PCR检验在肺结核早期诊断中的应用价值

杨宝强

扶风县中医医院检验科,陕西 宝鸡 722200

肺结核是因结核分枝杆菌引起的肺部感染性疾病，以发热、咳痰、咯血、胸痛等表现为主，具有高度的传染性[1]。肺结核是目前全球性关注的公共卫生问题，有数据统计，全球每年因肺结核死亡例数将近300万，远超过艾滋病及疟疾[2]。肺结核患者缺乏临床表现，影像学多样，容易与其他肺部疾病相混淆，存在较高的漏诊率及误诊率，错过最佳治疗时机，危及患者生命安全。PCR技术是在上世纪90年代逐渐应用于结核病临床诊断，用于放大扩增特定的DNA片段分子生物学技术，作为生物体外特殊DNA复制，以此提高肺结核诊断准确性。本研究特对肺结核患者采取PCR技术检查，并与痰涂片进行比较，报道如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取符合本院入组条件的疑似为肺结核患者130例，来源于我院2017年6月至2019年6月期间收治的肺部疾病患者；其中男性患者72例，女性患者58例；年龄30～68岁，平均年龄(46.91±8.24)岁。患者及家属对研究具体内容知情，并自愿签署研究同意书。

1.2诊断方法

1.2.1痰涂片检验：痰涂片抗酸染色镜检，分三次收集晨起深度咳嗽痰液，取黏痰涂抹在厚片进行抗酸染色试验，抗酸染液(杭州天和微生物试剂有限公司提供)。抗酸染色，盐酸乙醇分色，碱性美兰复染，结核分枝杆菌呈红色，而其他细菌或背景物质属于蓝色。OLYMPUS-BX41型光学显微镜(日本OLYMPUS公司生产)，连续观察不同的300个视野，阴性：视野内未发现抗酸杆菌；阳性：发现抗酸杆菌。

1.2.2PCR技术检验：收集患者晨起深咳后第一口痰液0.5mL，置入浓度为1mmol/L的氢氧化钠溶液5μL内，均匀混合，放置37℃环境内，静置40min。离心处理5min，10000r/min，对混合液进行离心，去除上清液，生理盐水洗脱液进行洗脱。抽取胸水、血清各1mL，离心处理5min，10000r/min，再添加50μL裂解液内，行沸水内10min，离心处理5min，10000r/min，将15μL反应液添加0.2μL Tap酶，混合均匀，再添加20μL石蜡油封顶，取5μL上清液进行添加，制作成TB-DNA模板。PCR扩增循环，共反复扩增35次，随后取20mLPCR扩增液，行电泳技术检验。阳性：在紫外线下，PCR技术检测存在橙黄色荧光带160dp。

1.3观察指标 (1)对比PCR技术与痰涂片对肺结核检出率；(2)对比PCR技术与痰涂片检验敏感性、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值。

1.4统计学方法 运用SPSS23.0统计学软件包处理研究数据。计数数据以百分比率(%)表示，采取2检验；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1对比PCR技术与痰涂片对肺结核检出率 经临床表现、实验室指标、影像学技术、细菌学检验等多种技术综合诊断，102例患者确诊为肺结核；PCR技术检出率为73.85%(96/130)，痰涂片检出率46.92%(61/130)，差异有统计学意义(2=18.586，P=0.000)。

2.2对比PCR技术与痰涂片检验敏感性、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值 PCR技术检验敏感性、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值高于痰涂片(P<0.05)，见表1。

表1 对比PCR技术与痰涂片检验敏感性、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值

3 讨 论

临床诊断肺结核时，其检验病理性多依赖于镜下观察典型结核结节，但以渗出为主的病变及典型结核结节，诊断难度较高。肺结核实验室诊断传统技术为痰培养，痰培养检验技术操作简单，可在基层医院快速开展，但难以区分结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、死菌及活菌；同时痰培养检验对实验室环境有较高要求，生物安全防范要求较为严格，培养周期耗费的时间长，临床采用快速培养仪进行诊断，也难以满足临床诊断需求，漏诊率及误诊率较高[3]。血清学试验检验肺结核时，多是分离结核分枝杆菌特异性膜蛋白抗原，分离并发现血清内的结核分枝杆菌抗体，灵敏度较高，但其报道的假阳性率较高。尤其是患者多为菌阴肺结核，临床表现的复杂多样，影像学改变缺乏特异性，造成肺结核检出率较低。

PCR技术的应用，给肺结核诊断带来新的希望。分子生物学技术作为诊断肺结核的新型技术，PCR技术作为代表性检验方法，结合各种分子标记、基因扩增等多项技术以及碱基互补配对原理，可显著提高PCR技术诊断特异性；同时利用基因扩增技术，不断放大目标核酸片段，能够提高PCR技术检验的灵敏度[4-5]。本组研究中，PCR技术对肺结核检出率73.85%高于痰涂片肺结核检出率46.92，检验敏感性、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均高于痰涂片(P<0.05)。研究发现，肺结核患者采用PCR技术检查，与痰涂片相比，具有较高的肺结核检出率，更适用于肺结核早期诊断。PCR技术检查肺结核时，且能反映患者临床治疗过程中结核分枝杆菌数量变化，可作为评估肺结核治疗效果的主要手段。但PCR技术无法区别死菌与活菌，对治愈肺结核患者肺内残留结核杆菌，PCR技术检验仍存在阳性率，因此临床检验时需结合其他技术进行判断。

综上所述，在肺结核患者早期诊断中，采取PCR检验，具有较高的检测准确性，灵敏度、特异度较高，操作简单、快速准确，值得临床推广应用。