探讨全自动微生物分析仪与细菌微量生化管鉴定细菌的结果分析

铁岭市疾病预防控制中心 （辽宁 铁岭 112000）

内容提要：目的：探析采用细菌微量生化管和全自动微生物分析仪对细菌进行鉴定，以提高结果的准确性。方法：选取本实验室研究的三种杆菌共400株进行不同方法检测，其中将利用全自动微生物分析仪的杆菌设为观察组，而将利用细菌微量生化管的杆菌设为对照组，杆菌种类主要包括葡萄球菌96株、不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌88株、肠杆菌科菌株216株，观察并比较鉴定结果。结果：观察组的总体符合率为94.50%（378/400），其中葡萄糖球菌符合率为93.75%（90/96），肠杆菌科菌符合率为99.07%（214/216），不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌84.09%（74/88）；对照组的总体符合率为94.75%（379/400），其中葡萄糖球菌符合率为100.00%（96/96），肠杆菌科菌符合率为98.61%（213/216），不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌79.55%（70/88）。结论：两种检测方式的特点为操作方便、准确度高、快速等，但在不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌鉴定中符合率都较低，所以要结合气味、菌落特点等综合考虑，从而得到更准确的检测结果。

近几年，电子计算机技术快速发展，且在自然科学中的各个领域逐渐应用，检测鉴定微生物技术也是从手工检测逐渐向电脑化和仪器化过渡，临床鉴定细菌的工作中自制的生化管也逐步被细菌微量生化管和自动化所替代[1]。所以，本文选取400株杆菌（葡萄球菌、不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌、肠杆菌科菌株三种）比较采用细菌微量生化管和全自动微生物分析仪鉴定细菌的结果，具体如下。

1.资料与方法

1.1 一般材料

利用VITEK-MAS系统和专用鉴定卡。（1）培养基和试剂：氧化酶试剂、触酶试剂、微量生化管、血琼脂、营养琼脂、TCBS琼脂、EMB琼脂、SS琼脂、葡萄糖肉汤、肠道增菌肉汤、碱性蛋白胨水、SC增菌液、GN增菌液、营养肉汤等。（2）菌株来源：收集细菌科分离出的非重复的肠杆菌科细菌216株（其中耶尔森氏菌、克雷伯氏菌、沙雷氏菌、肠杆菌、变形杆菌、枸橼酸杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌分别为3株、25株、6株、40株、20株、10株、3株、3株、106株），87株不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌中芳香杆菌、产碱杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌分别为5株、3株、23株、57株。96株葡萄球菌中包括奈瑟氏球菌、腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、黄金葡萄球菌分别为4株、8株、16株、68株。

1.2 方法

接种标本24h后取可疑菌落进行纯培养，培养基为麦康凯琼脂平板和血琼脂平板。

观察组：取平板上的纯菌落，在生化卡上填充一定浓度的活菌悬液，利用检测箱鉴定。

对照组：根据触酶、氧化酶、OF试验、革兰染色等试验结果。将不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌、肠杆菌科、奈瑟氏菌属、葡萄球菌属分别转种于各自鉴定管内鉴定。

当两组检查结果不一致时，根据伯杰细菌鉴定手册第八版鉴定，以此为标准。

2.结果

由表1可知：观察组、对照组总体符合率为94.50%（378/400）、94.75%（379/400）。观察组鉴定96株葡萄球菌，1例不符合的是腐生葡萄球菌，其他菌株都符合，对照组鉴定符合率为100.00%。216例肠杆菌科，观察组鉴定2例不符合为枸橼酸杆菌，对照组3例不符合为克雷伯氏菌，其他菌株都符合。88例不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌观察组鉴定符合率为84.09%（74/88），其中鉴定铜绿假单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、芳香杆菌符合率分别为为92.98%（53/57）、82.61%（19/23）、100.00%（3/3）、80.00%（4/5）。对照组符合率为，79.55%（70/88），细菌符合率分别为84.21%（48/57）、69.57%（16/23）、100.00%（3/3）、80.00%（4/5）。

表1.全自动微生物分析仪与细菌微量生化管鉴定细菌的结果及符合率(n,%)

3.讨论

临床细菌实验室中，鉴定细菌是重要任务的一种[2]。现阶段，鉴定细菌的方法常常是传统手工，自动化和编码方法[3]。全自动微生物分析系统结合了计算机技术、微生物检测技术、传统生化反应，利用概率最大近似值模型法实施自动微生物检测的一种技术[4]。具体操作为：在固体培养基上放置待检菌种，从而获得单一菌落，变成菌悬液，并在已选好的各种细菌检测卡上利用充液器将其充入，封口后置于恒温35°C的箱中培养，利用读出器根据光学扫描机制，对指示剂的浊度和显色情况进行测定，在电脑内输入信息后进行分析，再同预定的阈值对比，通过数据端自动显示并打印。尽管此方式存在重复性高、快速、操作简单等优势，但是也存在“不能鉴定细菌”和鉴定错误的情况，原因较多，主要还包括：菌龄太老、菌液浓度不符合规定、反应卡小孔有气泡、细菌不纯等。细菌微量生化管尽管结果可靠、操作简单，但是此方式同样存在对鉴定结果造成影响的因素，如颜色变化不明显、交叉感染而出现假性结果等。可见，在鉴定细菌繁重的工作期间，如何使劳动强度降低、工作效率提升，是检验者需要长时间探究的难题。本次实验结果显示，观察组与对照组的符合率差异不大（94.50%/94.75%），其中葡萄糖球菌符合率（93.75%/100.00%）和肠杆菌科菌符合率（99.07%/98.61%）较为接近，但是不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌的符合率出现一定落差（84.09%/79.55%），说明两种检验方式是此问题解决的一种有效途径，都存在操作方便、准确性高、快速等，但是鉴定不发酵和需氧革兰氏阴性杆菌的符合率都不是很高，所以在对此类细菌鉴定中需要综合考虑涂片颜色、菌落颜色、气味、特点等，从而提升鉴定此细菌的符合率。