康艾注射液联合同步放化疗对中晚期子宫颈癌患者细胞凋亡相关因子及免疫状态的影响

刘畅

【关键词】 子宫颈癌 康艾注射液 凋亡 免疫

[Abstract] Objective： To investigate the effects of Kangai Injection combined with concurrent chemoradiotherapy on apoptosis related factors and immune status in patients with advanced cervical cancer. Method： A total of ninety six patients with advanced cervical cancer diagnosed and treated in our hospital from March 2017 to December 2020 were selected， according to the random number table method， the patients were divided into simple concurrent chemoradiotherapy group and combined group， 48 cases in each group. Simple concurrent chemoradiotherapy group was only treated with concurrent chemoradiotherapy group， and the combination group was treated with Kangai Injection on the basis of simple concurrent chemoradiotherapy group. The levels of apoptosis-related factors and immune cells in peripheral blood before and after treatment were measured respectively. Result： After treatment， the levels of apoptosis-related factors PDCD5， Bax and P53 in both groups were significantly increased， and the levels of PDCD5， Bax and P53 in the combined group were higher than those in the simple concurrent chemoradiotherapy group （P<0.05）. After treatment， CD3+， CD4+， interferon γ， interleukin-2 （IL-2） in the simple concurrent chemoradiotherapy group were lower than those before treatment， and CD8+ was higher than that before treatment （P<0.05）， while the levels of CD3+， CD4+， interferon γ and IL-2 in the combined group were higher than those before treatment， and CD8+ was lower than that before treatment （P<0.05）. After treatment， CD3+， CD4+， interferon γ and IL-2 in the combined group were higher than those in the simple concurrent chemoradiotherapy group， while CD8+ was lower than that in the simple concurrent chemoradiotherapy group （P<0.05）. Conclusion： Kangai Injection combined with concurrent chemoradiotherapy in the treatment of advanced cervical cancer can promote the apoptosis of tumor cells and improve the anti-tumor immune response.

[Key words] Cervical cancer Kangai Injection Apoptosis Immune

First-author’s address： Anshan Cancer Hospital， Anshan 114036， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.26.010

子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，近年来出现年轻化的趋势，高发年龄段为35～44岁，严重威胁女性健康，研究报道2018年全世界新发子宫颈癌病例将近57万例，死亡病例近31万例，患者总体5年生存率约为68%[1-3]。手术、放疗和化疗为主的综合治疗是子宫颈癌的主要治疗手段，对于早期（Ⅰ～ⅡA期）的患者，首选手术切除治疗，对于中晚期（ⅡB期及以上），以同步放化疗为主[4-5]。但同步放化疗由于放化同时进行，治疗强度较大，目前存在较多难以避免的不良反应，导致患者出现骨髓造血系统抑制、肝肾功能障碍、恶心呕吐以及神经系统等毒副作用。尤其是对患者免疫功能的抑制，存在造成肿瘤细胞免疫逃逸，使肿瘤发生远处转移的风险，影响患者的治疗效果。近年来，中医药在减少放化疗毒副反应方面的应用越来越多，其效果逐渐受到关注[6-9]。多项研究结果表明康艾注射液可改善人体免疫功能，促进骨髓造血系统恢复[10-13]。袁顺平等[14]研究证实，康艾注射液具有促进肿瘤细胞凋亡，增强机体抗肿瘤免疫的作用。但其在子宫颈癌中的应用及机制研究仍然较少，因此本研究通过康艾注射液联合同步放化疗治疗中晚期子宫颈癌患者，分析治疗前后患者细胞凋亡相关因子及机体免疫功能的变化情况，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 前瞻性纳入2017年3月-2020年12月于本院诊治的经病理学证实为中晚期宫颈鳞癌的96例患者。（1）纳入标准：①经临床及病理检查诊断为中晚期（ⅡB期及以上）子宫颈鳞癌的患者;②预计生存期>6个月;③一般身体状况较好，KPS评分>70分;④对化疗药物耐受，可耐受同步放化疗。（2）排除标准：①合并肝肾功能障碍;②合并其他部位肿瘤。按随机数字表法将患者分成单纯放化疗组和联合组，每组48例。患者及其家属均已签署知情同意书，且该研究已经本院伦理委员会批准。

1.2 方法 单纯同步放化疗组采用顺铂（生产厂家：齐鲁制药有限公司，批准文号：国药准字H20023461，规格：20 mg/支），40 mg/m2，静脉滴注，联合多西他赛（生产厂家：深圳万乐药业有限公司，批准文号：国药准字H20060127，规格：40 mg/支），80 mg/m2，静脉滴注，1次/周，4周为一疗程，共治疗两个疗程，同步放疗采用三维适形放射治疗技术，靶区包括肿瘤病灶、宫旁组织、距离肿瘤病灶足够长的阴道边缘、骶前淋巴结及其他高危淋巴结区，处方剂量约45 Gy/25 F，5次/周。

联合组在此基础上加用康艾注射液（生产厂家：长白山制药股份有限公司，批准文号：国药准字Z20026868，规格：10 mL/支）治疗，500 mL 0.9%氯化钠溶液+40 mL康艾注射液，1次/d，静脉滴注，持续至化疗结束。治疗过程中每周复查血常规、肝肾功能、生化等，密切监测放化疗毒副反应，如出现需及时对症处理。

1.3 观察指标 （1）比较两组治疗前后的凋亡相关因子的表达情况。分别于治疗前及治疗后收集患者早晨空腹肘静脉血5 mL，2 500 r/min离心10 min，分层后，移液枪吸取上清液，采用Elisa试剂盒进行操作，检测PDCD5、Bax、P53的表达量。（2）比较两组治疗前后的外周血免疫细胞水平。采集患者2 mL空腹肘静脉血，采用EDTA抗凝管，分别孵育荧光标记的CD3、CD4、CD8抗体，最后通过流式细胞仪测定患者抗凝血中CD3+、CD4+、CD8+细胞数量。（3）比较两组治疗前后的免疫相关细胞因子水平。于治疗前后收集患者早晨空腹肘静脉血2 mL，离心后分离血清，通过放射免疫法检测γ干扰素、白细胞介素-2（IL-2）。

1.4 统计学处理 使用SPSS 26.0软件，对于符合正态分布的数据，采用（x±s）表示，組间比较采用独立样本t检验，组内比较采用配对t检验，非正态分布的数据采用M（P25，P75）表示，比较采用秩和检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 联合组：年龄35～75岁，平均（50±11）岁;ⅡB期15例，Ⅲ期21例，Ⅳ期12例。单纯同步放化疗组：年龄36～73岁，平均（51±12）岁;ⅡB期17例，Ⅲ期18例，Ⅳ期13例。两组年龄及病理分期比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组凋亡相关因子比较 联合组与单纯同步放化疗组治疗前的PDCD5、Bax、P53表达比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组PDCD5、Bax、P53的表达较治疗前均升高，联合组治疗后的PDCD5、Bax、P53升高更为明显，均高于单纯同步放化疗组，差异均有统计学意义（t=9.218、8.435、5.574，P<0.001）。见表1。

2.3 两组免疫细胞比较 联合组与单纯同步放化疗组治疗前的CD3+、CD4+、CD8+水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，联合组CD3+、CD4+水平均较治疗前升高，CD8+较治疗前降低，差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗后，单纯同步放化疗组CD3+、CD4+水平均较治疗前降低，CD8+水平升高，差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗后，联合组CD3+、CD4+水平均高于单纯同步放化疗组，CD8+水平低于单纯同步放化疗组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.4 两组免疫相关细胞因子比较 联合组与单纯同步放化疗组治疗前的γ干扰素、IL-2比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，联合组γ干扰素、IL-2均较治疗前升高，差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗后，单纯同步放化疗组γ干扰素、IL-2均较治疗前降低，差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗后，联合组γ干扰素、IL-2水平均较单纯同步放化疗组升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3 讨论

子宫颈癌是严重危害中老年女性健康的恶性肿瘤，近年来出现年轻化的趋势，发病率逐年上升，所有患者中约80%都需要进行外照射治疗或放化同步治疗，其疗效较为肯定，但其造成的骨髓造血系统的损伤，机体免疫功能的抑制仍然不可忽视[15-17]。康艾注射液是一种具有益气扶正，促进肿瘤细胞凋亡，增强患者免疫功能作用的中成药，其主要成分为人参、黄芪和苦参。研究报道其对化疗后恶心呕吐等消化道症状的预防亦起作用，其在临床放化疗不良反应预防中的应用越来越广泛，疗效也得到了肯定[18]。

本研究通过将中晚期子宫颈癌患者随机分为单纯同步放化疗组和联合组，分别测定治疗前后外周血中凋亡相关因子及免疫细胞水平。发现治疗后两组凋亡相关因子PDCD5、Bax、P53的表达量均显著升高，但是联合组的升高程度较单纯组更为明显，提示康艾注射液可促进肿瘤细胞的凋亡，提高治疗效果。莫宗权等[19]通过使用生物信息学方法分析了康艾注射液杀伤肿瘤细胞的分子机制，其结果表明康艾的作用靶点主要为COX1/2、热休克蛋白90等，其中的苦参碱、黄酮、人参皂苷组分可以抑制肿瘤细胞增殖能力、促进肿瘤细胞发生凋亡，调节机体免疫反应等功能，从而重塑肿瘤局部微环境，发挥杀伤肿瘤细胞的作用。赵玲俊等[20]通过在实验室进行体外细胞实验，探讨了康艾注射液对乳腺癌细胞（MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3、HCC-1937）的增殖、克隆形成和凋亡的影响，其结果表明康艾注射液可能通过AMPK/mTOR通路促进肿瘤细胞发生凋亡。张腾腾等[21]通过对体外结肠癌Lovo细胞加入康艾注射液，研究其对结肠癌细胞凋亡和增殖的影响，使用流式细胞仪检测结肠癌Lovo细胞凋亡及Ki-67的表达情况，通过实时荧光定量PCR法检测结肠癌细胞caspase-3、Bcl-2表达水平，结果显示：加入康艾注射液的结肠癌细胞发生凋亡的比例升高，达到57.02%，而对照组仅为7.28%，差异有统计学意义（P<0.05）。且加入康艾注射液的结肠癌细胞Ki-67的阳性表达率明显低于对照组（65.84% vs 95.79%），提示其细胞增殖明显受到抑制。以上研究均和本文研究结果一致，提示康艾注射液可通过促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤的增殖，从而发挥杀伤肿瘤细胞的作用。

本文还发现单纯同步放化疗组中CD3+、CD4+水平降低，CD8+水平升高，γ干扰素、IL-2降低，而联合组中CD3+、CD4+水平升高，CD8+水平降低，γ干扰素、IL-2均升高，均高于对照组。表明同步放化疗会造成机体免疫系统的抑制，影响淋巴细胞的分化。而康艾注射液可以促进淋巴细胞的成熟，提高抗肿瘤免疫应答。杨景景[22]纳入86例非小细胞肺癌患者，对照组（43例）给予含铂化疗方案，实验组（43例）在对照组基础上加用康艾注射液治疗，结果表明，相比于对照组，实验组中CD4+细胞数增多，CD8+细胞数减少。刘晓燕等[23]也通过康艾注射液联合GP方案（顺铂+吉西他滨）治疗晚期非小细胞肺癌，其结果表明，联合组外周血中CD3+、CD4+细胞数增多，CD8+细胞数降低;对照组外周血中CD3+、CD4+细胞数降低，CD8+细胞数增多。李沅耕[24]通过细胞动物实验证实康艾注射液可以增强RAW 264.7细胞的免疫活性，对抗X射线所致小鼠外周血白细胞和骨髓有核细胞数的减少，并升高小鼠白细胞数，其次可以明显提高免疫功能低下小鼠血清溶血素以及TNF-α和IL-6含量。刘建[25]通过联合康艾注射液和TP方案（顺铂+紫杉醇）治疗晚期卵巢癌，结果显示，相比于单纯TP方案，联合组外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+数目明显较高，且联合组患者中位生存期、無进展生存期明显优于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。以上研究均表明放化疗对机体免疫系统存在抑制作用，影响效应免疫细胞的分化成熟，降低机体的抗肿瘤免疫应答。而康艾注射液具有保护机体免疫功能的作用，且具有良好的免疫增强作用，从而激活人体免疫系统，促进免疫细胞对肿瘤的杀伤作用。

综上所述，康艾注射液联合同步放化疗治疗中晚期子宫颈癌可以促进PDCD5、Bax、P53等凋亡相关因子的表达，促进肿瘤细胞发生凋亡，从而起到杀伤肿瘤的效果;其次可促进T淋巴细胞的活化成熟，提高血液中γ干扰素、IL-2的水平，激活人体免疫系统，提高抗肿瘤免疫应答，是治疗中晚期子宫颈癌较佳的选择。

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（收稿日期：2021-07-29） （本文编辑：张爽）