IH-1000全自动血型仪在筛选Fya阴性血液中的应用

潘英芳，邵静茹，赵爱平，周娜，徐群，宋永红

(山东省血液中心血型参比研究室，济南250014)

当某种血型在人群中仅有小于千分之一的人拥有时，即可认为该血型为稀有血型[1]。当稀有血型患者需要输血时，一方面很可能由于相同血型在人群中出现的频率十分罕见，无法及时找到相匹配的血液，另一方面由于稀有血型患者一旦产生相应的稀有血型抗体，输注血型不合的血液即可产生输血反应，严重者甚至可致死亡。因此，稀有血型患者用血一直是临床输血的难题，快速、高效地筛选出相合的稀有血型血液已成为亟待解决的问题。国内实验室一般采用传统手工方法筛选稀有血型。最近我们用IH-1000全自动血型仪筛选Fya阴性血液，并完成1例抗Fya阳性患者配血工作。

1 资料与方法

1.1对象 患者，女，47岁，围绝经期功能失调性子宫出血、贫血，血红蛋白50 g/L，曾多次输血，欲手术备血，医院输血科检测不规则抗体呈阳性，送本室进行抗体鉴定，并要求配血4 U。

1.2标本采集与处理 由本中心专业人员采集献血者血液，EDTA-K2抗凝，4 ℃保存，行常规血型检测后冷链运输本室待筛选。

1.3主要仪器与试剂 IH-1000全自动血型仪(美国Bio-Rad公司)，KUBOTA-KA2200血清学离心机、KUBOTA-3220毛细管超速离心机(日本久保田公司)，HH-W600金坛数显三用恒温箱(金坛市科析仪器公司)，MC450红细胞洗涤离心机(日本日立公司)，所有仪器均在校准有效期内使用。

单克隆抗A抗体(批号：20190917)、抗B抗体(批号：20190204)、ABO试剂红细胞(批号：20200113)、抗C抗体(批号：20193001)、抗c抗体(批号：20183102)、抗E抗体(批号：20203201)、抗e抗体(批号：20183302)均为IgM型抗体，均购自上海血液生物医药公司，抗D抗体(IgM型，批号：8000254001)、抗Fya抗体(IgG型，批号：8000236190)、抗Fyb抗体(IgG型，批号：8000232692)、筛选细胞(批号：8000261662)、谱细胞(批号：8000261664)均购自荷兰Sanquin公司，抗人球蛋白卡、样本稀释液均购自美国Bio-Rad公司，所有试剂均合格。

1.4免疫血清学实验 ABO血型及其他特殊血型抗原鉴定、不规则抗体筛查鉴定、交叉配血均按照《全国临床检验操作规程》及试剂盒说明书操作[2]，抗体筛查、鉴定结果均结合所用谱细胞抗原格局表判读。

1.5稀有血型筛选

1.5.1抗体工作液选择(参照抗体效价测定) 将抗体试剂原液倍比稀释，在各倍比稀释抗体的试管(微孔板、凝胶卡孔)中加入红细胞温育(试管法、微板法红细胞浓度为3%～5%，体积为50 μL；凝胶卡红细胞浓度为0.8%，体积为50 μL)，洗涤后加入抗人球蛋白试剂(微柱凝胶卡法无需此步骤)，离心观察结果，以出现反应强度1+且易于观察判读的稀释度作为最终筛选阴性红细胞的工作液。

1.5.2试管法、96孔微板法、微柱凝胶卡法筛选Fya阴性红细胞 均采用抗人球蛋白试验方法并按试剂盒说明书操作。

1.5.3IH-1000筛选Fya阴性献血者 参考IH-1000主侧交叉配血程序，将抗Fya试剂按1∶64稀释后加至贴有条形码的试管内，取代患者血清样本一侧；在IH-Com界面中选择Work List，点击Quick Request图标，在test下拉菜单中选择自主命名的“稀有血型系统筛选”程序，将抗Fya试剂试管和献血者样本试管扫码上机；开始运行，待实验结束，机器自行判读结果。

2 结果

2.1患者血型及其他血型系统表型鉴定 该患者血型为O型，Rh血型系统表型为CCDee，Duffy血型系统表型为Fy(a-b+)。

2.2患者不规则抗体筛查鉴定结果 间接抗人球蛋白实验结果显示,患者血清与O1～O3筛选细胞均存在不同程度的凝集，强度分别为0+,4+,2+s(s：strong指强凝集)；进一步运用O1～O16谱细胞与患者血清反应存在不同凝集，格局明显，结合患者Rh系统及Duffy系统表现型，推断鉴定该患者血清内不规则抗体为抗E、抗c合并抗Fya抗体。

2.3用IH-1000 筛选Fya阴性红细胞 从1 500名献血者血液中筛选出4名Fya阴性者，采用手工微柱凝胶法，用抗Fya抗体试剂原液进行确认，经验证均为Fya阴性；同时确认其Rh系统CcEe表现型,其中2例表型为CCee。

2.4主侧交叉配血 用患者血清与2名Fya抗原确认阴性且E、c抗原阴性的献血者红细胞进行主侧配血试验，用手工微柱凝胶法主侧配血相合。

2.5IH-1000筛选Fya阴性血液方法与传统方法对比 常规确认Fya抗原采用抗Fya抗体原液，考虑到抗Fya抗体试剂成本高，对于初步筛选Fya阴性血液，首先对抗体稀释比例进行预实验，采用抗原为杂合Fy(a+b+)的红细胞，进行Fya抗体效价验证，最终以1+强度凝集稀释度作为工作液条件，即经典试管抗人球蛋白实验法(简称传统试管法)按照稀释比例1∶8、96孔微板抗人球蛋白实验法(简称96孔微板法)按照稀释比例1∶2、微柱凝胶卡法和IH-1000均按照稀释比例1∶64工作液进行筛选操作,见表1。

表1 4种方法初筛所用抗Fya抗体稀释比例

用经典试管抗人球蛋白实验法(简称传统试管法)、96孔板抗人球蛋白实验法(简称96孔微板法)、手工微柱凝胶检测卡方法及IH-1000 4种方法预实验对比抗体物料消耗、人力消耗、工作效率、结果判读难易程度等，最终选择IH-1000方法筛选上述1 500例献血者血液，见表2。

表2 4种方法筛选Fya抗原阴性血液对比

3 讨论

通常将ABO以外的血型抗体称之为不规则抗体。近年来，由于ABO、RhD抗原同型输血已得以规范，不规则抗体诱发的输血反应上升为影响临床输血安全的重要因素。因此，输血前行不规则抗体筛查是保障临床输血安全的重要措施之一[3-4]，而稀有血型系统对应的罕见不规则抗体虽然少见，但其诱发输血反应不容忽视。Duffy血型系统中Fya抗原阴性血液在亚洲人群中的概率约为3‰，这些罕见个体一旦产生相应不规则抗体，即面临配血困难，继而存在延误治疗的风险[5-7]。本病例存在抗c、抗E、抗Fya 3种不规则抗体，为Fya阴性稀有血型患者。本病例重度贫血,急需输注配血相合血液，考虑到抗Fya抗体可引起速发性或者延迟性溶血性输血反应[8]，因此，最好选择Fya阴性血液输注，3种抗原同时阴性的频率为0.6‰，需要筛选至少1 500名献血者，我们面临筛选Fya阴性稀有血型的困难。

传统稀有血型筛选方法，主要分为传统试管法、96孔微板法、微柱凝胶卡法，均需要手工配制红细胞悬液，工作量大，且消耗大量抗体试剂及其他耗材，同时需对每一个标本试管或者凝胶卡孔准确标记，读取结果靠肉眼观察，主观性强，步骤繁杂，每步都存在误差可能性[9-10]。近年来，一些实验室开展基因技术筛选稀有血型，但由于技术要求较高，涉及设备较多，经费较大，基因技术推进相对缓慢[11]。为迅速准确筛选到相配合的血液，我科室利用IH-1000交叉配血程序，将稀有血型筛选全自动化。IH-1000系一款免疫血液学诊断用的全自动系统，是基于免疫学抗原抗体反应的卡式凝胶技术，能够处理多种免疫血液学ID-Card技术，包括ABO血型分型、抗体筛查、抗体鉴定、抗人球蛋白实验测试和交叉配血[12-14]。IH-1000在医院输血科应用较广且应用多年，由于临床标本量大，IH-1000在临床输血中应用优势明显，但临床输血科储血有限，一旦遇到复杂同种抗体造成配血不合病例，多委托血站筛选血液。我实验室在接到此类标本后，一般先行不规则抗体鉴定，再行抗原阴性献血者筛选并配血。借助血站大量献血者样本试管储备优势，在IH-1000交叉配血功能基础上建立稀有血型程序，再对筛选的阴性献血者行红细胞相应抗原确认，短时间内便从1 500名献血者中为患者筛选到了c抗原、E抗原及Fya抗原均阴性的血液，与患者主侧配血试验相合，患者因此得到及时安全的输血治疗。

经多次预实验及实践，本实验室建立的IH-1000稀有血型筛选程序，已形成比较成熟的体系程序，利用IH-1000全自动血型仪高效、灵敏一体化优势，运用较低的抗体浓度、较少的人力耗材成本、较便捷的操作即实现了Fya阴性血液的筛选。后续我们反复实践，证实该程序也可以用于筛选Diego等其他血型系统的稀有血型血液。IH-1000筛选稀有血型程序可以在临床输血中推广，便于保障临床供血，同时可以加快我国稀有血型库建设[15]，丰富稀有血型库信息资源，缓解稀有血型患者用血难问题。