胃癌组织中Gadd45a、Id2表达水平变化的相关性及其意义

刘亚娟

（济源市人民医院，河南 济源459000）

胃癌的病情进展,能够导致患者病死率及生存预后指标的恶化[1]。长期的临床观察研究发现,胃癌患者的5年生存率不足45%,不同措施治疗后胃癌患者的中位生存时间不足28个月[2]。

基础生物学方面的理论认为,分子机制的改变在促进胃癌的病情进展过程中发挥了重要的作用。DNA损伤、DNA错配修复能力的改变或者DNA转录复制活性的异常,均能够促进消化系统恶性肿瘤的发生。生长抑制DNA损伤基因（Cadd4 5a）能够通过促进DNA的损伤，加剧DNA基因突变的风险，提高癌基因突变及癌基因转录的风险，进而促进恶性肿瘤早期的发生[3]；DNA结合抑制因子2（Id2）能够通过提高DNA结合蛋白的辅助速度，促进染色体组蛋白的扩增及分裂，进而促进肿瘤细胞的持续性自我增殖过程[4]。部分研究者探讨了Gadd45a、Id2的表达及其与妇科恶性肿瘤或者鼻咽恶性肿瘤的关系，认为Gadd45a、Id2d的表达上升可以显著促进相关恶性肿瘤的病情进展[5]，但在胃癌患者中的分析研究不足。为了揭示Gadd4 5a、Id2的表达及其与胃癌的关系,从而为临床上胃癌的诊疗提供一定的参考，本次研究选取2015年6月至2018年6月我院收集的80例胃癌组织标本及其对应的癌旁组标本80例，探讨了Gadd45a、Id2的表达及其与胃癌的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年6月至2018年6月我院收集的80例胃癌组织标本及其对应的癌旁组标本80例。

患者年龄44～75岁,平均56.2±9.6岁,男47例、女33例，TNM分期标准：Ⅰ期10例、Ⅱ期28例、Ⅲ期35例、Ⅳ期7例；肿瘤分化程度：高分化20例、中分化20例、低分化40例；发生淋巴结转移46例；病灶最大径≥3cm41例。

纳入标准：⑴患者年龄18～75岁；⑵术前超声胃镜及病理学活组织检测初步诊断；⑶病理标本均来源于手术后组织、经病理学检查确诊；⑷获取患者病理学标本前,患者未接受放化疗、免疫治疗；⑸本研究获得医学伦理委员会的批准,纳入对象的各种资料完整。

排除标准：⑴转移性胃癌；⑵伴有其他部位恶性肿瘤；⑶患者的病历资料、病理学检查结果缺失。

1.2 采用免疫酶细胞化学技术进行Gadd45a、Id2的检测 石蜡包埋,连续性切片厚度3um，60℃烤片60min,常规脱水后,采用EDTA进行抗原修复,加入10ul蒸馏水，加入10%过氧化氢5ul，室温下孵育30min,磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次*3min，加入Gadd45a、Id2的单克隆抗体（1：1000购自罗氏检测公司），37℃孵育60min，PBS洗涤3次*3min，加入HRP标记的Gadd45a、Id2二抗（1：2000购自罗氏公司）,37℃孵育20min，PBS洗涤3次*3min，加入DAB后，PBS冲洗和复染，脱水后在显微镜下进行观察。

1.3 判断标准 免疫组化结果判定：Gadd45a蛋白的阳性着色表达于细胞核及细胞浆、Id2蛋白主要表达与细胞核及细胞质，呈黄色、棕黄色、褐色表达，⑴根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；⑵根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分、阳性细胞所占比例11%～50%为2分、阳性细胞数51%～75%为3分、阳性细胞数所占比例＞75%为4分，两种积分相乘总分＜3分为阴性、≧3分为阳性。

2 结果

2.1 两组标本的Gadd45a、Id2蛋白表达的阳性表达率比较 胃癌组织中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表达阳性表达率分别为63.75%、67.50%均显著的高于癌旁组织的13.75%、16.25%,组间比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）；见表1。

2.2 胃癌组织中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表达相关性 胃癌组织中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表达呈显著的相关性（Spearman系相关系数=0.754，P＜0.05）；见表2。

表2 相关性分析

2.3 胃癌组织中的Gadd45a蛋白、Id2蛋白表达与病理学特征的关系 在不同TNM分期、不同分化程度、是否具有淋巴结转移的胃癌组织中的Gadd4 5a蛋白表达差异具有统计学意义(P＜0.05)；见表3。在不同TNM分期、不同分化程度、不同病灶直径大小、是否具有淋巴结转移的胃癌组织中的Id2蛋白表达差异具有统计学意义(P＜0.05)；见表4。

3 讨论

在具有相关家族性肿瘤病史或者长期精神应激、不良饮食习惯的人群中，胃癌的发生风险均明显上升。长期不同的病理性因素，能够通过调控胃黏膜上皮细胞的核DNA转录，提高癌细胞的早期增殖及分化障碍，进而促进胃癌整体发病率的上升[6]。现阶段临床上缺乏对于胃癌患者筛查的血清学指标，虽然癌胚抗原（CEA）或者糖链125抗原（CA125）等能够在消化道恶性肿瘤的发生过程中发挥一定的评估作用，但其评估的灵敏度较低，特异度不足45%[7,8]。而本次研究对于胃癌患者病灶组织中Gadd45a、Id2的表达分析研究，能够在揭示胃癌患者临床病理特征进展机理的同时,为临床上胃癌的血清学诊断或者病情评估提供预后参考指标。

表4 胃癌组织中的Id2蛋白表达与病理学特征的关系

基因水平或者分子水平的改变,是促进恶性肿瘤发生的重要环节，其能够通过影响到DNA的转录、翻译及下游信号通路调控，进而促进恶性肿瘤的发生。Gadd45a是DNA损伤相关因子，其能够通过泛素化的修饰作用，促进DNA碱基及嘧啶结构的破坏，提高基因点突变及位移突变的发生风险。基础方面的研究认为，Gadd45a的表达上升,还能够通过对于基因的异常甲基化的修饰,进而导致基因表达产物特性的改变,从而影响到胃癌细胞的生物学特征；Id2是染色体组蛋白的结合抑制因子，其对于组蛋白的分裂作用,能够提高癌细胞核结构的复制速度,促进癌细胞持续性分裂和自我增殖过程[9]。部分研究者探讨了Gadd45a的表达与胃癌的关系,认为在中晚期胃癌患者中,Gadd45a的表达浓度明显上升[10]，但缺乏对于Id2的表达与胃癌的关系研究。

通过免疫组化技术探讨了Gadd45a、Id2蛋白的表达与胃癌的关系,发现在胃癌病灶组织中,Gad d45a、Id2蛋白的表达阳性率均明显上升,高于癌旁组织，统计学差异较为明显，提示了Gadd45a、Id2蛋白的高表达均能够影响到胃癌的发生发展过程。分析其基础方面的原因,考虑由于Gadd45a、Id2的下列几个方面的病理性作用有关[11-13]：⑴Gadd4 5a的表达上升,不仅能够导致癌基因突变风险的上升，同时还能够增加基因调控稳定性，导致癌细胞凋亡-增殖平衡的打破，影响到癌细胞周期的调控平衡；⑵Id2的表达，不仅能够影响到癌细胞DNA的组蛋白的复制,同时还能够提高癌细胞内染色体的分裂速度，提高癌基因的转录活性，进而促进胃癌的发生。李亚卓等[14]研究者也发现，在胃癌病灶组织中，Id2蛋白的表达阳性率可平均上升40%以上,同时在具有明显的恶病质或者肿瘤晚期表现的患者中,Id2蛋白的表达水平可进一步上升。在探讨Gadd45a、Id2的内在关系过程中,发现Gadd45a、Id2的表达具有一定的相关关系，推测二者在促进胃癌的病情进展过程中可能发挥了一定的协同刺激作用,但具体的机制仍然需要后续研究的进一步探讨。Gadd45a在临床分期较高、发生了淋巴结转移或者癌细胞分化程度较低的患者中表达阳性率较高，明显高于对应的临床病理分期较早组，统计学差异显著,提示了Gadd45a的表达能够显著影响到胃癌的临床病理特征的进展,这主要考虑由于Gadd45a的表达,能够提高癌细胞的浸润深度,提高癌细胞对于淋巴结组织的粘附能力,进而促进胃癌临床病理特征的进展；在不同TNM分期较晚、分化程度差、病灶直径较大、具有淋巴结转移的患者中,Id2的表达阳性率较高,提示Id2的表达与胃癌的临床病理特征同样相关,分析其原因，主要由于Id2在影响胃癌细胞生物学特征的同时,还能够提高癌细胞的持续性扩增能力,从而导致肿瘤病灶直径的增大。

在胃癌病灶组织中，Gadd45a、Id2蛋白的表达阳性率均明显上升,二者的表达具有一定内在关系。同时Gadd45a、Id2的表达还与胃癌患者临床病理特征密切相关。