人乳头瘤病毒水平与宫颈局部免疫功能对高危型人乳头瘤病毒感染宫颈癌患者的影响

黑江荣，解雁飞，张利平

延安大学附属医院产科，陕西 延安 716000

宫颈癌是发生在子宫颈部的恶性肿瘤，作为妇科常见肿瘤其发病率居第二位，且呈不断上升趋势，逐渐成为威胁女性生命安全的重要疾病。有研究显示，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是引发宫颈癌的重要因素，高危型HPV长期持续感染是诱发和加速宫颈细胞恶性转化的重要原因。但宫颈癌的发生是多种因素共同作用的结果，仅感染HPV常不足以进展为宫颈癌，感染高危型HPV后引起的机体免疫功能改变、宫颈病变转归和微环境改变均是促进癌变的重要因素。机体免疫调控机制较为复杂，免疫细胞与局部微环境之间相互制约、相互调节，当机体免疫功能下降时，无法清除体内HPV，使机体长期处于HPV感染状态使得病情逐渐发展为宫颈癌。因此，对宫颈癌患者HPV水平与宫颈局部免疫功能的相关性进行研究，可为早期预防和诊断宫颈癌提供科学依据。基于此，本研究探讨HPV水平与宫颈局部免疫功能对高危型HPV感染宫颈癌患者的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2019年7月至2020年9月于延安大学附属医院就诊的宫颈癌患者、慢性宫颈炎患者和宫颈上皮内瘤变患者的病历资料。纳入标准：①宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者均经病理组织检查确诊；②均经荧光定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）确诊感染HPV；③均有性生活史；④临床资料完整。排除标准：①伴有严重的肝肾损伤和凝血功能异常；②合并其他恶性肿瘤；③纳入研究前3个月内进行过免疫治疗或放化疗；④妊娠期或哺乳期妇女；⑤有严重内外科疾病；⑥纳入研究前3天进行过阴道用药或性生活；⑦有精神疾病或认知障碍难以配合研究。根据纳入、排除标准，共纳入76例宫颈癌患者（宫颈癌组）、40例慢性宫颈炎患者（慢性宫颈炎组）和40例宫颈上皮内瘤变患者（宫颈上皮内瘤变组）。宫颈癌组患者，年龄 25～57岁，平均（42.37±4.96）岁；体重指数（body mass index，BMI）为（23.37±1.12）kg/m。慢性宫颈炎组患者，年龄25～56岁，平均（41.97±5.05）岁；BMI为（23.41±1.20）kg/m。宫颈上皮内瘤变组患者，年龄25～57岁，平均（42.20±4.92）岁；BMI为（23.35±1.23）kg/m。3组患者年龄、BMI比较，差异均无统计学意义（

P

＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过。

1.2 检测方法

HPV水平检测：在所有患者入院后采集样本，用无菌扩阴器撑开患者阴道使宫颈充分暴露后，用棉签擦拭去宫颈处分泌物，用HPV宫颈刷沿宫颈口顺时针旋转取样，旋转5圈左右并稍作停留后取出，折断刷柄保存在专用细胞保存液取样管中，盖好管盖，样本保存在4℃左右环境中待检。按照试剂盒说明书抽提mRNA和反转录合成cDNA，利用qPCR检测步骤测定

HPV

-DNA。

宫颈局部免疫功能检测：在所有患者入院后采用无菌刷子采集患者宫颈内口分泌物8 ml于无菌试管中。应用流式细胞检测仪检测患者宫颈局部免疫功能指标水平，包括 CD4、CD8、CD4/CD8、CD56和调节性T细胞（Treg）水平。

1.3 观察指标

①比较3组患者免疫功能指标水平和HPV水平。②比较有无淋巴结转移组宫颈癌患者的免疫功能指标水平。③比较死亡组和生存组宫颈癌患者免疫功能指标水平。④分析HPV水平与各免疫功能指标之间的关系。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 免疫功能指标和HPV水平的比较

宫颈癌组患者HPV、CD8和Treg水平最高，宫颈上皮内瘤变组患者次之，慢性宫颈炎组患者最低，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）；宫颈癌组患者CD4、CD4/CD8、CD56水平最低，宫颈上皮内瘤变组患者次之，慢性宫颈炎组患者最高，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）。（表1）

表1 3组患者免疫功能指标和HPV水平的比较（±s）

2.2 有无淋巴结转移患者HPV和免疫功能指标水平的比较

淋巴结转移宫颈癌患者CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于无淋巴结转移患者，HPV、CD8、Treg水平均高于无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）。（表2）

表2 有无淋巴结转移宫颈癌患者HPV和免疫功能指标水平的比较（±s）

2.3 死亡患者与生存患者HPV和免疫功能指标水平的比较

死亡宫颈癌患者CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于生存患者，HPV、CD8和Treg水平均高于生存患者，差异均有统计学意义（

P

＜0.05）。（表3）

表3 死亡和生存宫颈癌患者HPV和免疫功能指标水平的比较（±s）

2.4 HPV与各免疫功能指标的相关性分析

经 Pearson 相关性分析，CD4、CD4/CD8和CD56与HPV水平均呈负相关（

r

=-0.48、-0.35、-0.40，

P

＜0.05），CD8、Treg与HPV水平均呈正相关（

r

=0.45、0.26，

P

＜0.05）。

3 讨论

宫颈癌的发生发展包括癌前病变、早期浸润癌和浸润癌三个阶段，持续感染高危型HPV会引起上皮内瘤变，若继续感染下去，可能进展为宫颈癌，但该过程时间较长，大约需要10年左右。因此在宫颈癌早期进行检测和预防，对于改善预后具有重要意义。免疫系统在肿瘤发生发展中具有重要作用，机体感染HPV后，通过免疫系统可有效清除体内HPV，该过程主要包括T细胞介导的细胞免疫和浆细胞抗体介导的体液免疫。有研究显示，高危型HPV感染患者病变早期，机体全身免疫功能并未出现明显改变，但病变局部已存在免疫抑制。可能是因为HPV感染不是全身的，不会通过血液传播，因此宫颈局部免疫状态与全身免疫状态不一致。

本次研究结果显示，宫颈癌组患者HPV、CD8和Treg水平最高，宫颈上皮内瘤变组患者次之，慢性宫颈炎组患者最低，差异均有统计学意义；宫颈癌组患者CD4、CD4/CD8、CD56水平最低，宫颈上皮内瘤变组患者次之，慢性宫颈炎组患者最高，差异均有统计学意义。表明宫颈癌患者HPV水平呈高表达，宫颈局部免疫功能明显降低，且随着病变程度增加，患者免疫功能呈降低趋势。由T淋巴细胞介导的细胞免疫在HPV拮抗中具有重要作用。其中CD4和CD8是该环节的重要细胞因子，其中CD4是辅助性T细胞标志，可提高患者免疫力，杀伤肿瘤细胞，CD8在免疫过程中起负调控作用。CD4和CD8共同调节机体免疫应答，CD4/CD8水平可反映机体免疫功能水平。CD56是自然杀伤（natural killer，NK）细胞的标志物，可抑制和杀伤肿瘤细胞。Treg可明显抑制机体免疫功能，帮助肿瘤细胞逃脱免疫系统的监视作用。因此其水平较高表明免疫抑制作用较强，肿瘤细胞易在机体聚集，造成持续感染。在淋巴结转移宫颈癌患者中CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于无淋巴结转移患者，HPV、CD8、Treg水平均高于无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义。表明发生淋巴结转移患者免疫功能较无淋巴结转移患者更低，HPV感染程度更高，这与武丽蕊等的研究结果基本一致。死亡宫颈癌患者 CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于生存患者，HPV、CD8和Treg水平均高于生存患者，差异均有统计学意义。表明随着病情进展，患者免疫功能呈不断下降趋势，进一步促进了肿瘤细胞的增殖和转移。由于宫颈局部免疫功能降低导致宫颈抗瘤和促瘤平衡被打破，对宫颈癌发展产生促进作用。经 Pearson 相关性分析，CD4、CD4/CD8和CD56水平与HPV水平呈负相关，CD8、Treg与HPV水平呈正相关。表明患者HPV水平受宫颈局部免疫功能影响，高危型HPV患者免疫功能降低是促进宫颈癌发生的重要原因。综上所述，高危型HPV感染宫颈癌患者HPV水平呈异常高表达且患者宫颈局部免疫功能明显降低，是导致患者持续感染高危型HPV和加重宫颈病变的重要原因。