老年冠心病慢性心衰患者血清miR-214 galectin-3表达及其预后相关性研究

侯培培，于 倩，矫 妮，孟 锦，栾 波

(辽宁省人民医院/中国医科大学人民医院，辽宁 沈阳 110016)

冠心病慢性心衰主要临床表现为体循环或肺循环淤血、器官组织血液灌注不足，它是心血管疾病的终末期表现和最主要死因[1]。随着人口老龄化及生活水平的发展，慢性心衰引发的心律失常、心源性死亡等不良预后成为重大公共问题[2]。因此，寻找一种用于慢性心衰预后预测的生物标志物十分必要。微小RNA-214(miR-214)在血管内皮细胞中呈异常表达，与动脉粥样硬化斑块破裂有重要联系[3]。半乳糖凝集素-3(galectin-3)在免疫和炎性反应、动脉粥样硬化等过程中发挥重要作用，且研究表明，galectin-3在心衰病理生理学方面有一定作用[4]。因此，本研究通过分析老年冠心病慢性心衰患者血清miR-214、galectin-3水平与心衰相关临床指标间的关系，以期为不良预后的早期预测提供参考指标。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取2017年7月至2019年4月于本院心内科住院治疗的72例老年冠心病慢性心衰患者为研究对象(心衰组)，年龄60～88岁，平均(73.23±10.79)岁，男34例，女38例，合并高血压26例，合并高脂血症20例；同期选取健康体检者84例作为对照组，年龄60～87岁，平均(72.87±10.52)岁，男46例，女38例。两组之间性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究所有受试者均签署知情同意书，且经辽宁省人民医院伦理委员会审核批准。纳入标准：①符合慢性心力衰竭诊断标准[5]，左心衰竭诊断要点：有咳嗽、劳力性呼吸困难、阵发性夜间呼吸困难、肺静脉瘀血，右心衰竭诊断要点：体位性水肿、静脉压升高、肝脏肿大；②病例资料齐全者；③未进行过放疗、化疗者。排除标准：①伴有感染性疾病及肿瘤者；②伴有严重肝肾功能不全者；③近1周内使用抗炎药物、免疫抑制剂者；④伴有其它血液系统及自身免疫疾病者；⑤6个月内发生过脑卒中、不稳定型心绞痛、急性心肌梗死、急性脑血管意外者。查阅门诊及住院病历，收集所有受试者一般资料，包括性别、年龄、体质量指数(BMI)、肌酐水平、吸烟史等。

1.2主要试剂与仪器:RNA提取试剂盒(批号：R1200-100)购自北京索莱宝科技有限公司；反转录试剂盒(批号：KL266)购自上海康朗生物科技有限公司；miScript SYBR®Green Mix荧光定量PCR试剂盒(批号：218073)购自德国QIAGEN公司；氨基N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒(批号：YB-E1449)购自上海钰博生物科技有限公司；galectin-3 ELISA试剂盒(批号：EY-D9212)购自上海一研生物科技有限公司。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)仪(型号：Stratagene Mx3005P)购自上海普迪生物科技有限公司；彩色多普勒超声诊断仪(型号：EPIQ7C)购自荷兰飞利浦公司。

1.3研究方法

1.3.1样品采集及保存:采集体检者体检当天及慢性心衰患者入院第2天晨起空腹肘静脉血样5mL，3000r/min离心15min后收集血清，置于-80℃保存待测。

1.3.2血清miR-214水平测定:采用RNA提取试剂盒提取血清总RNA，反转录试剂盒将RNA反转录得cDNA，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。采用qRT-PCR法检测血清中miR-214表达水平，采用qRT-PCR仪对miR-214及其内参U6进行扩增。反应体系共20μL：cDNA模板(50ng/μL)2μL，miScript SYBR®Green Mix10μL，上下游引物(10μM)各0.8μL，ddH2O 6.4μL。反应条件：95℃预变性5min；95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s，40个循环。miR-214及内参U6的引物序列见表1，引物由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成。每份样品均设3个重复孔，采用2-△△CT法计算血清miR-214相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.3血清galectin-3及心功能指标测定:采用彩色多普勒超声诊断仪检查心功能指标左心室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)及左室收缩末内径(LVESD)。采用ELISA法检测血清galectin-3、NT-proBNP水平。

1.3.4随访:慢性心衰患者出院12个月内以电话等方式随访，收集了解患者心血管事件发生情况，包括心衰复发、心律失常、心源性死亡，根据是否发生上述事件将慢性心衰患者分为心血管事件组23例和非心血管事件组49例。

2 结 果

2.1对照组与心衰组一般资料比较:对照组与心衰组性别、年龄、BMI、吸烟比例、肌酐水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 对照组与心衰组一般资料比较

2.2对照组与心衰组血清miR-214、galectin-3水平及心功能指标比较:心衰组miR-214、galectin-3、LVESD、LVEDD、NT-proBNP高于对照组，LVEF低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 对照组与心衰组血清miR-214 galectin-3水平及心功能指标比较

2.3慢性心衰患者血清miR-214、galectin-3水平与心功能指标相关性:Pearson法分析结果显示，慢性心衰患者血清中miR-214、galectin-3水平与LVESD、LVEDD、NT-proBNP呈正相关(P<0.05)，与LVEF呈负相关(P<0.05)，见表4。

表4 慢性心衰患者血清miR-214 galectin-3水平与心功能指标相关性

2.4不同预后慢性心衰患者血清miR-214、galectin-3水平及心功能指标比较:心血管事件组miR-214、galectin-3、LVESD、LVEDD、NT-proBNP高于非心血管事件组，LVEF低于非心血管事件组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

表5 不同预后慢性心衰患者血清miR-214 galectin-3水平及心功能指标比较

2.5影响慢性心衰患者预后的多因素Logistic回归分析:将慢性心衰患者是否发生不良心血管事件作为因变量，以miR-214、galectin-3、LVEF、LVESD、LVEDD、NT-proBNP为自变量进行Logistic回归分析，结果显示miR-214、galectin-3是影响慢性心衰患者发生不良心血管事件的独立危险因素(P<0.05)，LVEF是影响慢性心衰患者发生不良心血管事件的保护因素(P<0.05)，见表6。

表6 影响慢性心衰患者预后的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

微小RNA(miRNA)可通过调节血管生成相关因子，调控内皮细胞增殖、迁移等，进而调节血管新生，影响缺血性心脑血管疾病[6,7]。赵宁等[8]研究表明，miR-214可通过抑制血管新生等作用，加剧心力衰竭的发展。本研究结果显示，慢性心衰患者血清miR-214高于健康人群，与陈劲松等[9]研究结果中miR-214的表达趋势一致；慢性心衰患者中发生心血管事件患者血清miR-214高于未发生心血管事件患者，且miR-214是影响慢性心衰患者发生不良心血管事件的独立危险因素。提示miR-214可能通过高表达参与心衰的发生、发展，推测可能是miR-214高表达后抑制人体血管新生，加重心衰患者病情，影响预后；或miR-214的高表达使得基质细胞衍生因子-1表达水平升高，进而以微粒体形式释放入血，二者共同调节炎性因子的表达，从而参与心衰发生、发展，导致心衰患者发生心血管事件。

galectin-3可诱导I型胶原沉积、成纤维细胞增殖以及心室功能不全，且能作为心肌重构和纤维化的生物标记物[10]。galectin-3可参与心肌中巨噬细胞的浸润，进而影响心力衰竭[11]。本研究结果中慢性心衰患者血清galectin-3高于健康人群，且慢性心衰患者中发生心血管事件患者血清galectin-3高于未发生心血管事件患者，且galectin-3是影响慢性心衰患者发生不良心血管事件的独立危险因素，与秦榕蔚等[12]研究结果基本一致。推测其可能机制为：galectin-3高表达后促进心肌巨噬细胞浸润，增加胶原沉积，导致心肌顺应性减低、心肌肥厚，进而促进心力衰竭的发生；galectin-3高表达可调节炎症水平和心肌纤维化，导致心肌重构，而心肌重构和心肌纤维化是心力衰竭的病理基础，间接影响心力衰竭发生、发展及预后。丁才智等[13]研究显示，LVEF、LVESD等与心力衰竭密切相关，本研究与其结果基本一致。此外，本研究中慢性心衰患者血清中miR-214、galectin-3水平与LVESD、LVEDD、NT-proBNP呈正相关，与LVEF呈负相关。进一步提示miR-214、galectin-3可能通过影响LVEF等心功能指标的变化，间接参与慢性心力衰竭的发生、发展。

综上所述，miR-214、galectin-3水平的变化对慢性心衰疾病的发生、发展及预后均有重要意义，可能会成为冠心病慢性心衰潜在的治疗靶点。但miR-214、galectin-3影响冠心病慢性心衰的具体作用机制仍需深入探究，同时还需进一步探索miR-214、galectin-3的实际临床应用价值。