以标准汤剂指标评价三种姜汁炮制姜厚朴的质量

田 方，高 晗，孙福仁，耿彦梅，李雪利，曾永祯，李军山，2*

(1.神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430；2.楚雄神威施普瑞药物研究有限公司，云南 楚雄 675000)

厚朴始载于汉代的《神农本草经》，作为理气化湿药，历来有着广泛的临床应用，现有记载的中成药配方达200多种[1]。厚朴药材为木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥树皮、根皮及枝皮，其味苦、辛，性温，归脾、胃、肺、大肠经，具有燥湿消痰、下气除满的功效[2]。“不以姜制，则棘人喉舌”，因此厚朴常制成姜厚朴入药[3]。

姜厚朴的姜汁炮制方法有三种，分别为生姜榨汁、干姜煮汁、生姜煮汁，《中国药典》采用的是生姜榨汁的方法。不同方法制得的姜厚朴质量不同，通过质量评价可为其炮制工艺提供依据。目前，姜厚朴的质量评价大多数是检测饮片的性状、浸出物含量、挥发性成分、色谱图等[4-9]。近些年来钟凌云等[3，10-11]针对姜厚朴对大鼠和小鼠胃黏膜损伤的抑制作用、抗炎镇痛作用进行了药理研究，从药效方面对姜厚朴的质量进行了评价。鉴于中药多以汤剂形式应用于临床[12]，随着标准汤剂概念的提出及其在中成药物质基础研究中的应用，笔者认为采用标准汤剂的评价指标对饮片质量进行评价较为合理。本实验将三种姜汁炮制方法制得的姜厚朴分别制成标准汤剂，采用标准汤剂指标初步评价饮片质量，为姜厚朴的炮制工艺提供参考依据。

1 仪器与试剂

日本岛津公司高效液相色谱仪(LC-20AT型泵)，真空冷冻干燥机(Tofflon)，CPA225D分析天平(Sartorius)，JM-A5002电子天平(余姚市纪铭称重校验设备有限公司)，水循环真空泵(上海申生科技有限公司)，DHG-9140A热风循环鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司、太仓精宏仪器设备有限公司)，KH3200E型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)，Shunliu-12N型冷冻干燥机(南京顺流仪器有限公司)。

厚朴酚(批号111911-201603，中国食品药品检定研究院)，和厚朴酚(批号111809-201403，中国食品药品检定研究院)；色谱纯甲醇(批号20180713，天津科密欧化学试剂有限公司)，分析纯甲醇(批号20190228，北京益利精细化学品有限公司)。鲜姜、干姜购自于山东，厚朴药材来自道地产区四川[8]，经原河北省药品检验研究院孙宝惠主任中药师鉴定，均为正品，且经检测各项指标均符合2015年版《中国药典》要求。

2 方法与结果

2.1 姜厚朴的制备

2.1.1 厚朴饮片制备 取厚朴药材，刮去粗皮，洗净，润透，切成直径为2～5 mm的丝，备用。另取部分厚朴药材，刮去粗皮，备用。

2.1.2 姜厚朴制备 生姜榨汁：取生姜，洗净，捣烂，加0.7倍量水，压榨取汁，再加水适量，压榨取汁，合并两次汁液，使得生姜汁∶生姜=1∶1(mL/g)。取厚朴丝，加生姜汁拌匀，闷润1 h，用文火炒干，取出晾凉。用量为厚朴丝∶生姜=100∶10，制得3批饮片。

干姜煮汁：取干姜片，洗净，加6倍量水，煮沸后煎煮20 min，取煎液即得干姜汁。取厚朴丝，加干姜汁拌匀，闷润至姜汁被吸尽，用文火炒干，取出晾凉。用量为厚朴丝∶干姜=100∶3.3，制得3批饮片。

生姜煮汁：取生姜，切片，加水煮汤，另取刮去粗皮的厚朴药材，置于姜汤中，反复烧淋，并用微火加热共煮，至姜液被吸尽时取出，切丝，干燥，制得3批饮片。

2.2 姜厚朴标准汤剂冷干样品制备

取9批自制姜厚朴饮片，每个炮制方法取3个样品，各称取100 g，至陶瓷煎药壶中，煎煮两次，第一煎加8倍量水，浸泡30 min，煮沸，保持微沸煎煮30 min，100目筛网过滤；二煎加7倍量水，煮沸，保持微沸煎煮20 min，100目筛网过滤。合并两次煎液，减压浓缩至适量，冷冻干燥，即得。

2.3 姜厚朴饮片标准汤剂中厚朴酚与和厚朴酚含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(78∶22)为流动相，检测波长为 294 nm。理论塔板数按厚朴酚色谱峰计算应不低于3 800。

2.3.2 对照品溶液制备 取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL含厚朴酚 20 μg、和厚朴酚10 μg的混合溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液制备 取本品粉末约 0.1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率 250 W，频率 40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪测定，即得。见图1、图2。

图1 对照品色谱

图2 供试品色谱

2.3.5 方法学考察 (1)精密度考察。按照“2.3.3”项下方法制备样品1份，按照“2.3.1”项下色谱条件平行进样6次，结果见表1。厚朴标准汤剂中厚朴酚峰面积RSD为1.14%，和厚朴酚峰面积RSD为1.26%，表明仪器精密度良好。

表1 精密度测定结果

(2)重复性考察。按照“2.3.3”项下方法，平行制备样品6份，按照“2.3.1”项下色谱条件进样测定，测定结果见表2。厚朴标准汤剂中厚朴酚平均含量为0.562%，RSD为1.25%；和厚朴酚平均含量为0.367%，RSD为1.32%，表明该方法重复性良好。

表2 重复性考察结果 (%)

(3)稳定性试验。取一份已制备好的供试品，分别于放置0、2、4、6、8、12 h后按照“2.3.1”项下色谱条件进样测定，结果见表3。厚朴标准汤剂供试品在12 h内厚朴酚平均含量为0.569%，RSD为0.96%；和厚朴酚平均含量为0.372%，RSD为1.39%，表明供试品在12 h内较稳定。

表3 稳定性考察结果 (%)

(4)加样回收率试验。分别精密称取厚朴酚对照品20 mg、和厚朴酚对照品10 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。取本品粉末(编号YP1-2)约0.05 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入对照品储备液150 μL，甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。实验结果见表4。厚朴酚与和厚朴酚总量加样回收率为97.62%～98.76%，平均回收率为98.16%，RSD为0.43%。

表4 厚朴酚、和厚朴酚准确度考察结果 (n=6)

2.4 姜厚朴饮片标准汤剂中其他指标测定

分别对标准汤剂的出膏率、pH值、浸出物含量进行测定：①理论出膏率测定：量取煎煮提取液总体积(室温)V(mL)，搅拌均匀后精密吸取25 mL提取液至干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，干燥器中冷却后，迅速精密称定重量m1(g)，若药材重量为m2(g)，则理论出膏率为m1/25×V/m2×100%；②pH测定方法：参照《中国药典》2015年版通则0631 pH值测定法；③浸出物测定：取标准汤剂冻干粉末约2.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇100 mL，按照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版 通则2201)项下的热浸法测定。结果见表5，3组不同姜汁炮制方法制得的姜厚朴饮片含量和提取液pH无明显差异，由生姜榨汁制得的姜厚朴标准汤剂出膏率、标准汤剂含量、含量转移率明显高于其他两种。由于厚朴酚与和厚朴酚在水中的溶解度较小[13]，而姜厚朴标准汤剂为姜厚朴经水提制成，故含量转移率较低。

表5 不同姜汁炮制方法制得姜厚朴标准汤剂测定结果

采用上述标准汤剂指标初步评价姜厚朴的饮片质量，最终选择生姜榨汁为姜厚朴的姜汁炮制工艺，该结果与现行版《中国药典》规定的炮制方法一致。

3 讨论

研究[14-24]表明，厚朴酚及和厚朴酚是姜厚朴中抗菌、抗炎、抗肿瘤的主要活性成分，2015版《中国药典》以厚朴酚和和厚朴酚总量为指标成分控制厚朴药材及饮片的质量，而在厚朴相关复方中，也常以厚朴酚和和厚朴酚作为指标成分评价复方制剂的质量，因此本实验选定厚朴酚与和厚朴酚总量作为姜厚朴标准汤剂的评价指标。

我国幅员辽阔，不同地域人群的体质差异较大，地方用药习俗和药材加工方法差异也较大，各地炮制方法往往并不能全面地被药典收载进去。如何结合现代中药研究技术考证流传下来的何种炮制方法最为适宜，这是一项大工程。本实验仅以姜厚朴标准汤剂指标初步评价饮片的质量，而实际上姜厚朴多是经过组方应用于临床，由于多味中药可能产生相互影响，单方标准汤剂指标尚不能全面评估组方标准汤剂的质量。本实验旨在为姜厚朴的炮制工艺提供研究思路，不能代替临床药理研究，且选用的是道地产区四川的厚朴药材，不同产地厚朴制得的姜厚朴标准汤剂质量如何，有待进一步研究。