肉牛饲用复合益生菌组合的筛选及添加试验

左秀峰，左秀丽，杨东英，左可吉

（1.山东省莒南县畜牧发展促进中心，山东莒南 276600；2.德州学院，山东德州 253023；3.山东省莒南县文疃镇左家沟村，山东莒南 276600）

本课题组筛选乳酸粪肠球菌、酵母菌和芽孢杆菌配制了四种肉牛饲用复合益生菌组合，另设不添加复合益生菌基础日粮组作对照，优选出最佳肉牛饲用复合益生菌组合，再进行犊牛育肥添加试验，确定饲用复合益生菌在精补料中的最佳添加比例。

1 肉牛饲用复合益生菌组成

根据农业农村部规定，选择可用于生产微生态制剂的微生物，即乳酸杆菌、乳酸链球菌、粪肠球菌、芽孢杆菌、双歧杆菌和酵母菌等六种微生物，在前期研究的基础上，与德州学院、江西农业大学和国家肉牛体系临沂实验站联合筛选出酵母菌、乳酸粪肠球菌、芽孢杆菌三种益生菌，经不同比例组合按一定工艺研制了四种饲用复合益生菌组合（表1），代号分别为I、II、III、IV。

2 体外培养试验

2.1 试验设计 采用体外培养方法，研究不同饲用复合益生菌组合对利杂黄牛瘤胃体外发酵的影响。体外培养试验设5个组，不添加益生菌的基础日粮为对照组，4个试验组分别添加I、II、III、IV号饲用复合益生菌，添加量均为200 mg/kg。

表1 饲用复合益生菌组合

2.2 试验动物及日粮组成 选择2头体重为（275±15）kg的安装有永久性瘤胃瘘管的健康利杂黄牛，用于瘤胃液采集。试验期间每天饲喂2次（8点和18点），自由饮水。基础日粮为玉米-豆粕-青贮玉米秸日粮，按肉牛1.3倍维持需要配制，精粗比为60∶40，基础日粮组成和营养水平见表2。

2.3 体外培养试验

2.3.1 产气量测定 每隔半小时记录注射器的气体量（mL），记录完后排气，累计培养24 h，计算总产气量。

表2 基础日粮组成及营养水平

2.3.2 瘤胃液pH值测定 培养24 h后立即用PHS-320酸度计直接测定。

2.3.3 瘤胃液NH3-N浓度测定 参照冯宗慈等［1］的比色法进行。

2.3.4 瘤胃液菌体蛋白（MCP）的测定 取经预处理去除原虫和饲料大颗粒的上清液10 mL，高速离心20 min，弃去上清液，沉淀的细菌部分加入9 mL 10%三氯乙酸溶液，混匀，再以4 000 r/min离心10 min，取沉淀物加入5%氢氧化钠溶解，然后稀释至25 mL。此稀释液又经4 000 r/min离心10 min，取上清液在紫外分光光度计上用280 nm和260 nm波进行比色，应用如下公式求出细菌蛋白质含量：

细菌蛋白含量（mg/mL）＝（1.45×D280-0.74×D260）×稀释倍数

2.3.5 瘤胃液挥发性脂肪酸（VFA）浓度测定 参照戈婷婷等［2］的气相色谱法进行。

2.4 数据分析 采用Excel 2003和 SPSS 16.0软件对所得数据进行方差分析和显著性检验。

2.5 体外试验结果

2.5.1 不同饲用复合益生菌组合体外培养24 h的产气量、pH值、MCP含量、NH3-N浓度和干物质降解率 由表3可见，添加I、II、III、IV号饲用复合益生菌组合的试验组和对照组，其培养液的pH值均在正常范围内。添加I、II、III号饲用复合益生菌组合的24 h总产气量比对照组有显著提高（P＜0.05），各处理组间差异不显著（P＜0.05），但II号饲用复合益生菌组合的产气量最高，为170.50 mL。I、II号饲用复合益生菌组合产生的微生物蛋白含量极显著高于其他组（P＜0.01），其中II号饲用复合益生菌组合的微生物蛋白含量最高，达270.43 mg/100 mL，显著高于I、III号（P＜0.05）。I、II、III号饲用复合益生菌组合产生的氨态氮浓度极显著低于对照组和IV号组合（P＜0.01），IV号组合显著低于对照组（P＜0.05）。II、III号饲用复合益生菌组合的干物质降解率极显著高于对照组（P＜0.01）。

2.5.2 瘤胃液挥发性脂肪酸浓度 对照组和I、II、III、IV号组合的总VFA浓度分别为139.69±0.17、144.51±0.98、145.96±0.63、145.89±0.10、140.67±0.12 mmol/L，II号组显著高于对照组。

综上得出：添加饲用复合益生菌能够稳定瘤胃内环境，促进瘤胃发酵功能改善。从生化指标分析，以II号饲用复合益生菌组合（50%酵母菌+25%乳酸粪肠球菌+25%芽孢杆菌）的效果最佳，其最佳添加量和体内应用效果报告如下。

3 II号肉牛饲用复合益生菌添加试验

3.1 试验设计 在山东省沂水县某牛场选择出生日期接近、体重相近的健康犊牛（3月龄以上）24头，采用单因子随机设计，均分为4组，每组6头牛，试验期30 d，饲养环境一致。

表3 不同饲用复合益生菌组合对体外培养液中产气量、pH值、MCP含量、NH3-N浓度和干物质降解率的影响

3.2 日粮及饲养管理 所有犊牛在试验期内每日人工哺喂牛奶1 kg，饲喂相同的基础日粮，优质苜蓿干草3 kg，精料2 kg。3个试验组分别按精料量的0.05%、0.1%、0.2%添加II号肉牛饲用复合益生菌，于35～45 ℃拌料发酵3 d后饲喂，对照组不添加，每日饲喂2次，自由饮水。精料主要营养成分见表4。

表4 精料主要营养成分

3.3 生产性能指标测定 犊牛在试验开始和结束日早晨空腹称重，测定体尺指标；每天饲喂犊牛时观察其粪便状况，记录腹泻情况。

腹泻频率＝（腹泻头数×腹泻天数）/（试验头数×试验期天数）×100

粪便指数＝粪便评分之和/总头数［3］

试验期内每日对每头犊牛的粪便打分，当犊牛粪便评分＞2时记为一个腹泻日；粪便评分为4时，按照牛场常规治疗方案治疗，每头犊牛腹泻一天记为腹泻一次。评分准则如下：

1分：正常，条形或粒状；2分：轻度，软粪，能成形；3分：中度，稠状，不成形，粪水无分离；4分：严重，液状，不成形，粪水有分离。

3.4 结果及分析 由表5可知，试验开始时各组犊牛的体尺和体重指标差异不显著（P＞0.05），饲喂复合益生菌精料后，0.1%组和0.2%组的体高极显著高于对照组（P＜0.01），显著高于0.05%组（P＜0.05），0.05%组与对照组差异不显著（P＞0.05）；0.1%组和0.2%组的胸围显著高于对照组（P＜0.05）；试验结束时0.1%组和0.2%组的体重同样显著高于对照组（P＜0.05），其他各组之间差异不显著（P＞0.05）；试验期间，0.1%组的日增重最高，显著高于对照组（P＜0.05），其次是0.2%组和0.05%组。分析可得，添加0.1%的II号肉牛饲用复合益生菌（50%酵母菌+25%乳酸粪肠球菌+25%芽孢杆菌）可显著提高犊牛的瘤胃消化率和全消化道消化率，粪便细腻松软、无臭味［4］，且对犊牛生长发育有显著提高，在日增重上高于其他各组。

表5 各组犊牛生长性能测定结果

由表6和表7可知，饲喂不同比例II号肉牛饲用复合益生菌的试验组和对照组均有腹泻，但腹泻程度有一定的差别，其中对照组的腹泻频率和粪便评分最高，0.1%组最低，整体来看，各组发生腹泻的概率都不高。由此可见，添加不同比例肉牛饲用复合益生菌对犊牛腹泻具有很好的抑制作用。

表6 各组犊牛腹泻发生情况统计

表7 各组犊牛腹泻评分

4 结论

4.1 本次创新模拟瘤胃菌群环境，优选出肉牛饲用复合益生菌的最佳组合为50%酵母菌+25%乳酸粪肠球菌+25%芽孢杆菌，该组合的饲料干物质降解率、MCP含量、产气量和总VFA浓度显著提高，NH3-N浓度明显降低，瘤胃液pH值保持稳定。

4.2 按精料量的0.1%比例添加肉牛饲用复合益生菌饲喂犊牛，能增强瘤胃消化粗纤维、木质素、粗蛋白的能力，缓解酸中毒，很好地抑制犊牛腹泻，粪便细腻松软、臭味轻，且能显著提高犊牛体尺、胸围、体高、日增重等生长性能指标。

4.3 添加肉牛饲用复合益生菌，提高了非常规粗饲料的利用率，干物质排放量减少3.5%，经济效益提高10%以上。■