尿液病毒载量检测对先天性巨细胞病毒感染诊断及病情评估的价值分析

邱锐琴，吴小波，杜志云，曹沐琳，乔 木，姚文秀

(1.秦皇岛市第一医院 新生儿科,河北 秦皇岛066000；2.秦皇岛市第一医院 儿一科,河北 秦皇岛066000)

人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)的感染性非常强，特别在免疫力下降的人群中，该病毒的感染率更强[1]。婴幼儿一旦感染HCMV，可引起全身多脏器的损害，表现为生长发育迟缓、小头畸形、智力低下、黄疸、肝脾肿大、听力及视力障碍等。严重者甚至肝衰竭而死亡。多数 HCMV感染者没有特异性的临床症状而成为潜在 感染状态，须结合实验室才能确诊。对于大多数先天性HCMV感染的婴幼儿患者，语言表达困难，在很大程度上使得患儿临床诊断难度增加。基于临床特征联合实验室检验指标辅助检查，对病情评估以及临床转归情况预测等均具有积极的促进作用。尿液病毒载量检测，能够对HCMV患儿的感染情况进行准确、灵敏地予以反映，可早期提示患儿病情的程度[3]。本研究主要探讨了尿液病毒载量在先天性HCMV感染诊断及病情评估中的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年6月至2019年6月期间秦皇岛市第一医院收治的82例HCMV感染患儿作为研究对象。利用 ELISA或其他改良技术测患儿血清中抗 CMV-IgG和抗 CMV-IgM。其结果判断如下[2]:①抗 CMV-IgG(+),表明有CMV感染,但6个月内的婴儿需排除胎传抗体。如从阴性转为阳性则表明原发感染,双份血清抗体滴度≥4倍表明活动性感染,严重免疫缺 陷可出现假阴性；②抗CMV-IgM(+)表明活动性感染。按照HCMV病毒载量检测结果中位数(1.13×104copy/mL)，将其分为高病毒载量组(n=38)与低病毒载量组(n=44)。高病毒载量组38例患儿中，男23例，女15例；月龄2-3个月，平均(2.25±0.20)个月；HCMV载量平均值：(2.33±0.40)×105copy/mL。低病毒载量组44例患儿中，男27例，女17例；月龄2-3个月，平均(2.31±0.22)个月；HCMV载量平均值：(6.09±0.43)×103copy/mL。两组婴儿在性别及月龄方面的差异均无统计学意义(P均>0.05)。排除标准：①肺炎支原体、腺病毒、风疹病毒以及肠道病毒71型、柯萨奇病毒等病毒感染患儿；②排除血液系统以及免疫系统疾病患儿；③除外外耳、中耳畸形、急性中耳炎、家族耳聋病史、耳毒性药物用药史以及其他可致听力损失的因素；④除外胆道闭锁等；⑤临床资料不完整患儿。本研究获得医院伦理委员会批准，参与者对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

取5.0 ml患者尿液标本，使用PCR仪(9700型)对尿液中的HCMV病毒DNA载量进行检测分析。具体方法如下：HCMV核酸定量PCR由本院检验科完成。核酸扩增仪采用美国PE 公司的ABI7300 实时荧光定量PCR 仪。采用中山大学达安基因股份有限公司提供的HCMV荧光PCR定量试剂；采集婴儿晨尿尿样3 ml，尿液标本12 000 r/min离心5 min，沉淀加50 μl DNA 提取液打匀;100℃恒温处理10 min(误差不超过1min)，12 000 r/min离心5 min，取上清液(含病毒DNA)2 μl做PCR扩增。

1.3 观察指标

1.3.1高、低病毒载量组患儿临床特征发生情况对比 比较高、低病毒载量组患儿咳嗽、黄疸、肝脏肿大及脾脏肿大胆汁淤积及听力损失的发生率。

1.3.2高、低病毒载量组患儿生化指标水平对比 采用全自动生化分析仪(日本HITACHI7020型)对患儿尿液中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase，AST)、总胆汁酸(Total Bile Acid，TBA)、乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase，LD)、乳酸脱氢酶同工酶(Lactate Dehydrogenase Isoenzyme，LDH)、肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzyme，CK-MB)以及C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)水平。严格按照试剂盒上的说明书进行操作。

1.3.3高、低病毒载量组患儿临床转归情况对比 包括：两组患儿听力损失及热退时间。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 高、低病毒载量组患儿临床特征发生情况对比高、低病毒载量组患儿咳嗽、黄疸、肝脏肿大及脾脏肿大发生率差异均无统计学意义(P均>0.05)，高病毒载量组胆汁淤积及听力损失发生率均分别显著高于低病毒载量组(P均<0.05)，见表1。

表1 高、低病毒载量组患儿临床特征发生情况比较[n(%)]

2.2 高、低病毒载量组患儿生化指标水平对比两组患儿除了ALT、AST及CRP水平差异均无显著统计学意义外，其余各项指标(TBA、LD、LDH及CK-MB)水平，高病毒载量组显著高于低病毒载量组(P均<0.05)，见表2。

表2 高、低病毒载量组患儿生化指标水平比较

2.3 高、低病毒载量组患儿临床转归情况对比高病毒载量组听力损失及住院时间均分别显著高于低病毒载量组(P均<0.05)，见表3。

表3 高、低病毒载量组患儿临床转归情况比较

3 讨论

目前，HCMV病毒感染后婴幼儿最为常见的临床表现为发热，疾病发病程度轻重不一，病情评估难度较大。对于HCMV病毒感染的临床诊断标准，一般需要满足咳嗽、眼睑水肿、肝脏肿大及脾脏肿大等方面的临床症状，另外还需要开展实验室相关指标作为辅助检查依据。当前，临床上有很多方法对HCMV感染疾病进行检查与诊断，然而这些方法检测率均偏低，且假阳性发生率高[4,5]。牟文凤[6]研究结果显示：尿液HCMV病毒载量阳性检测率较高，其能够更好地适合疑似HCMV感染的婴幼儿诊断之中。由此可以得知，应该选择一种有效的检测方法，从而提高HCMV感染婴幼儿的诊断率。

荧光定量PCR技术是临床检测HCMV病毒载量最为可靠以及灵敏度最高的检测技术，可以对婴幼儿受感染情况加以反映，结合HCMV病毒载量水平的高低，能够对受感染的婴幼儿的病情进行准确地评估[7-9]。本研究方案中，主要采用向尿液中加入乙二胺四乙酸二钾(Dipotassium ethylenediaminetetraacetate，EDTA-K2)，将荧光定量PCR法用于尿液病毒载量检测之中。HCMV病毒感染婴幼儿常存在咳嗽、肝脏肿大及脾脏肿大等临床特征[10]。本研究结果表明：高、低病毒载量组患儿咳嗽、黄疸、肝脏肿大及脾脏肿大发生率差异均无统计学意义(P均>0.05)，高病毒载量组胆汁淤积及听力损失发生率均分别显著高于低病毒载量组(P均<0.05)。上述结果与相关文献报道结果相符[11-13]。徐福胜等[14]研究结果显示：患儿存在异型淋巴细胞数量攀升等情况，表明患儿存在HCMV病毒感染的可能性。随着HCMV病毒载量水平升高，患儿的临床症状也变得更为显著，其能够在尿液中加以体现。患儿在感染HCMV病毒之后，病毒会对相关脏器具有浸润效果，从而使得全身脏器出现病理学变化，进而使得相关临床症状以及实验室指标出现改变[15,16]。本研究结果显示：两组患儿除了ALT、AST及CRP水平差异均无显著统计学意义外，其余各项指标(TBA、LD、LDH及CK-MB)水平，高病毒载量组显著高于低病毒载量组(P均<0.05)。此结果提示：随着HCMV病毒载量地逐渐增大，表征患儿肝功能以及心脏功能的相关生化指标水平也随之而上升。本研究结果还显示：高病毒载量组听力损失及住院时间均分别显著高于低病毒载量组(P均<0.05)，上述结果提示：HCMV病毒载量水平会对患儿临床转归产生重要影响。