灰树花化学成分及质量标准研究进展

◎ 郑传奇，王 勋，陈 华，王 秋，支永明，刘 波

（贵州黔西南喀斯特区域发展研究院，贵州 兴义 562400）

灰树花（Grifola frondosa (Fr.) S. F. Gray）是一种极具开发前景的高档珍稀食、药两用菌[1]，属担子菌亚门，层菌纲，无隔担子菌亚纲，非褶菌目，多孔菌科，灰树花属，性甘、味平，具有益气健脾，补虚扶正的功效[2]。灰树花属于中温型、喜光、好氧的木腐菌[3]。其子实体肉质脆嫩，由匙状、扇状或舌状的菌盖叠生而成[4]，因含有与鲜味有关的天门冬氨酸与谷氨酸含量较高，所以味如鸡丝，有“食用菌王子”和“华北人参”的称呼[5]。灰树花因生长环境不同，别名多样，如河北称其栗蘑，浙江称其云蕈，四川称千佛菌，日本则叫舞茸。其主要分布于俄罗斯、日本与中国。因其较高的食用价值及显著的药理作用，近年来，作为保健食品及抗癌药物，风行于日本和北美市场[6]。

灰树花营养丰富，其子实体干品含脂肪1.7%，蛋白质31.5%，粗纤维10.7%，灰分6.41%，碳水化合物49.69%，蛋白含量比其他多种菌物要高，是香菇的2倍[7]。其化学成分种类较多，主要包括多糖、多酚、肽类等，且各成分均有显著的药理活性，特别是多糖，具有明显的抗肿瘤、抗病毒、改善免疫系统等功能[8]。随着灰树花药理活性及保健功能日益显现，市场需求量逐渐增加，因此，国内多地均加大了对灰树花的研究和种植，使得灰树花产量有所提高，但是其质量差异也比较大，突出了灰树花质量标准制定的重要性，笔者在查阅大量文献的基础上，对灰树花的化学成分及质量标准研究进行综述，为进一步深入研究灰树花的化学成分、药理作用、质量标准等方面提供研究资料和方向。

1 化学成分

1.1 多糖

多糖是灰树花的主要化学成分及活性成分，可分为结构多糖和胞外多糖两类，且不同地域或不同提取方法所得到的多糖存在差异，汪维云等[9]研究结果显示，灰树花胞外多糖分子量小于胞内多糖，相对分子质量大于45 000 的胞外多糖具有生物活性，小于 10 000 的则几乎没有活性。灰树花多糖为杂多糖，其单糖有葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖等，以D-葡萄糖为多见，结构多含β-1，6 及β-1，3 糖苷键的葡聚糖[10]。日本神户药科大学的Nanba 最早提出了多糖的D-组分和MD-组分，D-组分分子结构为β-1，3 支链的β-1，6- 葡聚糖与β-1，6 支链的β-1， 3-葡聚糖，MD-组分分子结构含β-1，3 和β-1，6 糖苷键的β-葡聚糖，继MD-组分分离提取之后，Nanba 又分离出MZ-组分，分子结构为β-1，3 及β-1，6 支链的β-D-葡聚糖，随后，Zhuang 等[11]又从灰树花中分离到SX-组分，β-1，3 分支或α-1，4 分支的β-1，6-葡聚糖。Hiroaki 与Nanba 等对灰树花中多糖或蛋白聚糖的D-组分、MD-组分、MZ-组分、X-组分进行了结构分析及相关药理实验[12-13]。MD-组分的分子结构与MZ-组分相似，在体内和体外均能活化巨噬细胞[14]， X-组分多糖分子结构为α-1，4 分支的β-1，6-葡聚糖。X-组分、SX-组分均具有较好的抗糖尿病作用，而 D-组分是具有很强生物活性的蛋白聚糖，为酸不溶性热水提取物，可以激活NK 细胞，达到机体免疫的作用[15]，此外，Mizuno 等[16]从灰树花子实体中分离出具有抗肿瘤作用的5 种多糖组分，Yang 等[17]从灰树花菌丝体中分离出GFPS1b 组分，经过结构分析，表明该组分与先前D-组分的多糖结构有差异，GFPS1b组分主链含α-1，4 和α-1，3 的糖苷键，另外，从灰树花菌丝体中分离出EX-GF-Fr.1、2、3 三种组分。Ohno 等[18]利用水提法从灰树花中提取到多糖Grifolan（GRN），具有显著抗肿瘤作用。Ying 等[19]从灰树花子实体中得到具有明显抑制内皮细胞增殖作用的多糖GFPW，其组成包括三部分，α-1，6-吡喃半乳糖残基骨干、α 末端的甘露糖和α-O-2 的1，3-岩藻糖残基。Mao 等[20]从灰树花分离到1 种既有免疫调节作用又有抗肿瘤作用的多糖GP11，GP11 由D-葡萄糖、D-甘露糖、和D-半乳糖三种组成。Li 等[21]从富硒灰树花中分离到1 种与GP11 具有相同药理活性的富硒多糖，称为Se-gp11，通过结构分析表明，Se-gp11 以随机线圈结构的球形存在，由n（葡萄糖）：n（甘露 糖）：n（半乳糖）=1 ∶2.41 ∶4.91 组成。灰树花多糖种类繁多，具有多种药理活性，在抗肿瘤、抗糖尿病、抗病毒、抗高血脂及免疫调节等方面具有显著的疗效[22]，具有广阔的开发利用前景。

1.2 多酚类

目前从灰树花中分离出的酚类化合物较少，主要有阿魏酸、2-羟基丁二酸、二羟基苯乙酸、4-羟基苯甲酸、咖啡酸、香豆酸、3-羟基白藜芦醇、白藜芦醇[23]、表儿茶素没食子酸酯、对香豆酰奎尼酸、对香豆酰基酒石酸[24]等，酚类化合物主要具有抗氧化的药理 作用。

1.3 甾类成分

目前，国内外研究者从灰树花中分离出甾类化合物20 余种，主要是甾醇类及其衍生物，主要有5α，8β-过氧麦角甾-6，22-二烯-3β-醇、麦角甾醇、3β，5α，6β-三羟基麦角甾醇[25]、麦角甾醇过氧化物，此外还有麦角甾-4，6，8，22，-四烯-3-酮等。

1.4 其他类成分

除以上提及成分外，灰树花还含蛋白质、微量元素以及香豆素[25]、生物碱、烟酸、肽类、琥珀酸、甘露醇、甘菊蓝、2-甲酚及脂肪酸等成分。杨生兵等[26]对灰树花发酵菌丝体与子实体进行分离鉴定，从发酵菌丝体中鉴定出挥发性成分94 种，多以酮类、醛类和酯类为主，而从子实体中鉴定出挥发性成分62 种，主要以醇类、酮类和醛类为主。

2 质量标准

目前，《中国药典》未收载灰树花药材，其质量标准研究较少，因此，对目前已有灰树花质量标准研究的相关文献进行归纳总结，旨在为灰树花药材的开发利用、保证中药材质量、推动中药现代化研究提供方向。

2.1 性状鉴别

2.1.1 灰树花鲜品性状鉴别

灰树花子实体呈肉质，有柄或无柄，多分支，具匙形或扇形菌盖，重叠成丛，宽达40～60 cm、厚2～7 mm， 菌盖直径2 ～7 cm，菌盖有灰色、灰白色、淡褐色等[27-28]；嫩菌表面有细毛，老后光滑，具放射状条纹，边缘薄，有一圈不规则尖凸，菌肉白色，内卷；菌管延生，孔面白色至淡黄色，管口呈多角形；孢子无色，光滑，卵圆形至椭圆形；菌丝壁薄，无锁状联合，具分枝与横隔[29-30]。

2.1.2 灰树花干品性状鉴别

子实体干品呈珊瑚状，质地脆而坚；菌盖表面较鲜品深，为浅褐色或灰褐色，背面孔状，折断时粉尘散落；具浓郁的香气，手触碰后有特殊的香气残留在手指间；将干品浸在水中，灰树花体积膨胀，水被染成淡黄色。将其进行火试，燃烧时有白色烟雾飘散，菌柄有木材燃烧的味道，烧完略有油状物残留[10]。

2.2 显微鉴别

隆毅等[31]对不同生境的灰树花子实体粉末性状进行鉴别，结果为子实体粉末呈类白色或浅灰黄色，光滑，易在手上粘附，气微、味淡。显微镜下可见众多菌丝，多弯曲成团或平行呈束密集排列，少有分枝、壁较薄，无锁状联合，具横隔，直径5.5 ～10 μm；担孢子椭圆形至卵形，光滑、偶见棕色块状结晶及子实体层等。刘佳[10]对灰树花进行显微研究，结果为灰树花菌丝无色壁薄，直径2 ～4 μm，多数具分枝，无锁状联合，有横隔。孢子椭圆形，一端稍尖，光滑，无色，与隆毅的研究有少许差异。

2.3 薄层鉴别

2.3.1 薄层层析鉴别

灰树花薄层鉴别方法基本属于空白，隆毅[31]按照薄层色谱方法，以精氨酸为对照品溶液，吸取灰树花供试品溶液点于硅胶G 薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3 ∶2 ∶1）为展开剂，用茚三酮显色，在日光下检视，在同对照品相应的位置上，可见紫红色斑点出现。

2.3.2 全息薄层色谱鉴别

隆毅[31]研究表明，以麦角甾醇为对照品溶液，将供试液点于硅胶GF254 薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（8 ∶4 ∶0.5）为展开剂，在紫外灯254 nm、365 nm 下检视，再喷以2%香草醛-硫酸乙醇溶液，日光下检视，均可见与对照品相同的斑点。

2.4 主要成分含量测定

2.4.1 多糖的测定

灰树花多糖是灰树花的主要活性成分，也是目前研究的热点，以灰树花多糖为主要成分制成的剂型较多，如保利生胶囊、舞茸精滴剂、麦特消胶囊等，因此，灰树花多糖能在一定程度上反映出其药材质量，可作为质量控制的指标之一。隆毅等[32]采用蒽酮-硫酸法，结合正交试验确定最佳提取工艺，测定不同产地灰树花粗多糖与可溶性糖的含量，结果18 批不同产地灰树花粗多糖含量为8.17%～34.82%，可溶性糖为27.46%～55.65%。樊懿娜等[33]采用热水法提取灰树花多糖，以葡萄糖为对照品，用苯酚-硫酸法，于490 nm波长处测定标准品和3 个供试品溶液的吸光度，结果3 个供试品葡萄糖含量分别为21.7%、21.3%和20.9%。孙耀[34]采用正交试验确定灰树花多糖水提醇沉最佳工艺条件，测定中性糖含量为43.68%，并对提取到的灰树花粗多糖理化性质进行了研究。顾华杰等[35]采用蒽酮-硫酸法、费林滴定法、苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水杨酸法4 种方法，测定发酵液中灰树花菌丝体的胞外多糖和胞内多糖，结果显示，3，5-二硝基水杨酸法测定胞外多糖较好，最佳吸收波长为490 nm，而苯酚-硫酸法测定胞内多糖较好，最佳波长为485 nm。

2.4.2 蛋白质的测定

灰树花所含蛋白质较高，且不同海拔生长的灰树花所含蛋白含量存在差异[36]，李怡彬等[37]用不同废弃培养料栽培白灰树花和灰树花，并对其子实体中蛋白质进行测定，灰树花和白灰树花子实体含蛋白质量较高，平均含量22.95%，氨基酸总量均值为17.51%，二者的蛋白含量均高于香菇子实体。隆毅[31]对不同产地18 批灰树花中蛋白质含量进行了测定，采用考马斯亮蓝染色法测定蛋白含量，结果为全国18 批不同规格与产地的灰树花蛋白质含量无明显差异，建议拟定灰树花蛋白含量限度不得低15%。冯猛等[38]在液体培养条件下，测定了8 个灰树花菌株发酵液中蛋白质含量，结果显示，在接种后第7 d 发酵液中产生的蛋白质含量达高峰，最高含量为0.485 0 mg·mL-1，最低为0.308 9 mg·mL-1。

2.5 指纹特征图谱

指纹图谱技术是中药鉴别的重要手段，中药色谱指纹图谱是指不同产地中药及其制剂所共有的、具有特异性组分群，经色谱测定得到的特征图象或图谱。有关灰树花指纹图谱研究的文献报道较少，李小定[39]等采用糖腈乙酸酯气相色谱法，利用OV-1701 毛细管色谱柱对灰树花中7 种单糖的糖腈乙酸酯及内标肌醇六乙酰酯进行分离，并测定其多糖粗品及4 种等级的单糖组成。兰蓉等[40]采用超声波法提取灰树花中挥发油成分，利用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术分析鉴定，经NIST 谱库检索，鉴定出17 种化合物，主要为含酯类的挥发油成分，包括油酸酯和亚油酸乙酯等。贾瑞博等[41]构建了灰树花多酚高效液相色谱的分析测定法，采用液相色谱-质谱联用技术对多酚组分进行分离鉴定。

隆毅[31]对不同产地的18 批灰树花进行了系统的HPLC 指纹图谱研究，归纳其共有特征，并首次建立了不同规格灰树花水与甲醇提取液的HPLC 指纹图谱，对18 批灰树花指纹图谱数据进行相似度分析评价，结果相似度均大于0.9。杨海[15]建立了反映活性成分灰树花β-葡聚糖的药材指纹图谱，采用示差折光检测器（RID）进行检测时，可检出较为明显的指纹图谱峰7 个，且10 批药材的相似度均在0.95 以上；采用二极管阵列检测器（DAD）检测时，可检出共有峰 16 个，10 批药材的相似度在0.90 以上。

3 结语

灰树花是近年来开发的珍稀食药用真菌之一，除了具有丰富的营养物质可以作为菜肴食用外，其还含有多种活性成分，具有显著的药理活性。目前，对灰树花药理活性成分的研究主要集中在多糖，而对其他活性成分，如多酚、甾体、肽类等相对较少，希望后续研究者可以从这方面再进行深入研究。此外，随着灰树花药理作用及保健功能的日益显现，市场需求量逐渐增加，使得灰树花栽培日益增多，很多研究者对灰树花栽培技术进行了较为详细的研究，但是不同生境下生长的灰树花，其性状、营养成分、化学活性成分等存在差异，缺乏分级研究。对灰树花质量标准研究的文献报道较少，且存在少许差异，因此，可以扩大样品，选取灰树花鲜品与干品同时进行研究，质量标准的制定有利于保证中药材质量、推动中药产业化发展。因此，中药材质量标准的制定对推动中药产业现代化具有重大的意义。