早期2型糖尿病患者血清miR-125b表达与颈动脉内-中膜厚度的相关性*

李江雁, 陈玉凤, 吴苏豫, 张莹, 周艳红

新乡市中心医院内分泌科(河南新乡 453000)

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)又称成人发病型糖尿病，约占糖尿病患病人数的90%，其主要表现为胰岛素功能受损，血糖升高[1]。近年来我国T2DM患病人数呈逐年上升趋势，其中以动脉粥样硬化为病理基础的大血管病变是引起T2DM患者死亡的重要并发症，严重威胁人们的身体健康[2]。研究表明，颈动脉内-中膜厚度(carotid intima-media thickness，CIMT)是评价早期动脉粥样硬化的重要指标，与T2DM患者动脉损伤程度及范围密切相关[3]。因此，对早期血管病变影响因素的筛查对于预测早期T2DM患者心血管事件的发生十分重要。miR-125b是miRNA的一种，越来越多的研究表明[4]，miR-125b参与T2DM发病，可能是诊断T2DM的潜在新型生物标志物。然而miR-125b在早期T2DM患者血清中的表达情况，及其与CIMT的关系仍不明确。基于此，本研究通过检测早期T2DM患者血清中miR-125b表达水平，并探讨其与颈动脉内-中膜厚度的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年5月至2018年10月本院收治的230例早期T2DM患者为研究对象，男124例，女106例，年龄40～80岁，平均(50.81±15.18)岁，纳入标准：(1)符合早期T2DM疾病诊断标准[5]；(2)经空腹血糖水平、葡萄糖耐量试验确诊；(3)年龄40～80岁；(4)患者自愿配合本次研究，并已签署知情同意书。排除标准：(1)1型糖尿病患者；(2)严重心肝肾疾病患者；(3)有自身免疫疾病患者；(4)有糖尿病微血管并发症患者；(5)有恶性肿瘤疾病患者。根据颈动脉内-中膜厚度将早期T2DM患者分为CIMT正常组(CIMT<0.9 mm)104例，男59例，女45例，年龄40～78岁，平均(50.06±10.22)岁，CIMT增厚组(CIMT≥0.9 mm)126例，男65例，女61例，年龄41～80岁，平均(51.43±12.08)岁。同期选择78例来本院体检的正常人作为对照组，男43例，女35例，年龄40～79岁，平均(50.24±12.37)岁，两组性别、年龄等一般资料相比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 临床资料收集 (1)对受试者均进行性别、年龄、体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)等一般资料的调查，收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率等生病体征检测与登记。(2)于受试者清晨空腹时，抽取静脉血4 mL，分别完成空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖化血红蛋白(HbA1C)、血清肌酐(Scr)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等实验室指标的检测。

1.3 血清miR-125b水平检测 采集血液标本后，在离心机(3 000 r/min)上离心5 min，分离血清，按照miRNA提取试剂盒说明书，提取miRNA，按照TaqMan® MicroRNA逆转录试剂盒将提取的miRNA进行逆转录合成cDNA，采用miScript SYBR Green PCR Kit检测血清miR-125b相对表达水平，miRNA提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司，TaqMan® MicroRNA逆转录试剂盒购自美国应用生物系统公司，miScript SYBR Green PCR Kit购自北京冬璞泰和科技有限责任公司，具体步骤参见试剂盒说明书，反应体系20 μL，反应条件：95℃ 30 s；60℃ 30 s；75℃ 10 s，共35个循环。miR-125b及内参U6的引物序列见表1。采用2-ΔΔCT法对miR-125b表达水平进行定量分析。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件，计数资料以“%”表示，两组或多组间比较采用2检验，计量资料以表示，两组间比较采用t检验，多组间比较F检验，采用Pearson对早期T2DM患者CIMT与糖脂代谢指标及miR-125b的相关性分析，采用多元线性回归分析方法分析早期T2DM患者CIMT的影响因素，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料与生化指标比较 3组受试者性别、年龄、SBP、SBP、心率、Scr、TC、TG、HDL-C与LDL-C相比，差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比，CIMT正常组、CIMT增厚组T2DM患者BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C显著升高(P<0.05)，其中CIMT增厚组T2DM患者WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C显著高于CIMT正常组(P<0.05)。见表1。

2.2 受试者血清miR-125b表达比较 与对照组相比，CIMT正常组与CIMT增厚组T2DM患者血清中miR-125b表达水平显著升高(P<0.05)，且CIMT增厚组T2DM患者血清中miR-125b表达水平显著高于CIMT正常组(P<0.05)。见表2。

表1 两组患者一般情况比较

表2 受试者血清miR-125b表达比较

2.3 CIMT与其他指标的相关性分析 Pearson相关分析显示，CIMT与WHR、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b呈正相关(P<0.05)，与BMI、FINS等其他指标无显著相关性(P>0.05)。见表3。

表3 CIMT与其他指标的相关性分析

2.4 多元线性回归分析影响CIMT的相关因素 以CIMT为因变量，以BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b为自变量，进行多元线性回归分析，结果显示，WHR、FPG、HOMA-IR、miR-125b均是T2DM患者CIMT影响因素。见表4。

表4 CIMT影响因素的多元线性回归分析

3 讨论

糖尿病是一种涉及基因之间复杂的相互作用的多因素内分泌代谢疾病。据国际糖尿病联盟统计结果显示，2011年全球糖尿病患病人数已超过3.7亿，预计2030年，糖尿病患者将发展至5.5亿[6]。T2DM是一种常见的糖尿病类型，约占糖尿病患者总人数的90%，由于肥胖、活动少和应激等诱因的影响，导致患者胰岛素分泌能力及自身对胰岛素的敏感性降低，引发疾病[7]。调查显示，受人们饮食结构及生活习惯的改变的影响，我国T2DM发病率及病死率有呈不断上升的趋势。其中大血管病变是导致糖尿病患者死亡的主要原因，而动脉粥样硬化是大血管病变的基础[8]。因此及早发现T2DM患者的动脉粥样硬化相关的危险因素，对于诊断及控制糖尿病患者大血管病变的发展十分重要。CIMT是动脉粥样硬化的早期标志物，与心血管事件的发生、发展密切相关。本研究结果显示，与对照组相比，CIMT正常组与CIMT增厚组T2DM患者BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C显著升高，其中CIMT增厚组T2DM患者WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C显著高于CIMT正常组，提示BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C在早期T2DM患者血清中表达上调，可能影响T2DM患者CIMT，可能为早期T2DM患者动脉粥样硬化的危险因素，但仍需进一步筛查。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类单链非编码RNA分子，平均长约22 nt，通过与3′非翻译区(3′-UTR)结合调节mRNA表达，每种miRNA都能够靶向多种mRNA[9]。已有多项研究表明miRNA可参与T2DM疾病的发展[10]。王昱等[11]研究表明，miRNA-296、miRNA-9在T2DM患者血浆中均表达下调，且与胰岛素水平呈负相关。有研究表明,miR-125能够参与调节胰岛素信号通路，其表达水平增加可能与T2DM患者胰岛素抵抗有关。Shen等[4]研究表明miR-125b在T2DM患者外周血单核细胞中表达上调，可能参与了T2DM的发病机制。本研究结果显示，与对照组相比，CIMT正常组与CIMT增厚组T2DM患者血清中miR-125b表达水平显著升高，且CIMT增厚组T2DM患者血清中miR-125b表达水平显著高于CIMT正常组，提示miR-125b与CIMT增厚有关，可能参与早期T2DM患者动脉粥样硬化的发生，可能是诊断T2DM的潜在新型生物标志物。

T2DM患者动脉粥样硬化是多种因素作用的结果，其中血糖及HOMA-IR升高是其发生的高危因素。血管内皮障碍及糖代谢、脂代谢异常是其发病的重要原因[12]。周梦云等[13]研究表明，CIMT与患者年龄及SBP呈正相关。陈超等[14]研究表明，CIMT与糖尿病病程、FPG及HOMA-IR呈正相关，多元线性回归显示，FPG是CIMT的影响因素。孙振杰等[15]研究表明，CIMT与糖尿病病程、SBP、HbA1C、WHR呈正相关，其中糖尿病病程、HbA1C是CIMT的影响因素。本研究结果显示，CIMT与WHR、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b呈正相关，多元线性回归分析结果显示，WHR、FPG、HOMA-IR、miR-125b均是T2DM患者CIMT的影响因素。提示miR-125b可能参与T2DM疾病的发展，可能在一定程度上影响T2DM患者颈动脉粥样硬化的程度。

综上所述，早期T2DM患者血清中miR-125b表达上调，且其表达水平与患者CIMT正相关，是影响T2DM患者CIMT的因素，可能参与早期T2DM患者动脉粥样硬化过程。然而本研究仅探究了早期T2DM患者血清中miR-125b的表达情况，具体作用机制还不清楚，仍需进一步深入研究。