白云参化学成分的研究

万 勇，钟国豪，袁铭铭，谢二磊*

(1.江西省药品检查员中心，江西 南昌 330029；2.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029)

白云参为桔梗科金钱豹属植物大花金钱豹CampanumoeajavanicaBI.的根[1]，始载于《植物名实图考》[2]，具有健脾益气、补肺生津之功效，用于心悸、多汗、白带、乳汁稀少、小儿疳积、遗尿，脾虚泄泻、肺虚咳嗽。近年来，对白云参的化学成分和药理活性研究很少[3-4]，主要为炔烃及其糖苷等，为了寻找其活性成分，阐明其药效物质基础，更好地开发和利用该植物资源，本实验对其正丁醇部分的化学成分进行研究，从中分离鉴定了11个化合物，所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 材料

Micromass ZabSpec质谱仪(美国Micromass公司)；Varian UNITY INOVA 600超导核磁共振仪(美国Varian公司)；Ultimate3000 DGLC型HPLC色谱仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；1260infinityⅡ型HPLC色谱仪和1260infinityⅡPrep型制备液相色谱仪(美国Agilent公司)；Büchi中压液相制备色谱仪(瑞士步琪公司)；C18反相填料(日本YMC公司)；EYELA SB-1000旋转蒸发仪(日本EYELA公司)；数显恒温水浴锅(常州亿通分析仪器制造有限公司)；柱层析硅胶(100～200目)和薄层层析硅胶(青岛海洋化工厂)；水为超纯水、氘代试剂CD3OD、DMSO-d6(美国剑桥公司)；其他所用试剂均为分析纯或色谱纯。

白云参药材由南昌弘益药业有限公司提供，经江西省药品检验检测研究院万林春副主任中药师鉴定为桔梗科金钱豹属植物白云参CampanumoeajavanicaBI.的干燥根。标本保存在江西省药品检验检测研究院标本馆。

2 提取与分离

白云参药材10 kg，经70%乙醇加热回流提取，减压浓缩至无醇味后，加入适当水稀释，依次用二氯甲烷、水饱和正丁醇萃取。萃取液分别减压浓缩至干，得二氯甲烷部分(82 g)和正丁醇部分(103 g)。

正丁醇部分经正相硅胶柱，以二氯甲烷-甲醇(25∶1～1∶1)梯度洗脱，经薄层色谱检视，合并相近的组分，得5个组分(Fr1～Fr5)。Fr3(22.4 g)经C18中压柱，以甲醇-水(5∶95～30∶70)梯度洗脱得化合物2(20.8 mg)，经HPLC色谱检视，合并为10个部分(Fr3-1～Fr3-10)，Fr3-2(96 mg)经反相制备HPLC，甲醇-0.01%三氟乙酸(18∶82)洗脱得到化合物1(40.6 mg)、3(10.3 mg)。Fr3-7(67 mg)经反相制备HPLC，甲醇-0.01%三氟乙酸(31∶69)洗脱得化合物4(30.7 mg)。Fr3-3(1.8 g)经正相硅胶柱，以二氯甲烷-甲醇(5∶1～1∶1)洗脱，经薄层色谱检视，合并相近的组分，得6个组分(Fr3-3-a～Fr3-3-f)。Fr3-3-a(120 mg)经反相制备HPLC，以乙腈-水(5∶95)洗脱得化合物6(5.3 mg)。Fr3-3-f(130 mg)经反相制备HPLC，以乙腈-0.01%三氟乙酸(16∶84)洗脱，得到化合物5(47.2 mg)。Fr3-3-d(280 mg)经反相制备HPLC，以甲醇-0.01%三氟乙酸(7∶93)洗脱，得化合物7(52.5 mg)、8(34.6 mg)。Fr3-3-b(140 mg)经反相制备HPLC，以乙腈-0.01%三氟乙酸(15∶85)洗脱，得化合物9(26.5 mg)、10(17.8 mg)、11(9.8 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:166.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ:7.25～7.35(5H，m，H-2～6)，3.77(1H，dd，J=9.0，4.2 Hz，H-2′)，3.32(1H，dd，J=14.4，4.2 Hz，H-3′a)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：137.4(C-1)，130.0(C-2，6)，130.4(C-3，5)，128.4(C-4)，173.8(C-1′)，57.6(C-2′)，38.3(C-3′)。以上数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定为苯丙氨酸。

化合物2：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:244.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.99(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，5.89(1H，d，J=4.2 Hz，H-1′)，5.69(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，4.17(1H，dd，J=4.8，4.2 Hz，H-3′)，4.14(1H，dd，J=4.8，4.2 Hz，H-2′)，3.99(1H，s，H-4′)，3.74(2H，m，H-5′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：152.5(C-2)，166.2(C-4)，102.7(C-5)，142.7(C-6)，90.6(C-1′)，71.3(C-2′)，75.7(C-3′)，86.4(C-4′)，62.3(C-5′)。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定为尿苷。

化合物3：浅黄色油状物(甲醇)。ESI-MSm/z:259.2[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.39(1H，dd，J=15.6，5.4 Hz，H-9)，5.92(1H，ddd，J=16.2，10.2，5.4 Hz，H-2)，5.65(1H，d，J=16.2，H-8)，5.42(1H，dd，J=16.2 Hz，H-1b)，5.18(1H，dd，J=10.2 Hz，H-1a)，4.93(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，4.26(1H，q，J=6.0 Hz，H-10)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：116.8(C-1)，137.9(C-2)，64.0(C-3)，82.2(C-4)，74.5(C-5)，70.7(C-6)，78.3(C-7)，109.4(C-8)，149.0(C-9)，7.0(C-10)，37.5(C-11)，26.1(C-12)，30.5(C-13)，30.4(C-14)，33.0(C-15)，23.7(C-16)，14.5(C-17)。以上数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定为(8E)-heptadeca-1,8-dien-4,6-diyn-3,10-diol。

化合物4：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:685.3[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.65(2H，d，J=7.8 Hz，H-8，8′)，6.62(2H，s，H-5，5′)，6.55(2H，d，J=7.8 Hz，H-9，9′)，4.19(2H，d，J=7.8 Hz，H-Glc-1，1′)，3.90(2H，m，H-1a，1a′)，3.74(6H，s，6，6′-OCH3)，3.43(2H，m，H-1b，1b′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：71.7(C-1，1′)，41.6(C-2，2′)，35.5(C-3，3′)，134.0(C-4，4′)，113.3(C-5，5′)，148.8(C-6，6′)，145.4(C-7，7′)，115.7(C-8，8′)，122.8(C-9，9′)，104.6(Glc-1，1′)，75.2(Glc-2，2′)，78.2(Glc-3，3′)，71.7(Glc-4，4′)，78.0(Glc-5，5′)，62.8(Glc-6，6′)，56.2(6，6′-OCH3)。以上数据与文献[8]报道基本一致，故鉴定为secoisolariciresinol diglucoside。

化合物5：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:217.3[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.49(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，7.34(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，7.14(1H，t，J=7.8 Hz，H-6)，7.06(1H，t，J=7.8 Hz，H-7)，4.51(2H，s，H-1)，4.43(1H，dd，J=4.8，10.8 Hz，H-3)，3.48(1H，dd，J=4.8，10.8 Hz，H-4b)，3.16(1H，dd，J=10.8，16.2 Hz，H-4a)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：41.8(C-1)，56.6(C-3)，23.5(C-4)，106.5(C-4a′)，127.3(C-4b′)，118.9(C-5)，123.5(C-6)，120.7(C-7)，112.3(C-8)，138.5(C-8a)，126.2(C-9a)，171.2(C-10)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸。

化合物6：淡黄色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:233.2[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：9.58(2H，s，2，2′-CHO)，7.50(2H，d，J=3.0 Hz，H-3，3′)，6.76(2H，d，J=3.0 Hz，H-4，4′)，4.27(2H，dd，J=8.4，6.6 Hz，H-9a，9′a)，4.62(4H，s，H-6，6′)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：64.2(C-6，6′)，112.7(C-4，4′)，124.2(C-3，3′)，152.8(C-2，2′)，157.7(C-5，5′)，178.8(2，2′-CHO)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为鸡脚刺醛。

化合物7：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:331.3[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.63(1H，dd，J=9.0，1.8 Hz，H-6)，7.60(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，7.20(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，5.03(1H，d，J=7.2 Hz，H-1′)，3.89(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：125.9(C-1)，114.3(C-2)，150.3(C-3)，152.0(C-4)，116.3(C-5)，124.7(C-6)，169.5(C-7)，101.9(C-1′)，74.7(C-2′)，77.8(C-3′)，71.2(C-4′)，78.3(C-5′)，62.4(C-6′)，56.6(3-OCH3)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为香草酸-4-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:323.2[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.97(2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，7.14(2H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)，5.03(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：161.4(C-1)，115.7(C-2，6)，131.3(C-3，5)，124.2(C-4)，168.2(C-7)，100.3(C-1′)，73.4(C-2′)，76.9(C-3′)，69.9(C-4′)，76.6(C-5′)，61.1(C-6′)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为对羟基苯甲酸葡萄糖苷。

化合物9：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:293.3[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.43(2H，d，J=7.8 Hz，H-2，6)，7.34(2H，d，J=7.8 Hz，H-3，5)，7.30(1H，t，J=7.8 Hz，H-4)，4.95(1H，d，J=12.0 Hz，H-7a)，4.68(1H，d，J=12.0 Hz，H-7b)，4.37(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.2(C-1)，129.4(C-2，6)，129.5(C-3，5)，128.9(C-4)，71.9(C-7)，103.5(C-1′)，75.3(C-2′)，78.3(C-3′)，71.9(C-4′)，78.2(C-5′)，63.0(C-6′)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:167.1[M-H]-。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.55(2H，m，H-2，6)，6.83(1H，d，J=9.0 Hz，H-5)，3.89(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：152.7(C-1)，113.8(C-2)，148.7(C-3)，123.1(C-4)，115.8(C-5)，125.3(C-6)，170.0(C-7)，56.6(3-OCH3)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为香草酸。

化合物11：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:161.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.94(2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6)，7.04(2H，d，J=9.0 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：161.8(C-1)，115.1(C-2，6)，131.0(C-3，5)，123.6(C-4)，168.9(C-7)。以上数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定为对羟基苯甲酸。

4 讨论

由于目前对白云参的化学成分研究很少，本实验通过硅胶柱、ODS柱等方法对白云参根的化学成分进行研究，从中分离鉴定了11个化合物，所得化合物均为首次从该植物中分离得到，其中主要化合物为酚酸及其苷类(7～11)，酚酸类成分具有抗氧化、抗炎、保肝、抗菌等药理作用[16-19]。且白云参直接醇提后可在HPLC中检测出化合物7～9，进一步表明酚酸及其苷类可能为白云参药材的主要成分，以期为下一步对其质量标准的研究提供研究思路及标准物质，从而更好的开发利用该药用资源。