MDR1和ABCG2基因多态性对左乙拉西坦疗效的影响＊

刘海玲 蓝崧 方玲 杨职

癫痫是一组由大量神经元反复发作的异常放电而引起的，以中枢神经系统短暂性功能失常为特征的慢性脑部疾病。癫痫以药物治疗为主，但传统抗癫痫药物治疗范围狭窄，不良反应较多，逐渐被新型抗癫痫药物取代[1-2]。左乙拉西坦作为一种新型抗癫痫药物，凭借其特殊的抗癫痫机制在临床广泛应用，但不同个体疗效差异大，研究表明，药物的反应性及治疗效能可能与单核苷酸多态性相关。

大量研究结果显示，多药转运体基因多态性与抗癫痫药物疗效存在相关性，与药物敏感者对比明显较高[3-5]。人类有49种ABC超家族转运体蛋白，其中MDR1编码的P-糖蛋白（P-glycoprotein）与ABCG2基因编码的乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）报道与癫痫的耐药性相关。在本次研究中选取117例癫痫患者进行对比分析，探讨MDR1基因C3435T与ABCG2的rs2231137基因多态性与左乙拉西坦治疗癫痫效果的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年3月-2020年3月本院门诊或住院癫痫患者117例。纳入标准：符合1981年国际抗癫痫联盟对癫痫及癫痫综合征的诊断；均为左乙拉西坦单药治疗，治疗时间均超过1年。排除标准：伴随其他中枢神经系统疾病或占位性病变；不能配合收集资料。其中男54例，女63例，平均年龄（37.8±15.3）岁。根据左乙拉西坦单药治疗后效果不同进行分组，治疗后未达到控制组标准患者作为未控制组，入组前1年未发作或发作次数减少大于50%为控制组。未控制组62例，男28例，女34例，平均年龄（35±17.4）岁。控制组55例，男26例，女29例，平均年龄（38±12.4）岁。两组患者年龄与性别一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。所有对象对本研究均知情同意，本研究通过茂名市人民医院伦理委员会批准。

1.2 方法

（1）标本采集：所有入选研究对象空腹采集外周静脉血标本2 ml并放置EDTA抗凝试管，所有血标本均放置在-80 ℃环境存放。（2）MRD1基因分型：选择临床试验中较为常用的C3435T的单核苷酸多态性进行分析，应用DNA二代测序直接测序，同时应用PCR-RFLR方法检测与分析。（3）ABCG2基因分型：选择临床试验中较为常用的rs2231137的单核苷酸多态性位点进行检测，应用DNA二代测序直接测序，同时应用PCR-RFLR方法检测与分析。

1.3 观察指标

分析患者基因多态性位点遗传平衡检验结果，计算两组C3435T和ABCG2基因分型频率及等位基因频率有无差异。分析左乙拉西坦疗效的影响因素。

1.4 统计学处理

本次研究当中的所有数据均采用SPSS 22.0统计学软件进行处理，计量资料以（±s）表示，采用独立样本t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，危险因素采用Logistic回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡定律吻合度检验

共检出 MRD1 CC、TT、CT基因型各 49、13、55例，ABCG2 GG、AA、GA基因型各34、18、65例。两个基因的基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡（χ2=0.23、1.21，P＞0.05），提示患者群体代表性良好。

2.2 两组MDR1基因C3435T基因型

两组MDR1基因C3435T基因型分布频率及等位基因C与T频率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表 1、表 2。

表1 两组MDR1基因C3435T基因型分布频率及等位基因C与T的频率比较

表2 MDR1基因C3435T基因型频率对左乙拉西坦疗效的影响

2.3 两组ABCG2基因rs2231137基因型

ABCG2基因多态性中不同基因型分布频率分布情况对治疗效果具有影响，其中基因多态性位点rs2231137集中分布于GG整体治疗效果更佳，两组G与A等位基因频率差异有统计学意义（P＜0.01），未控制组有较高的A表达，见表3。基因型AA对左乙拉西坦疗效的OR值为7.63（P＜0.01），基因型GA对左乙拉西坦疗效的OR值为2.96（P＜0.05），GG基因型与AA/GA相比，基因型AA/GA是左乙拉西坦疗效的危险因素，见表4。

表3 两组ABCG2基因rs2231137基因型分布频率及等位基因G与A的频率比较

表4 ABCG2基因rs2231137基因型频率对左乙拉西坦疗效的影响

3 讨论

癫痫是以中枢神经系统短暂性功能失常为特征的慢性脑部疾病，患病率高达5%，给社会及家庭带来的沉重的负担。随着基因测序技术的发展，通过基因多态性水平分析药物学机制逐渐成为热点，为实现临床药物个体化治疗带来新的希望。左乙拉西坦作为新型的抗癫痫药物，近年来广泛应用于临床，但是疗效个体差异大。不同癫痫患者对于左乙拉西坦的单药治疗的效果是否与药物代谢的基因多态性相关，至今没有明确的定论。

大量研究表明，癫痫药物的耐药机制与MDR1基因编码的P-糖蛋白相关[6]。MDR1的单核苷酸多态性定位在26号外显子的（C至T）3435位点，其5末端启动子的甲基化可以导致P糖蛋白过度表达。若P糖蛋白过度表现在血脑屏障上，可能限制抗癫痫药物渗透入大脑，从而导致耐药的发生。有研究表明，MDR1 C3435T与丙戊酸钠，卡马西平的耐药相关[7]。不同的C3435T变异中，CC基因型与小肠中P糖蛋白的高表达有关，有数据认为CC基因型可以导致血脑屏障的P糖蛋白功能增强，从而导致颅内药物浓度下降[8]。有研究报道，ABCB1的G2677T/A及C3435T基因多态性与左乙拉西坦疗效相关[9]。然而在本研究中，两组MDR1 C3435T基因型及等位基因C与T分布频率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。提示左乙拉西坦即使作为新的抗癫痫药物，与传统的抗癫痫药物在药物转运机制上可能存在差异，可能参与转运的蛋白不相同。因此左乙拉西坦给传统的抗癫痫药物的耐药性治疗提供了新的手段。

ABCG2基因编码乳腺癌耐药蛋白，作为一种外源性转运体，转运大型的、疏水的、带正电荷或负电荷的分子、多种抗癌药物、荧光染料和在正常食物中发现的不同毒性化合物。ABCG2中的SNPs可能会影响这些底物的吸收和分布，改变化合物或药物在大范围内的积累、有效性和毒性。具有抑制消化道吸收某些外源性物质以及参与形成血-脑、胎-血屏障等生理功能，是多药耐药的重要机制之一[10]。有研究表明，ABCG2的rs2231137基因多态性与拉莫三嗪的浓度及药物耐药相关[11-12]。本研究中，ABCG2的 rs2231137的 AA型（OR=7.63） 及GA型（OR=2.96）携带者是左乙拉西坦疗效的危险因素，未控制组携带A基因频率更高（P＜0.05），提示AA型及GA型等携带A基因频率的患者，左乙拉西坦疗效欠佳，为癫痫患者个体化给药提供了有价值的信息。但如其他药物基因组学的研究一样，由于不同研究者入选患者和样本量的不同，患者的地域，病情不同，导致研究结果不大相同，后续将进行更大的样本量验证研究结果。

综上所述，未提示MDR1 C3435T单个位点单核苷酸多态性与左乙拉西坦癫痫疗效之间存在一定关联；ABCG2的rs2231137的AA及GA型携带者是左乙拉西坦疗效的危险因素，为临床抗癫痫药物的选择提供了新的选择方向。