福州地区0～3岁健康儿童外周血红细胞膜六项脂肪酸指标参考区间调查

吴汝香，黄林娟，林 珊，张忠龙，林祥泉

(福建医科大学附属福州儿童医院，福州 350005)

细胞膜中脂肪酸包括多不饱和脂肪酸（poly unsaturated fatty acids,PUFA）、单不饱和脂肪酸（monounsaturated fatty acids,MUFA）和饱和脂肪酸（saturated fatty acids,SFA），其代谢的改变影响细胞结构、功能及信号通路，与心血管疾病、肿瘤和糖尿病等慢性疾病的发生发展密切相关[1-2]。临床医生对疾病预测、诊疗、预后监测依赖实验室检测数据，而判断数据基本尺度就是用参考区间来衡量。目前国内针对儿童红细胞膜中脂肪酸与疾病关系的研究及建立正常参考区间尚为空白，本研究调查了福州地区0～3岁健康儿童外周血红细胞中脂肪酸六指标的参考区间，旨在对疾病诊疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2019年3月～2020年2月本地区来我院儿童保健科健康体检的0～3岁儿童60例，其中男、女各30例。根据《临床实验室如何确定和建立生物参考区间；批准指南-第3版》（EP28-A3c指南）[3]的要求，男女按照0～1岁、1～2岁、2～3岁年龄段分为3组。所有对象均对其进行生活方式调查。

纳入标准：①福州市区或行政辖区内的常住人员（连续长住5年以上）；②身体质量指数（BMI）正常（参照标准）[4]。

排除标准：①排除感冒、发烧、正在服用药物儿童；②排除患有糖尿病、高血压、肝炎、慢性心肺功能不全、急慢性肾病、冠心病、哮喘及癫痫等各种急性、慢性内外科疾病儿童；③排除各种肿瘤儿童；④抑郁、智能障碍等各种精神疾病儿童；⑤排除近期服用深海鱼油等保健品儿童。

1.2 仪器与试剂 QP2010 UItra 气相色谱-质谱仪(日本岛津公司)；正己烷（色谱纯，德国Merck 公司）；BHT(2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚)，3mol/L盐酸/甲醇，20种脂肪酸甲酯标准品，乙醇（色谱纯），内标十七烷酸（均为美国Sigma 公司）；安捷伦DB-23 色谱柱。

1.3 方法 严格按照《全国临床检验操作规程》要求采用肝素钠或EDTA-K2管抽取1ml 静脉血液样本[5]，1 730×g 离心5 min，收集下层红细胞，用1:1(v:v)生理盐水洗涤，重复操作一次，生理盐水1:1(v:v)稀释红细胞混匀（简称样本）。在BHT(2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚)乙醇溶液处理的反应管中加入样本和十七烷酸正己烷内标溶液各50 µl，再加入1ml 3mol/L 的盐酸/甲醇溶液，置90℃烘箱3h。用2 ml 正己烷萃取脂肪酸甲酯产物，加入400µl 溶解萃取物后转移至分析专用小瓶，密封-20℃保存或直接上样分析[6]。

1.4 统计学分析 采用SPSS 25.0 统计软件进行数据分析，总体数据进行Kolmomgorov-Smirnov(K-S)正态检验。正态分布计量资料以±s 表示，95%参考区间以x±1.96s描述，组间比较采用独立样本t检验；非正态分布资料以中位数（M）四分位数（P25,P75）表示，95%参考区间以[P2.5～P97.5]描述，两组间比较采用Mann-Whitney 检验,多组独立样本比较采用Kruskal-Wallis 检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 总体结果分析 见表1。60例儿童外周血红细胞膜中脂肪酸六指标结果比较,K-S 检验均为正态分布(均P＞0.05)。

表1 六项脂肪酸指标总体结果比较（±s，%）

表1 六项脂肪酸指标总体结果比较（±s，%）

项目 结果 P值omega-6 29.76±0.29 0.200 omega-3 11.46±0.28 0.200 MUFA 16.36±0.15 0.200 SFA 42.65±0.24 0.200 omega-6/omega-3 2.73±0.09 0.200 omega-3 指数 8.58±0.24 0.200

2.2 性别分组分析 见表2。男性组与女性组外周血红细胞膜中脂肪酸六项目结果比较，采用独立样本t检验。显示差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

表2 六项脂肪酸指标性别分组结果比较（±s，%）

表2 六项脂肪酸指标性别分组结果比较（±s，%）

项目 男性 女性 t值 P值omega-6 30.00±2.33 29.53±2.09 0.811 0.421 omega-3 11.07±2.26 11.84±2.12 -1.371 0.176 MUFA 16.50±1.32 16.21±1.05 0.948 0.347 SFA 42.45±1.63 42.84±2.12 -0.815 0.419 omega-6/omega-3 2.85±0.72 2.62±0.67 1.287 0.203 omega-3 指数 8.27±1.94 8.90±1.75 -1.319 0.192

2.3 年龄分组分析 见表3。分为0～1岁、1～2岁、2～3岁共3组，单因素方差分析。omega-3，omega-6/omega-3,omega-3 指数三项目显示差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

2.4 不同年龄段需要分组项目比较 omega-3，omega-6/omega-3，omega-3 指数三项目单因素方差分析差异有统计学意义，按年龄段分三组，使用SNK 事后检验两两比较，结果显示三个年龄组间两两比较，差异无统计学意义（均P＞0.05），且最多2个同类子集，故无需按年龄分组。

2.5 儿童外周血红细胞膜中六项脂肪酸指数参考区间 见表4。调查性别、年龄均无差异项目合并，计算参考区间，以x±1.96s表示。

表3 六项脂肪酸指标年龄段分组结果比较（±s，%）

表3 六项脂肪酸指标年龄段分组结果比较（±s，%）

项目年龄F值 P值0～1岁 1～2岁 2～3岁omega-6 30.97±2.88 29.24±2.22 29.92±1.86 2.058 0.137 omega-3 10.07±1.55 12.29±2.24 11.05±2.07 4.336 0.018 MUFA 16.93±1.94 16.37±1.17 16.16±0.90 1.281 0.286 SFA 42.65±2.48 42.41±2.17 42.89±1.36 0.411 0.665 omega-6/omega-3 3.18±0.73 2.48±0.62 2.84±0.69 4.007 0.024 omega-3 指数 7.85±1.29 9.38±1.89 8.01±1.73 4.759 0.012

表4 0～3岁健康儿童外周血红细胞膜中六项脂肪酸指数参考区间

3 讨论

具有独特生物活性物质的PUFA 主要包括omega-6和omega-3 两大系列。omega-6 包括亚油酸（LA），γ-亚麻酸，二十碳二烯酸，二十碳三烯酸，花生四烯酸(AA)和二十二碳四烯酸,主要存在于玉米油、葵花子油和红花油中；omega-3 包括α-亚麻酸（ALA），二十碳五烯酸(EPA)，二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸(DHA),其中ALA 主要来源于核桃、亚麻子和菜籽等植物油，而EPA 和DHA 主要来源于深海鱼油[7]。这两类PUFA 都是合成类二十碳烷酸化合物的前体，具有稳固细胞膜功能、调控基因表达、维持细胞因子和脂蛋白平衡、抗心血管疾病、抗炎和抗癌等生理功能，一直是营养生化学科的研究热点[8]。

omega-6和omega-3PUFA 在生物体内的代谢存在竞争性抑制关系。omega-6 中2 系前列腺素和4系白三烯等代谢产物具有强炎性作用，而omega-3的3 系前列腺素和5 系白三烯等代谢产物具有低炎性作用[8-10]。omega-6 促进儿童生长发育,缺乏LA出现发育迟钝和湿疹皮炎等。omega-3 对脑和视网膜、皮肤和肾功能的健全十分重要，然而长期过量食用DHA 会引起精神过度兴奋难入睡，EPA 过量反而不利于婴幼儿生长发育[8]。由于哺乳动物缺乏由omega-6 转化为omega-3 的酶，且ALA 转化为EPA 和DHA 的效率非常低，需要从饮食等其他途径补充EPA 和DHA。WHO 建议每天摄入EPA 和DHA 总量 0.3～0.5g[11]。

近100～150年以来，人类膳食结构发生巨大的变化。人类的食物中omega-3 明显减少，同时含有过量的omega-6。omega-6/omega-3值由过去的1～2:1 迅速提高，研究显示，合理的膳食中omega-6/omega-3值 应 该 为4～5:1[11]。高omega-6/omega-3值膳食引发一系列的慢性疾病，如心血管疾病、肥胖、糖尿病、癌症、炎症及自身免疫性疾病等[11-14]。检测血液透析病人血液中的脂质谱发现omega-6/omega-3值比正常人明显升高，且高omega-6/omega-3值与劲动脉粥样硬化有关[15-16]。高omega-6/omega-3值与小孩智力低下相关[17]，还与肿瘤的发生发展有密切关系[18]。因此平衡膳食对于保持身体健康和预防多种慢性疾病具有极为重要的意义。

检测EPA和DHA 在其脂类物质中的百分比和，反映出omega-3在机体内的含量，称为omega-3指数。流行病学调查研究表明，血液中存在高水平的EPA和DHA 可以降低患心血管疾病的风险，omega-3 指数已经作为反映心血管疾病风险的新指标[13]。

综上所述，脂肪酸中PUFA，MUFA，SFA 三者在体内平衡，各项目作为疾病的生物学指标具有重要价值，其含量受到地域及饮食文化的影响尤其突出，因此建立地区数据参考区间显得非常必要。脂肪酸含量在血清或血浆中检测易受饮食的影响，所以在红细胞膜中检测，稳定并能反映出一定时期机体内的变化。目前关于我国儿童群体红细胞中脂肪酸项目的研究报道甚少。本研究采用气相色谱-质谱法分析福州地区0～3岁健康儿童外周血红细胞膜中的脂质谱，为评估儿童健康状况以及补充omega-3 PUFA 提供科学依据，为进一步建立中国健康人群脂肪酸的参考区间打下基础。

由于低龄儿童样本采集局限，样本量过少，结论还需大样本量数据支持。本研究作为预实验，后续将以本研究结果为实验基础，进一步阐述脂肪酸代谢与疾病的关系，以此能为临床诊疗提供更好的途径。