BD AffirmTM VPⅢ DNA探针法在阴道炎病原体检测中的应用

李 韬，伏阳燕，陈俐巧

四川绵阳四○四医院病理科，四川绵阳 621000

阴道炎是临床妇科常见疾病[1]。阴道炎主要分为细菌性阴道炎、真菌性阴道炎、滴虫性阴道炎3类，其中细菌性阴道炎占15%～50%，其主要病原体为加德纳菌，如果没有及时诊治就会出现较多的并发症，包括不良妊娠、子宫内膜炎、子宫切除术后阴道残端蜂窝组织炎等[2]。真菌性阴道炎也是较为常见的阴道感染疾病，据统计有3/4成年女性一生中会感染一次念珠菌[3]。滴虫性阴道炎属于性传播疾病，但是其检出率不高[4]。目前，鉴别这三类阴道炎的方法较多，本研究选取357例阴道炎患者为研究对象，同时采用BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法，细菌、真菌、滴虫培养法检测，比较4种方法的检测结果。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取四川绵阳四○四医院2019年1—9月收治的357例阴道炎患者为研究对象，患者均有不同程度的外阴瘙痒、白带增多及异味等症状。

1.2检测方法

1.2.1BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法 使用无菌采样拭子从阴道后穹隆处采集标本，立即将采样拭子放入标本采集试管中，在试管中加入400 μL的裂解液，并振荡2～4 s，在85 ℃下孵育10 min，再加入600 μL的缓冲液，并振荡2～4 s。将试管帽更换为过滤吸头，并将标本全部过滤挤入试剂板的第1孔中，在试剂板的第7孔中加入100 μL的底物溶液。最后将探针分析卡片放入试剂板的第1孔后上机，待结束后取下探针分析卡，并判读结果。

1.2.2细菌培养法 使用无菌棉签置于阴道后穹窿处，蘸取分泌物后均匀地涂在培养基上，于CO2培养箱中培养48 h，当培养基出现明显的菌落后采用微生物鉴定仪鉴别细菌种类。

1.2.3真菌培养法 使用无菌棉签置于阴道后穹窿处，蘸取分泌物后均匀地涂在培养基上培养48 h，当有明显菌落生长后观察菌种。

1.2.4滴虫培养 使用无菌棉签置于阴道后穹窿处，蘸取分泌物后均匀地涂在培养基上培养48 h后，涂片观察有无滴虫活动[5-6]。

1.3结果判读 真菌、细菌、滴虫培养法按照金标准进行判读。BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法检测中观察分析卡的结果，其中阳性对照球为蓝色，阴性对照球为无色，微生物检测球中呈蓝色视为阳性，呈无色视为阴性。

1.4统计学处理 分别以细菌、真菌、滴虫培养法为金标准，计算BD AffirmTMVPⅢDNA探针法检测细菌、真菌、滴虫的灵敏度、特异度、阴性预测值和阳性预测值。灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)；特异度=真阴性例数/(假阳性例数+真阴性例数)；阴性预测值=真阴性例数/(假阴性例数+真阴性例数)；阳性预测值=真阳性例数/(真阳性例数+假阳性例数)。

2 结 果

2.1BD AffirmTMVPⅢDNA探针法检出情况 BD AffirmTMVPⅢDNA探针法共检测出加德纳菌阳性195例(54.6%)、念珠菌阳性109例(30.5%)、滴虫阳性28例(7.8%)，阴性25例(7.0%)。

2.2BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法与细菌、真菌、滴虫培养法检测结果比较 与细菌、真菌、滴虫培养法检测结果比较，BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均在80%以上。见表1～4。

表1 BD AffirmTM VPⅢ DNA探针法与细菌培养法检测结果比较(n)

表2 BD AffirmTM VPⅢDNA探针法与真菌培养法检测结果比较(n)

表3 BD AffirmTM VPⅢDNA探针法与滴虫培养法检测结果比较(n)

表4 BD AffirmTM VPⅢDNA探针法与3种金标准法的检测性能比较(%)

3 讨 论

阴道炎可引起输卵管炎、盆腔炎和泌尿系统感染，可导致不孕、流产、胎膜早破、早产、新生儿死亡等不良妊娠结局[7]。目前，培养法是诊断阴道炎的金标准方法，但是存在耗时长、操作复杂、主观性强等缺点，限制了其应用。

细菌性阴道炎的主要临床症状为阴道灼热感、瘙痒，白带多、鱼腥臭味。引起这种症状的细菌主要为加德纳菌，对于细菌性阴道炎临床主要采用细菌培养法来检测，本研究采用的BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法与细菌培养法检测357例患者的结果进行比较，灵敏度达到了95.08%，特异度达到了87.93%，且得到了较高的阴性预测值和阳性预测值，并且操作简单，1 h内能得出检测结果，值得临床推广使用。

对于真菌性阴道炎中的念珠菌检测，与真菌培养法比较，BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法的灵敏度与特异度都比较理想，并且阳性预测值为93.58%，阴性预测值为91.13%。据统计有10%～20%的健康女性阴道中都存在念珠菌，如果没有症状可以不用治疗(无症状女性念珠菌水平为<103CFU/mL)，有症状女性(念珠菌水平≥104CFU/mL)[8]标本采用真菌培养法培养可能存在假阳性的结果，而BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法检测对于念珠菌≥104CFU/mL的标本才判断为阳性，大大地降低了假阳性结果的发生率。

滴虫性阴道炎是由阴道毛滴虫引起的女性生殖道炎性反应，是较为常见的性传播疾病之一[9]，BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法与滴虫培养法比较，灵敏度与特异度都超过了90%，且阴性预测值、阳性预测值都很高。由于滴虫培养的时间较长，并且还需要涂片进行观察，所以临床基本没有使用此方法，而BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法能够快速给出结果，操作简单，值得在临床上广泛应用。

BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法是以核酸杂交原理为基础，对每种微生物使用与其独特基因序列互补的两个不同的单链核酸探针，即捕获探针和显色探针。将捕获探针固定在嵌入探针分析卡中的微球上，对于每种目标微生物，探针分析卡中分别包含一种单独的微球，显色探针包含在多孔试剂板中。杂交完成后通过显色试剂显色确定是否存在微生物感染。BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法减少了人为操作引起的主观因素，操作简单，从接收标本到报告检测结果一般可控制在1 h以内，对于标本的保存也没有苛刻的要求，且具有较高的检出率，也降低了假阳性结果发生率，这就减少了漏诊、误诊的发生，同时减少了医患纠纷。

综上所述，BD AffirmTMVPⅢ DNA探针法对阴道炎患者病原体的检出率较高，并且操作简单，耗时少，值得临床推广使用。