通关藤药材中通关藤苷G含量的HPLC测定

王聪玮，殷 丹*

（1.梅河口市食品药品检验检测中心，吉林 梅河口 135000；2.通化市食品药品检验所，吉林 通化 134001）

通关藤的干燥藤茎是临床常用的中药药材。通关藤在我国主要生长于云南及贵州等地，以野生为主，其味苦，微寒，中医研究显示其有止咳、祛痰、平喘、清热、解毒的功效，此外，它对于胃癌、肺癌等恶性肿瘤细胞也有一定的抑制作用[1]。现代药理学研究显示，通关藤中富含皂苷类、多糖类、酚酸类以及生物碱等多种成分，其中通关藤苷G、通关藤苷A、通关藤苷I、通关藤苷H等C21甾体类化合物是其中主要的活性物质之一[2]。目前关于通关藤苷G的测定比较少。本次研究建立了高效液相色谱（HPLC）测定通关藤药材中通关藤苷G含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

选择Agilent的1100型高效液相色谱仪，梅特勒托利多的AB135s电子天平，G1314A的自动进样器，昆山超声仪器的KQ3200DB型超声清洗器以及WATERS 的2695型HPLC色谱工作软件。

1.2 试药

通关藤药材(已经相关中医药专家鉴定为通关藤，产自云南丽江，批号190312，190524，190704）。通关藤苷G对照品由中国食品药品检定研究院提供（CAS：191729-43-8，纯度: 98%，批号:20170422）。乙腈和甲醇皆为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选用Symmetry的 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相选用乙腈-0.1%磷酸溶液(43:57)，柱温30℃，进样量20μL，检测波长设定为230 nm。流速设定1 ml/min。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液制备

精密称取1.006 g的通关藤药材粉末，置入锥形瓶中，加入40 ml的甲醇溶液，经超声振荡处理20 min，待其冷却后称重并再加入适量的甲醇溶液定容至50ml并摇匀。最后采用0.45μm的过滤膜进行过滤浓缩，即得最终的供试品溶液。

2.2.2 对照品储备液的制备

精密称取13.40mg的通关藤苷G标准品，置入量瓶中,加入甲醇溶液定容至10ml,振荡摇匀即得1.32mg/mL的通关藤苷G对照品储备液。

3 方法学考察

3.1 系统适应性考察

分别取20μL的甲醇溶液、通关藤苷G对照品溶液以及通关藤供试品溶液，按照上述2.1的条件注入色谱柱，经对三者的色谱图进行比对分析，可见通关藤苷G与通关藤供试品溶液的其它组分能很好的分离，而甲醇溶液中在通关藤苷G保留时间的相应位置无干扰的色谱峰，见图1。

图1 色谱图

3.2 线性关系考察

精密量取0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL的通关藤苷G对照品储备液，分别加入10ml的量瓶中，加入适量甲醇溶液进行稀释定容。按2.1条件，依次量取20 μL注入色谱仪测定。以峰面积(Y)、浓度（Z）分别作为纵坐标、横坐标,绘制通关藤苷G标准溶液的线性回归方程为：Y=272.45Z+3.48071，可见通关藤苷G在4.5～79.4 μg/mL范围内呈现良好的线性关系（r=0.99445）。

3.3 精密度实验

精密量取1.0mL的通关藤苷G对照品储备液，加入10ml量瓶经甲醇稀释定容后，量取20μL按上述色谱条件进行重复进样测定6次，计算其含量。结果显示6次测定的通关藤苷G峰面积相近（RSD=1.35%）。

3.4 重复性试验

重复称取6份190312批号的通关藤供试品粉末1.006g，按照2.2.1方法制成6份通关藤供试品溶液，依次量取20μL进行进样测定通关藤苷G的峰面积，计算显示6次重复测得的通关藤苷G的峰面积相近（RSD=1.32%），重复性良好。

3.5 稳定性试验

称取190312批号的通关藤供试品粉末1.006g制备成通关藤供试品溶液，制备完成后在室温下放置0、2、4、6、8、12 h时，分别量取20μL进行加样测定，计算通关藤苷G峰面积。结果可见通关藤苷G的峰面积无显著变化（RSD=1.29%），提示通关藤供试品能在12 h内保持相对稳定。

3.6 加样回收实验

称取190312批号的通关藤供试品粉末3份，1.0g//份，分别加入供试品中通关藤苷G含量的0.5、1.0、1.5倍的通关藤苷G对照品，按同样方法制备成加样回收供试品溶液。分别进样进行测定计算通关藤苷G的加样回收率，结果显示通关藤苷G的加样回收率为98.78%（RSD=0.929%）。

表1 加样回收实验

3.7 样品含量测定

对于190312，190524，190704三个不同批号的通关藤供试品粉末分别按2.2.1法制备供试品溶液，依次取样进样测定，结果可见三批的通关藤苷G含量分别为1.54 mg/g、1.59 mg/g、1.56mg/g。

3 讨 论

本次研究建立了HPLC测定通关藤药材中通关藤苷G含量的方法。在检测波长确定时，对其进行全波长扫描显示，在230 nm时，通关藤苷G出现了最大吸收峰值，故选取230nm为其检测波长，与徐凯等的研究一致。在流动相的选择中，原根据以往文献选取乙腈：水（45:55）溶液，但是在实际应用中发现通关藤苷G与通关藤中的其他C21甾体类化合物不能很好的分离，继而尝试了乙腈-0.1%磷酸溶液(43:57)，结果显示通关藤苷G的色谱峰分离良好，因此确定了乙腈-0.1%磷酸溶液(43:57)作为最终的流动相。对于HPLC法测定通关藤药材中通关藤苷G含量的稳定性、精确度、重复性等进行了考察，结果显示HPLC法测定通关藤药材中通关藤苷G含量的稳定性、精确度、重复性均比较好，最终通关藤苷G加样回收率的平均为98.78%，提示HPLC法通关藤药材中通关藤苷G含量的准确性高，且HPLC法操作简便易行，可作为其质量控制的方法。