多穗柯叶中根皮苷的含量变化及抗氧化性*

王代波，刘国华，李冰晶，赵景芳，徐 青，王济红

(贵州省生物研究所，贵州 贵阳 550009)

多穗柯(LithocarpuspolystachyrusRehd.)[1]，又称甜茶、甜叶子树、甘茶等[2]，系壳斗科栎属常绿植物，主要以野生形式分布在我国南方低山密林中，印度、泰国也有分布。民间采摘多穗柯嫩叶制成甜茶，其香气浓郁，色泽鲜艳，回味甘甜持久，风味独特[3]，多穗柯在我国用作茶饮料使用已经有上千年历史，长期的应用历史表明多穗柯叶有清热利湿的功能[4]，可治湿热痢疾、皮肤瘙痒、痈疽恶疮等。多穗柯还是一种具有多种保健功能的别样茶，有研究表明，多穗柯的主要活性成分二氢查耳酮类具有降血糖、抗过敏、抗氧化、抑菌、改善记忆力等药理作用[5-11]。根皮苷是多穗柯的主要甜味成分，有可能是多穗柯的主要活性成分，大量的研究表明根皮苷在治疗糖尿病、肥胖、应激性高血糖及抗氧化、膜通透性、抗衰老等方面具有广泛的活性[12]，广泛用在食品、饮料、食品添加剂、药物和化妆品中。本文以不同时期的多穗柯叶为原料，采用超声波辅助提取方法，比较四个季节根皮苷的含量变化及抗氧化活性，以期为多穗柯深度利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

多穗柯叶(采自贵州罗甸)、根皮苷对照品(纯度>98%，批号：GT67195，酷尔化学科技有限公司)、水杨酸、浓盐酸、双氧水、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、邻苯三酚、无水乙醇、维生素C、DPPH，以上试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

JEA502型中药粉碎机(北京市泰和格润仪器有限公司)；FW135/FW200电子天平(上海谱春计量仪器有限公司)；KQ-800DE超声波仪器(昆山市超声仪器公司)；SHIMADZU UV-1750紫外分光光度计；800电动离心机(上海梅香仪器有限公司)；HH-S4电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)。

1.3 实验条件

1.3.1 根皮苷测定

紫外分光光度计对根皮苷标准溶液于284 nm 处进行扫描[13]，得出根皮苷标准曲线回归方程为Y=31.02X+0.0253，R2=0.9995，其中Y为根皮苷浓度(mg/mL)，X为吸光度值。取1 mL待测样液，利用无水乙醇将其稀释为100 mL，于284 nm 下测定其吸光度，根据吸光度可得出根皮苷浓度。

1.3.2 根皮苷提取工艺

将采自春、夏、秋、冬四个季节的多穗柯叶于60 ℃烘箱烘干，然后用粉碎机将多穗柯叶粉碎，过筛(2号筛，24目)得样品，分别准确称取春、夏、秋、冬四个样品各三组，每组样品1.0 g置于100 mL锥形瓶中，加入40 mL体积分数为70%乙醇溶液，置于50 ℃水浴锅冷凝回流提取60 min，过滤取定量提取液，稀释、定容，过膜测定根皮苷吸光值，计算根皮苷得率。

1.3.3 根皮苷粗提物抗氧化实验

清除HO·能力测定方法[13]：在试管中依次加入10 mmol/L的FeSO42 mL、8.8 mmol/L H2O22 mL、1 mL样品溶液，最后加入10 mmol/L水杨酸2 mL，在37 ℃反应30 min。以蒸馏水作参比，在510 nm波长测定吸光度，并同时做不加显色剂的样品空白，以VC作为阳性对照，根据公式计算清除率。

清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100%

式中：A为加入样品液的吸光度；A1为不加显色剂H2O2溶液的吸光度；A0以蒸馏水代替样品的吸光度。

清除DPPH·能力测定方法[14]：取2 mL不同条件下提取样品溶液于10 mL棕色瓶中，再分别加入2 mL DPPH·溶液(0.1 mmol/L，该溶液避光保存温度为4 ℃，现用现配)摇匀，在37 ℃下暗处放置30 min，分别在517 nm波长处测吸光度，以VC作为阳性对照，根据公式计算清除率：

清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100%

式中：A为加入样品液与DPPH溶液的吸光度；A1为加入样品液与乙醇的吸光度；A0为加入DPPH·溶液与乙醇溶液的吸光度。

清除率(%)=[1-(A-A1)/A0]×100%

式中：A为样品液的吸光值；A1为样品本底的吸光值；A0为空白对照，双蒸馏水代替样品的吸光值。

2 结果与分析

2.1 根皮苷的含量变化

四个季节的多穗柯叶根皮苷的含量如图1所示，随着季节的推移，根皮苷含量呈现先上升后下降的趋势，在秋季多穗柯叶中根皮苷含量最高，每1 g多穗柯叶中根皮苷含量可达49.959 mg。

图1 根皮苷含量变化图

2.2 根皮苷粗提物抗氧化性实验

2.2.1 HO·清除效果

根皮苷对HO·清除效果如图2所示，根皮苷对HO·的清除效果显著并高于VC，且随着季节的推移，根皮苷对HO·清除率呈现先下降后升高的趋势，春季的多穗柯叶根皮苷清除HO·的效果最高可达40.13%，秋季效果最低，HO·清除率为32.61%。

图2 根皮苷粗提物对HO·清除率

2.2.2 DPPH·清除效果

根皮苷对DPPH·清除效果如图3，根皮苷对DPPH·的清除效果与VC几乎持平，且春季、秋季、冬季的多穗柯叶根皮苷对DPPH·清除率也几乎等同，夏季多穗柯叶根皮苷DPPH·的清除效果最低，清除率也高达80.62%。

图3 根皮苷粗提物对DPPH·清除率

图4 根皮苷粗提物对清除率

3 结论