的制备”项下方法制备，制得不同产地的供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10 μL，测定澳洲茄胺峰面积并计算含量，各产地白英药材中澳洲茄胺含量见表3。澳洲茄胺对照品、对照药材和样品的色谱图见图1～3。

表3 白英药材中的澳洲茄胺含量

图1 澳洲茄胺对照品HPLC 色谱图（0.105 mg/mL）

图2 白英对照药材HPLC 色谱图

图3 白英药材（浙江）HPLC 色谱图

3 讨论

3.1 流动相的选择

本实验比较了不同的流动相：乙腈-氨水、乙腈-七氟丁酸、乙腈-水。结果表明，以乙腈-氨水作流动相，澳洲茄胺峰的拖尾现象比较严重；以乙腈-0.05%七氟丁酸（体积比为30∶70）作为流动相［3］，在本实验条件下没有出现色谱峰；以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，与其他两种流动相相比具有色谱图基线平稳、澳洲茄胺峰对称因子较好、澳洲茄胺峰与其他色谱峰分离度较好等优势。因此选择乙腈-水作为流动相。

3.2 测定波长的选择

澳洲茄胺在波长为207 nm 处有最大吸收，且在206～210 nm 吸光度值差别不大，为了减小基线噪音，设定测定波长为210 nm。结果见图4。

图4 澳洲茄胺对照品光谱图

白英作为一种抗癌消炎药，在现今社会中应用越来越广泛，建立一个有效的标准来控制白英的质量很有必要。大量研究发现，植物中的生物碱具有明显的抗肿瘤、抗菌消炎、镇痛等功效［9］，因此本实验选择澳洲茄胺进行含量测定。本研究通过采用HPLC 法测定不同产地白英中澳洲茄胺的含量，建立了方便、快速的白英中澳洲茄胺含量的测定方法，该方法精密度、稳定性和重复性均良好，为制定白英药材的质量标准提供了有价值的参考。