基于主成分分析和聚类分析的不同厂家维C银翘片质量评价

崔新刚 王颖莹

1.洛阳市妇幼保健院，河南 洛阳 471000；2.洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471000

维C银翘片为《中国药典》2015年版收载的中西药复方制剂，由金银花、连翘、牛蒡子、芦根、桔梗及维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏和薄荷素油制成，具有疏风解表，清热解毒之功效[1]。用于外感风热所致的流行性感冒，症见发热，头痛，咳嗽，口干，咽喉疼痛。研究表明不同厂家维C银翘片存在较大的质量差异[2]。目前，维C银翘片质量评价方法多采用药典收录的HPLC法，方法较为繁琐，本研究同时测定维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏含量，方法简单、快速。药典法测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷含量，结合聚类分析和主成分分析，探讨不同厂家维C银翘片质量差异，旨在为其质量控制提供依据。

1 材料

1.1 仪器 Agilent1200型高效液相色谱仪，包括G1315B型二极管阵列检测器、自动进样器(美国安捷伦科技有限公司)；KQ-100ES超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；赛多利斯BSA8201电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；易普易达Smart-S2型超纯水机(南京易普易达科技发展有限公司)。

1.2 药品与试剂 绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110753-201713)；牛蒡苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110819-201807)；对乙酰氨基酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号：批号:100018-201508)；马来酸氯苯那敏对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100047-201606)；维生素C对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100425-201804)。10批样品分别为贵州的A厂(批号：190906；191001)、广东的B厂(批号：190904；190702)、广西的C厂(批号：181202；190904)、云南的D厂(批号：180605；180801)、江苏的E厂(批号：20190106；20181103)；乙腈为色谱纯(天津天津市科密欧化学试剂有限公司)；磷酸为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。

2 方法与结果

2.1 绿原酸的含量测定

2.1.1 色谱条件 参考《中国药典》及相关文献[3]，通过多次实验验证，最终确定色谱条件为，色谱柱：Sysmetry C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流动相：乙腈-0.4%磷酸(13∶87)；进样量：10 μL；检测波长：327 nm。

2.1.2 对照品制备 精密称取绿原酸对照品适量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含对照品 30 μg 的溶液，即得对照品溶液。

2.1.3 供试品制备 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密称定，研细粉，取约1 g细粉，置于具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量。将所制得供试品溶液进行超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得供试品溶液。

2.1.4 样品测定 按2.1.3制备样品溶液，精密吸取样品溶液和对照品溶液各10 μL，按2.1.1色谱条件，分别测定10个样品中的绿原酸，以外标法计算含量。色谱图如图1所示，测定结果见表1。

表1 不同厂家指标成分含量测定结果(mg/片)

2.2 牛蒡苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Sysmetry C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流动相：乙腈-5 mL/L冰醋酸溶液(18∶82)；进样量：10 μL；检测波长：280 nm。

2.2.2 对照品制备 精密称取牛蒡苷对照品适量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含对照品 50 μg 的溶液，即得对照品溶液。

2.2.3 供试品制备 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密称定，研细粉，取0.5 g细粉，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇约45 mL，将所制得供试品溶液进行超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，离心机离心，取上清液，即得供试品溶液。

2.2.4 样品测定 按2.1.4样品测定方法。色谱图如图2所示，测定结果见表1。

2.3 维生素C、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Sysmetry C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流动相：0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.0，含1%三乙胺)-乙腈(75∶25)；进样量：10 μL；检测波长：260 nm。

2.3.2 对照品制备 分别准确称取维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏对照品适量，以流动相溶解，置于同一50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，制得含维生素C 103 μg/mL，对乙酰氨基酚102 μg/mL，马来酸氯苯那敏218 μg/mL的混合对照品溶液。

2.3.3 供试品制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细粉，称取适量(约相当于1片药物的质量)，置于100 mL容量瓶中，加流动相适量，将所制得供试品溶液进行超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30 min，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3.4 样品测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定。色谱图如图3所示，测定结果见表1。

2.4 主成分分析 主成分分析是利用降维的思想，在损失最少信息的前提下把多个指标转化为几个综合指标的多元统计方法[4]。从不同厂家维C银翘片中有效成分含量主成分分析结果可得，前2个主成分分析的累积方差贡献率分别达到65.608%、90.593%，表明前2个主成分可以解释分类信息的90.593%，能够反映不同厂家维C银翘片的质量，结果见表2和图4。由图4可知不同生产厂家的维C银翘片分为3类，编号3、4、7和8为一类，编号1、2、9和10为一类，5和6为一类。

2.5 聚类分析 聚类分析是用距离来测定样品之间的相似程度，为相似样品归类的最常用方法，常用于中药质量评价[5-6]。本研究以维C银翘片中的有效成分的含量结果为变量，运用SPSS 18.0 统计软件，以平均Euclidean距离为度量标准，采用组间联接的方法对10批样品进行系统聚类分析，结果见图5。在组间距为25时，将10个批次样品分为3类，编号3、4、7和8为一类，编号1、2、9和10为一类，5和6为一类。该结果与主成分分析结果一致。

表2 主成分特征值和贡献率

4 讨论

4.1 不同厂家维C银翘片中西药成分分析 药典规定维C银翘片每片含维生素C 49.5 mg、对乙酰氨基酚105 mg、马来酸氯苯那敏1.05 mg。每片含维生素C应为标示量的90.0%～110.0%，即44.55～54.45 mg，每片含对乙酰氨基酚应为标示量的90.0%～110.0%，即94～115.5 mg，每片含马来酸氯苯那敏应为标示量的85.0%～115.0%，即0.8925～1.2075 mg。经检测发现5个厂家药品中3种成分含量均符合规定，但结果均在规定范围的下限，分析原因可能是生产厂家在符合药典规定的前提下采用接近下限投药量来生产药品从而减少生产成本。

4.2 不同厂家维C银翘片中中药成分分析 药典规定每片含绿原酸不得少于1.5 mg，含牛蒡苷不得少于2.5 mg，大部分厂家的检测结果均符合规定，但个别厂家的检测结果中绿原酸的含量却低于规定量。本研究认为该种药物需增加金银花药材成分的含量测定，从而更有效地控制该种药品的生产工艺，保证药物疗效。

4.3 检测波长的确定 对维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏进行紫外扫描，在200～400 nm范围内扫描，维生素C、对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的最大吸收波长分别为245、249和260 nm。马来酸氯苯那敏在该制剂处方中所占含量较少，因此选择260 nm作为三种成分的共同检测波长，在此检测波长下，维生素C和对乙酰氨基酚也具有较大吸收，检测灵敏度足以达到分析要求[7]。

5 结论

研究结果表明不同企业生产维C银翘片质量有差异，主要因为生产工艺和生产原料的不同，为确保药品的临床疗效和安全，不同厂家应严格把关原料的质量和稳定、规范的生产工艺。本研究所建立的HPLC法测定维C银翘片指标成分含量，方法简单、快速，通过主成分分析和聚类分析评价不同生产企业样品质量，为维C银翘片的质量评价提供了客观数据和参考方法。