烟台地区HIV反应性献血者追踪检测与归队结果分析

宋和蔚，孙宗祥，徐明华，栾希英

(1滨州医学院，山东 烟台 264003；2烟台市中心血站)

目前，国内普遍采用ELISA和核酸扩增检测技术(NAT)进行血液初筛，由于不同厂家的ELISA试剂包被抗原抗体片段不同，导致检测结果差异[1]，同时也提高了假阳性率[2]，致其被归为不适宜献血者，造成血液浪费及献血者队伍的流失。根据国内外相关规定，本站制定了《血清学及NAT反应性献血者追踪、屏蔽与归队操作规程》，采用ELISA 和单人份核酸检测(ID-NAT)，电化学发光免疫分析法(ECLIA)和WB作为补充，对HIV假反应性者进行追踪检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1标本来源 2015年12月21日至2020年7月25日烟台地区213 712份无偿献血者血液标本，对49名献血者实施追踪检测。

1.2试剂与仪器 ELISA：4代HIV抗原和抗体试剂盒(试剂1)，3代HIV抗体试剂盒(试剂2)，STAR加样仪、FAME24/20酶免分析仪(瑞士Hamilton)；NAT：Cobas s201核酸检测系统及配套试剂(美国罗氏)，Chitas BSS1200核酸筛查系统及配套试剂(上海浩源)；ECLIA：Cobas E411分析仪及配套HIV抗原和抗体试剂盒(美国罗氏)。

1.3标本采集与处理 血液初筛标本：以旁袋留样方式留取2份标本，分置2支5 mL试管内(含EDTA-K2)，1支用于酶免检测，1支(带分离胶)用于NAT检测。追踪检测标本：以静脉采血法留取NAT检测和酶免检测标本各1支(同上)，并填写《反应性献血者跟踪检测采样及结果告知记录》。所有标本冷链运输，2℃～8℃冰箱保存，72 h内完成检测。

1.4血液初筛模式和判定规则 ①ELISA：2种ELISA试剂同时检测，S/CO<0.50为合格，0.50≤S/CO<1.00为灰区，S/CO≥1.00为单试剂反应性；若标本S/CO≥0.50，需对原标本及其血袋小辫血进行双试剂双孔复检，复检任一孔S/CO≥0.50判为不合格。②NAT：ELISA双试剂反应性标本不进行NAT检测。Cobas s201、Chitas BSS1200分别为6、8个标本混样的HBV/HCV/HIV 联合核酸检测(MP-NAT)，结果无反应性则标本全部合格，结果为反应性需拆分单检，拆分检测结果无反应性判定为合格，拆分单检反应性判定为不合格。③ECLIA：任一ELISA试剂S/CO≥0.3的标本或HIV RNA反应性标本需进行ECLIA补充实验。HIV Ag-Ab1/2反应性或HIV RNA反应性标本送CDC以WB试验确证。

1.5追踪检测及献血者归队

1.5.1追踪检测条件 血清学反应性者需同时满足以下4个条件：①HIV Ag-Ab1/2单试剂反应性或灰区；②NAT无反应性；③WB试验确证阴性；④距上次献血时间超过3个月。ID-NAT反应性者需同时满足2个条件：①HIV Ag-Ab1/2无反应性；②HIV RNA反应性。追踪检测间隔期以7 d为周期递增。对符合追踪检测条件且愿意者告知追踪检测流程，可追踪检测。

1.5.2追踪检测项目 ①2种ELISA试剂和1种ECLIA试剂检测HIV Ag-Ab1/2；②ID-NAT；③HIV Ag-Ab1/2反应性和HIV RNA反应性标本以WB方法确证。其中任一试剂出现反应性，则长期屏蔽。

1.5.3归队条件 需同时满足以下3个条件：①2种ELISA试剂和1种ECLIA试剂检测HIV Ag-Ab1/2均无反应性；②ID-NAT无反应性；③法规规定的其他筛查项目均无反应性。追踪检测1次，对符合条件的献血者经审批可在获批90 d后献血。NAT追踪检测献血者不解除屏蔽。

1.6数据处理 应用SPSS26.0软件统计分析，组间率的比较采用χ2检验。以受试者工作特征曲线(ROC)分析试剂诊断价值。

2 结果

2.1HIV初筛和确证结果 213 712份血液标本的初筛及确诊结果见表1。

2.2三种试剂诊断能力评价 试剂1、试剂2、ECLIA试剂的ROC的曲线下面积(AUC)，95%置信区间下取3种试剂的最大约登指数其对应的最佳临界值及特异度见表2。

2.3追踪检测结果 49名追踪检测者初筛结果：ELISA单试剂反应性48名，HIV RNA反应性1名。追踪检测过程中，1名初筛仅HIV RNA反应性献血者在追踪第28天ELISA双试剂阳性，WB确证阳性；ELISA单试剂反应性12名，灰区6名，WB确认均阴性；ELISA、NAT、ECLIA均无反应性30名，允许归队(62.5%)，其中16名再次参加献血，15名检测结果合格，1名ELISA结果处于灰区，NAT、ECLIA无反应性，WB确证阴性。

表1 HIV初筛和确证实验结果

表2 三种试剂诊断能力的评价

2.4献血次数与归队结果比较 归队的30名中，不同献血次数的追踪检测合格率比较无统计学意义(χ2=0.014，P=0.907)、归队后的献血率比较有统计学意义(P=0.046)。见表3。

表3 献血次数与追踪检测结果情况[n(%)]

3 讨论

ELISA产生假反应性的原因有标本溶血、自身免疫性疾病、病毒或细菌感染等。有研究表明，4代试剂包被成分增加了鼠抗体的HIV P24抗体，导致其假反应性高于3代试剂，但4代试剂可以缩短窗口期[3]。机体感染HIV后，外周血中依次能检测到病毒核酸、HIV P24抗原、抗-HIV。NAT在捕捉HIV ELISA 窗口期献血者方面起到重要作用[4]。长期不进展者(LTNPs)与HIV精英控制者(ECs)在未经抗病毒治疗前病毒水平常较低[5]，NAT易出现漏检。我国有研究报道，献血者中存在初筛ELISA抗-HIV反应性、NAT非反应性且WB确证试验阳性的标本，推测为ECs或LTNPs[6]。由此，NAT检测与ELISA检测不能互为替代。本研究显示，3种检测试剂AUC均>0.5，但ECLIA检测能力最优，其分析时间短、结果准确、操作方便，将其作为补充实验，可以共同发挥检测优势，降低献血者归队的风险。

目前，我国大多数血站自行设置灰区，灰区的设置价值有限，并不能提高HIV真阳性的例数。本研究中49名献血者追踪检测结果中6名因灰区被继续屏蔽，但ID-NAT、ECLIA无反应性，WB确证试验阴性，考虑对该6名献血者进行二次追踪检测并对灰区设置的合理性进行研究；归队后重复献血者的献血率高于首次献血者，说明重复献血者归队后献血意愿较强，追踪检测对挽回固定献血者的流失具有重要意义。

总之，通过分析血液初筛及追踪检测实验数据，分析不同检测方法的差异，将误屏蔽的献血者有效归队，既是充分利用资源的现实需要，也有利于保护献血者的积极性。