新癀片外用给药对小鼠镇痛模型的有效成分研究

侯红平，关斌，陈西翌，高云航，詹志学，李晗，陈晓琳，陈腾飞，南淑华，叶祖光，张广平

新癀片是在传统方片仔癀基础上研制的中西药复方制剂，西药主要为吲哚美辛，中药包括人工牛黄、珍珠层粉、肿节风、猪胆汁膏、肖梵天花、水牛角浓缩粉、三七及红曲等，具有清热解毒、活血化瘀及消肿止痛的功效，主要用于热毒瘀血所致的咽喉肿痛、牙痛、痹通、胁痛、黄疸和无名肿痛等[1]。目前，临床上也外用于内科、喉科、骨科、妇科和男科等。药理研究显示，新癀片皮肤外涂给药具有明显的抗炎镇痛效果[2]，但镇痛效果是新癀片中的吲哚美辛起作用，还是中药组分起作用仍无定论。为此，本研究将新癀片拆分为等剂量的吲哚美辛及缺吲哚美辛的中药组分，进行小鼠镇痛模型的研究，为新癀片镇痛效果的有效成分研究提供参考和依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)动物：ICR小鼠100只。(2)药品：新癀片，淡棕灰色至棕色片剂，由厦门中药厂有限公司提供，批号180327；阳性药吲哚美辛凝胶，黄色凝胶状软膏，购于兴和株式会社，批号CDU7S；吲哚美辛，白色粉末，由厦门中药厂有限公司提供，批号180111；新癀片全方缺吲哚美辛群药，淡棕灰色粉末，由厦门中药厂有限公司提供，批号181011-12-B；醋酸，购于北京化工厂，批号20160505。(3)仪器：RCY-2热板测痛仪(上海益联医学仪器发展有限公司生产)，Sartorius BSA 3202S-CW天平(德国)，Sartorius BSA 8201-CW天平(德国)。

1.2 实验方法

1.2.1 组别设置及剂量设计：模型组只造模不给药；阳性对照组给予吲哚美辛凝胶0.15 ml/只；给药组给予新癀片(0.32 g/ml)0.2 ml/只；全方中等剂量吲哚美辛组给予新癀片中等剂量吲哚美辛(6.8 mg/ml)0.2 ml/只；全方缺吲哚美辛群药组给予新癀片中缺吲哚美辛群药(0.31 g/ml)0.2 ml/只。给药面积3 cm×2 cm。各组均将相应药物均匀涂抹在小鼠背部，按摩40圈，促进吸收，覆盖纱布，医用胶带固定。连续给药3 d。

1.2.2 扭体实验：ICR小鼠50只，雌雄各半，17～19 g，检疫1 d，适应2 d后，随机分为5组：模型组、阳性对照组、给药组、全方中等剂量吲哚美辛组、全方缺吲哚美辛群药组，每组10只。模型组只造模不给药，其余各组给药后40 min造模。造模方式：腹腔注射1%冰醋酸生理盐水溶液0.1 ml/10 g。给予醋酸后，立即观察并记录小鼠出现扭体的潜伏期和20 min内小鼠发生扭体反应的次数。20 min内未出现扭体的动物，潜伏期记为20 min。

1.2.3 舔足实验：ICR小鼠50只，雌性，18～20 g，检疫1 d，适应2 d后，分组给药前，将动物放在预热至55 ℃的热板测痛仪上，以小鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈指标，测定基础痛阈值，将反应潜伏期<5 s、>40 s和出现跳跃反应者剔除。分组给药前测定2次基础痛阈值，以2次的平均值将动物分为模型组、阳性对照组、给药组、全方中等剂量吲哚美辛组、全方缺吲哚美辛组，每组10只。模型组只造模不给药，其余各组连续给药3 d，最后一次给药后30 min、60 min、120 min、180 min和240 min测定痛阈值，>60 s者以60 s计。

2 结 果

2.1 扭体实验 与模型组相比，阳性对照组、给药组和全方中等剂量吲哚美辛组的潜伏期均延长(P<0.05)，扭体次数降低(P<0.05)。而全方缺吲哚美辛群药组潜伏期较模型组有所延长，扭体次数有所减少，但无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1 新癀片扭体实验的有效成分

2.2 舔足实验 各组之间的基础痛阈值无统计学差异(P>0.05)。给药后30 min到给药后240 min，阳性对照组和给药组的痛阈值较模型组有所延长(P<0.05)。而全方中等剂量吲哚美辛组和全方缺吲哚美辛群药组的痛阈值与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 新癀片舔足实验的有效成分

3 讨 论

新癀片中的吲哚美辛属非甾体抗炎药，现代药理研究表明，非甾体抗炎药主要是通过抑制花生四烯酸代谢过程中的环氧酶，减少前列腺素合成，从而发挥抗炎作用[3]。但据文献报道，单用吲哚美辛可能造成胃肠道、肝脏及肾脏方面的毒性反应[4-8]。

新癀片中的中药组分能明显改善和提高吲哚美辛原粉的溶出度，使吲哚美辛的吸收延缓或降低，对吲哚美辛有非常显著的减毒作用[4-6,9-10]。现代药理研究证实，新癀片中的牛黄具有镇痛、镇咳、解热及保肝的作用；珍珠层粉具有抗炎、抗疲劳的作用；肿节风具有抗炎、抗肿瘤等作用；猪胆汁膏有抗菌、抗炎、抗癌等作用;肖梵天花具有镇痛、消炎等作用；水牛角浓缩粉具有强心、抗炎及抗感染的作用；三七具有止血、抗炎等作用；红曲具有降血压、降血糖及抗疲劳等作用。多味方药相互作用，使其具有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛的功效，临床上除用于热毒瘀血所致的疼痛外，也多用于治疗痛风性关节炎[11]。

本研究中，将新癀片研磨成粉经皮肤外用给药，通过小鼠镇痛模型探讨吲哚美辛和中药组分的镇痛效果。扭体实验显示，与模型组相比，阳性对照组、给药组和全方中等剂量吲哚美辛组的潜伏期均延长，扭体次数降低。而全方缺吲哚美辛群药组潜伏期较模型组有所延长，扭体次数有所减少，但无统计学差异。舔足实验显示，给药后30 min到给药后240 min，阳性对照组和给药组的痛阈值较模型组有所延长。而全方中等剂量吲哚美辛组和全方缺吲哚美辛群药组的痛阈值较模型组，差异无统计学意义。扭体实验和舔足实验的结果有所偏差，分析认为小鼠热板法适合评价中枢镇痛药，而小鼠扭体实验适用于外周镇痛药研究，因此新癀片中中药成分对二者的作用有所不同。通过上述两个实验，认为新癀片中的吲哚美辛和中药成分具有协同作用，共同参与新癀片镇痛的调节作用，与先前的研究报道一致[12-15]。

综上所述，新癀片中的吲哚美辛和中药成分之间相互作用，相互协同，共同参与新癀片外用给药对小鼠的镇痛作用。