22份小麦粉中4种真菌毒素的快速检测

◎ 牛伟伟，杨 莹，郭 舟，徐 程，邱韵心

（襄阳市公共检验检测中心，湖北 襄阳 441000）

玉米赤酶烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1是在小麦、玉米和大麦中常见的4种真菌毒[1]。当小麦在田间受到真菌毒素污染时，小麦粉也会存在一定量的真菌毒素，而小麦粉是我国主要的粮食加工品，其安全问题与人们的日常饮食息息相关[2]，而目前国家标准方法中检测真菌毒素对仪器条件要求较高，且操作复杂[3]。本试验采用快速试剂条和国家标准方法对比，旨在研究快速试剂卡大批量筛查小麦粉中4种真菌毒素的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市面上随机抽取22份不同厂家的小麦粉；4种真菌毒素标准溶液、快速检测试剂条、免疫亲和柱（检测试剂盒）。

1.2 仪器与设备

岛津LC-20AT高效液相色谱（带紫外检测器和荧光检测器）、酶标仪、离心机、涡旋仪、氮吹仪、空气压力泵、电子天平、微量移液枪、玻璃纤维滤纸。

1.3 标准溶液配制

1.3.1 玉米赤酶烯酮标准曲线

取标准储备液，用流动相稀释，配制成10.26 ng·mL-1，51.30 ng·mL-1、102.6 ng·mL-1、205.2 ng·mL-1和513.0 ng·mL-1的系列标准溶液。

1.3.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准曲线

磷酸盐缓冲溶液：精确称取8.00 g氯化钠、1.20 g磷酸氢二钠、0.20 g硫酸二氢钾，用900 mL纯水溶解，用盐酸调节pH至7.0，用水定容至1 000 mL。

取标准储备液，用流动相稀释，配制成50 ng·mL-1，100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和400 ng·mL-1的系列标准溶液。

1.3.3 赭曲霉毒素A标准曲线

清洗缓冲溶液：精确称取25.0 g氯化钠5.0 g磷酸氢二钠，加入0.1 mL吐温20，用水稀释至1 L。

取标准储备液，用流动相稀释，配制成2.85 ng·mL-1、7.125 ng·mL-1、14.25 ng·mL-1、28.5 ng·mL-1和57.0 ng·mL-1的系列标准溶液。

1.3.4 黄曲霉毒素B1标准曲线

取标准储备液，逐级稀释成配制成2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1和50 ng·mL-1的系列标准溶液。

1.4 前处理及仪器条件

1.4.1 玉米赤霉烯酮

（1）快速检测试剂条法。称取1 g小麦粉于10 mL离心管中，加入4 mL 70%甲醇-水溶液，涡旋混匀后，离心5 min，取20 μL上清液加入0.3 mL样品稀释液，涡动备用，吸取200 μL待测液于金标微孔中，待紫色颗粒完全溶解，室温放置3 min，将试纸条插入金标微孔中反应5 min后取出，根据说明书判定结果。

（2）高效液相色谱法。荧光检测器；色谱柱：C18柱；流动相：乙腈-水-甲醇（46∶46∶8）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：激发波长274 nm，发射波长440 nm，进样量：50 μL；柱温：35 ℃。

1.4.2 呕吐毒素

（1）快速检测试剂条法。称取1 g小麦粉加入6 mL 70%甲醇-水溶液，涡旋混匀后离心，取50 μL上清液加入0.35 mL（或0.75 mL）样品稀释液混匀备用，吸取200 μL待测液于金标微孔中，紫色颗粒完全溶解后放置3 min，将试纸条插入金标微孔中，5 min后判读结果。

（2）高效液相色谱法。紫外检测器；色谱柱：C18柱；流动相：甲醇-水（20∶80）；流速：0.8 mL·min-1；检测波长：218 nm；进样量：50 μL；柱温：35 ℃。

1.4.3 赭曲霉毒素A

（1）快速检测试剂条法。称取1 g小麦粉加入4 mL 50%甲醇-水溶液，涡旋混匀离心取100 μL上清液加入300 μL样品稀释液混匀备用，吸取 200μL待测液于金标微孔中，待紫色颗粒完全溶解后放置3 min，将试纸条插入金标微孔中反应5 min后取出，1 min内判读结果。

（2）高效液相色谱法。荧光检测器；色谱柱：C18柱；流动相：乙腈-水-冰乙酸（96∶102∶2）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：激发波长333 nm，发射波长460 nm，进样量：50 μL；柱温：35 ℃。

1.4.4 黄曲霉毒素B1

（1）快速检测试剂条法。称取1 g小麦粉加入3 mL 70%甲醇-水溶液，振荡后离心，取100 μL上清液加入300 μL样品稀释液混匀备用，吸取200 μL待测液于金标微孔中，待紫色颗粒完全溶解后放置3 min，将试纸条插入金标微孔中反应5 min后取出，1 min内判读结果。

（2）酶联免疫吸附法。称取20 g小麦粉与三角瓶中，加100 mL 70%甲醇-水，振荡提取，静置后过滤，用缓冲液稀释，按照试剂盒说明书进行操作。用酶标仪在450 nm滤镜及示差滤镜630 nm下读取结果。

1.5 结果判定

若检测值低于方法的检出限，则该项目结果视为未检出，各方法的检出限具体见表1。

表1 4种真菌毒素的检出限表

2 结果与分析

两种检测方法结果具体见表2，22批小麦粉中玉米赤酶烯酮、赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1的检测结果一致，均为未检出，其中4批小麦粉用两种方法均检出了脱氧雪腐镰刀菌烯醇，数据结果基本一致。

表2 4种真菌毒素数据结果表（单位：μg·kg-1）

续表2

3 讨论

用快速检测卡和国家标准方法检测小麦粉中4种真菌毒素，通过对比结果发现快速检测卡和国家标准方法结果基本一致，而且此操作简单、耗时短，可适用于大批量快速筛查。