BC-6900全自动血液细胞分析仪检测外周血有核红细胞的准确性分析*

黄海丽，刘小柳，肖昭君，邓玉容，张秀明△

1.广东省深圳市罗湖区妇幼保健院检验科，广东深圳 518000；2.广东省深圳市罗湖医院集团医学检验实验室/深圳大学第三附属医院医学检验科，广东深圳 518001

外周血有核红细胞(NRBC)是骨髓红系造血系统释放的幼稚红细胞[1]，通常可在各个年龄段人群的骨髓中以及胎儿和新生儿的血液中出现。婴儿期后，红细胞通常仅在细胞生命的早期才存在细胞核，细胞核仅在细胞释放到血液中之前出现。因此，如果在成年人的外周血涂片上看到NRBC，则表明人体对骨髓产生红细胞的需求非常高，并且未成熟的红细胞正在释放到循环中，其可能的病理原因包括贫血、骨髓纤维化、珠蛋白生成障碍性贫血、粟粒性结核、涉及骨髓的癌症(骨髓瘤、白血病、淋巴瘤)和慢性低氧血症[2-3]。外周血液中的NRBC多为晚幼红细胞，也可见中幼红细胞或更幼稚的红细胞(如红血病、红白血病)，NRBC会与淋巴细胞同时计数造成白细胞计数升高。因此，准确分类和计数外周血液中的NRBC对某些疾病的诊断、治疗及预后具有重要意义[4]。但是，实验室常采用显微镜人工计数NRBC[5]，计数结果是NRBC百分数(100个白细胞中NRBC所占的数量)，费时且受检验人员主观因素影响大，临床应用受限[6]。

BC-6900全自动血液细胞分析仪可对外周血中NRBC进行计数，采用的是鞘流电阻抗 (DC)/射频(RF)检测原理和半导体激光流式细胞原理。其DIFF通道是应用激光散射结合荧光染色多维分析技术(SF Cube)，红细胞/血小板通道是应用双鞘流阻抗技术[7]，利用荧光染色对细胞核进行染色，S-Scatter散射光(前向、侧向散射光检测细胞大小、复杂程度)、F-Fluorescence荧光(侧向荧光检测细胞内核酸物质含量)、Cube立方体(由散射和荧光信号组成的多维分析技术)将NRBC和白细胞、红细胞和血小板区别分开。为分析BC-6900全自动血液细胞分析仪对外周血NRBC计数的准确性及其临床应用价值，本研究以显微镜下的人工计数作为金标准，用于评价BC-6900全自动血液细胞分析仪检测NRBC的准确度和性能分析。

1 资料与方法

1.1一般资料 任意选取2019年11月至2020年4月深圳大学第三附属医院血液科、新生儿科、肿瘤科、肾内科及罗湖区妇幼保健院儿科和康复儿科等科室的住院患者100例，其中男57例，女43例；血液病患者42例，非血液病患者58例；年龄2～59岁，平均(41.7±12.6)岁。标本纳入标准：无溶血、无黄疸、无脂血。标本采集严格按照《临床化学检验血液标本的收集与处理》(WS/T225-2002)[8]的要求进行。本研究为回顾性分析，对患者无损伤，不涉及隐私，不涉及伦理问题。

1.2仪器与试剂

1.2.1仪器 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BC-6900全自动血液细胞分析仪、SC-120自动血涂片制备仪，Olympus CX-31显微镜(日本奥林巴斯)、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)血液抗凝管。

1.2.2试剂 均采用迈瑞公司BC-6900全自动血液细胞分析仪原装血常规试剂。血细胞分析用稀释液：DS稀释液，批号2020021001；M-68DR稀释液，批号2019080301。血细胞分析用溶血剂：M-68LB溶血剂，批号2020011101；M-68LD溶血剂，批号2019101001；M-68LN溶血剂，批号2019092601； M-68LH溶血剂，批号2019090901。血细胞分析用染色液：M-68FN染色液，批号2019071901；M-68FD染色液，批号2020020401。SC-120自动血涂片制备仪原装试剂：甲醇、去离子水、瑞氏姬姆萨染液，批号2020010401。

1.3方法

1.3.1质控检测 选择低、中、高值3个水平质控品，每天进行室内质控，所检测的指标在控状态下对批内精密度、稳定性、携带污染率、人机比对进行评价。

1.3.2质控品 质控品为低值质控品(批号为MB0320AL)、中值质控品(批号为MB0320AN)、高值质控品(批号为MB0320AH)，质控品均由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供。BC-6900全自动血液细胞分析仪所使用的试剂、校准品及质控品均在有效期内。

1.3.3批内精密度 取NRBC计数百分数处于高、中、低值范围内的标本各1份，由主管技师以上职称的检验人员在30 min内操作仪器计数11次，计算各自均值及变异系数(CV)。重复性试验可反映各次测定结果的接近程度，用于评估某种分析方法随机误差的大小。

1.3.4稳定性 取NRBC计数百分数处于高、中、低值范围内的标本各1份，分别于室温条件下放置1、2、4、6、8、12、24、48 h后测定NRBC，记录各次试验结果，计算均值及CV。稳定性试验可反映放置时间对标本的影响，为标本保存提供参考。

1.3.5携带污染率 从已检测出NRBC值的同一批标本中选择高值标本连续测定3次(H1、H2、H3)，随后立即取1份低值标本连续测定3次(L1、L2、L3)。按公式计算携带污染率：携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。携带污染率试验可用来显示不同水平样品间连续测定的相互影响，主要反映高含量标本对低含量标本的影响，是评价仪器性能的重要指标。

1.4NRBC计数方法

1.4.1BC-6900全自动血液细胞分析仪法(简称仪器法) 所有标本严格按照标准操作规程和方法进行血细胞分析检测，在测定标本前对仪器进行日常清洗及维护，按要求进行室内质控(高、中、低值3个水平)，均在质控后检测EDTA-K2抗凝血标本，并在4 h内完成检测。

1.4.2显微镜检查法(简称镜检法) SC-120自动血涂片制备仪制片后，由经过专业培训的细胞形态室主任技师采用双盲法独立对血涂片分类计数200个白细胞，同时记录所见NRBC数量，计数结果以NRBC#=白细胞计数×NRBC%表示，取平均值与仪器法的检测结果进行比较。

1.4.3判断标准 仪器法和镜检法只需检出NRBC为阳性，反之为阴性。 以镜检法为金标准，仪器法和镜检法检测均阳性者为真阳性，两者均阴性者为真阴性，仪器法检测阳性而镜检法检测阴性者为假阳性，仪器法检测阴性而镜检法检测阳性者为假阴性。灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率计算公式如下:灵敏度=真阳性数/(真阳性数+假阴性数)×100%；特异度=真阴性数/(真阴性数+假阳性数)×100%；假阳性率=假阳性数/金标准阴性数×100%；假阴性率=假阴性数/金标准阳性数×100%。

2 结 果

2.1重复性试验 仪器法检测，低、中、高值NRBC的批内CV值均<5.000%，重复性良好。见表1。

表1 仪器法计数NRBC的批内精密度

2.2稳定性试验 仪器法分析1～48 h内 NRBC计数结果稳定，各时间点结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 仪器法计数NRBC稳定性试验结果

2.3携带污染率 从已检测出NRBC值的同一批标本中选择1份高值标本采用仪器法连续测定3次，H1、H2、H3分别为20.32、20.46、20.41×109/L，随后立即取1份低值标本采用仪器法连续测定3次，L1、L2、L3分别为1.43、1.42、1.42×109/L，故仪器法检测NRBC计数的携带污染率为0.05%，在可接受范围内(携带污染率要求≤0.5% )。

2.4仪器法与镜检法检测NRBC计数结果比较 以镜检法为金标准，100例检测标本中仪器法计数NRBC阳性50例(2例镜检法为阴性)，阴性50例(1例镜检法为阳性)；仪器法计数NRBC灵敏度为97.959%(48/49)，特异度为96.078%(49/51)，假阳性率为3.922%(2/51)，假阴性率为2.041%(1/49)；2种检测方法比较，NRBC计数结果差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。对仪器法和镜检法NRBC计数均为阳性的48例标本进行相关性分析，以仪器法测定值为X，镜检法测定值为Y，得到回归方程Y=0.802 4X+0.057 8，相关系数r=0.973 1，2种方法检测结果存在线性关系，见图1。

表3 仪器法与镜检法NRBC计数结果比较(n)

图1 仪器法与镜检法NRBC计数结果的相关性

3 讨 论

NRBC是不成熟的红细胞，通常在新生儿后期的外周血中不可见。它们在儿童和成人外周血中出现表明骨髓损伤或潜在严重的基础疾病。大量NRBC的存在会增加自动血液分析仪中的白细胞数量。大多数分析仪会生成可疑标记，以帮助识别异常细胞，所涉及的标本应手动检查。但是，许多分析仪可能无法检测出低水平的NRBC，造成细胞的分类错误，引起白细胞计数的假阳性增高，故准确地计数NRBC显得尤其重要。例如，在新生儿外周血白细胞计数准确的情况下，可以帮助医务人员鉴别新生儿是细菌性感染还是病毒感染，根据感染情况来诊断患儿的病症并展开相应的救治工作[9-10]。发现NRBC时，需要检验人员通过人工显微镜计数的方法对白细胞计数加以校正[11-12]。人工显微镜计数是判断NRBC的金标准，但是其具有操作复杂，容易受推片、细胞染色、细胞分布差异和人为主观判断等因素的影响，非常不易实现标准化。最近几年，随着检测技术的不断发展和演进，越来越多的全自动血液分析仪被用于外周血NRBC计数。但目前市场上全自动血液分析仪型号较多，使用的试剂品牌也较多，品质参差不齐，没有一个统一的标准，给临床医生的诊断和治疗带来了非常多的不便[13]。

BC-6900自动血液细胞分析仪是迈瑞最新一代的荧光流式细胞仪，其非常大的一个优点就是，在全血细胞计数时可以同时完成NRBC计数，而不需要再改变测试通道和标本注入模式。同时，NRBC计数结果还可以用于校正白细胞计数结果，以获得准确的白细胞计数，这为临床判断患者的病情提供了准确而有力的依据。

本研究表明，BC-6900全自动血液细胞分析仪在计数不同水平的NRBC标本都有较高的重复性；稳定性试验结果表明，标本在48 h内测定结果稳定，即使日常工作中标本未能及时送检也不影响NRBC的检验结果。仪器法检测NRBC的灵敏度为97.959%，特异度为96.078%，假阳性率为3.922%，假阴性率为2.041%，仪器法与镜检法计数外周血NRBC数量有极好的相关性(r=0.973 1)，两者差异无统计学意义(P>0.05)。但值得注意的是，在NRBC计数结果比较低的情况下(0.1%～1.0%)，细胞分析仪会出现少量假阴性和假阳性结果。这可能是细胞分析仪在辨认细胞时出现错误，也可能是因为细胞分析仪在进行检测时，其检测的数量远远多于显微镜法，因此检出NRBC的概率可能会相对比较高。

综上所述，BC-6900全自动血液细胞分析仪能同时提供NBRC的绝对值和百分数2种参数结果，可有效避免NBRC对检验结果的干扰，仪器法检测NRBC性能较好，与镜检法具有良好的相关性。其检测所使用的标本量很少，检验结果准确性可靠、检测效率高和检测性能良好，是比较优越的血液分析仪，基本符合临床医生对全血检测分析的需求。