李石化,杨建龙
(长春市食品药品检验中心,吉林 长春 130000)
复方丹参片是中医常用的理血方剂,主要由丹参,三七,冰片组成[1-2]。复方丹参片具有活血化瘀,理气止痛的功效,被收入中国药典2015年版[3-4]。临床研究显示复方丹参片在气滞血瘀所致的胸痹、心痛等病症应用广泛[5]。冰片可芳香开窍,行气止痛,是复方丹参片中的主要成分之一。但是由于冰片性质的特殊性,易挥发,且生产时投料较少,因此含量容易下降[6-7]。本次研究应用气相色谱法建立复方丹参片中冰片含量,考查复方丹参片中冰片提取方法的效果,现汇报如下。
安捷伦的GC-4890D型气相色谱仪,FID检测器以及杭州普惠的SePu 3000色谱工作站。
复方丹参片由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供,(批号19040513,19051106,19062205)。异龙脑对照品、龙脑对照品均由中国食品药品检定研究院提供(批号111512-201904、110881-201902)。无水乙醇为分析纯,水为蒸馏水。
选用DB-WAX色谱柱(30mm,0.32mm,0.25μm),柱温初始100℃,后以7.0℃/min的升温速度将柱温升至160℃。检测器的温度设置为230℃,载气流速设定为2.0mL/min。
采用分流进样,分流比为15:1。进样量为1μL,用内标法进行测定,内标物选用水杨酸甲酯。
2.2.1 内标溶液的制备
量取适量的水杨酸甲酯,加入含有无水乙醇的量瓶中,制成0.20mg/ mL的内标溶液。
2.2.2 供试液的制备
取复方丹参片10片,细细研磨后。精密称定0.3g样品将其加入烧瓶中,加入内标溶液8mL,进行超声溶解20min,待其冷却后再加内标溶液定标10mL。
2.2.3 对照溶液的制备
分别取适量的龙脑、异龙脑对照品0.3g,加入适量的内标溶液,摇匀制备成龙脑0.15mg/ mL、异龙脑0.10mg/ mL的混合对照溶液。
2.2.4 阴性对照品溶液的制备
取不含龙脑、异龙脑的复方丹参片,研磨后称定适量,按同法制定成阴性对照品溶液。
取对照溶液,在2.1色谱条件下进行进样测定,结果可见龙脑、异龙脑和水杨酸甲酯三峰能够有效分离,且阴性对照品溶液中在龙脑、异龙脑的相同位置没有色谱峰,专属性良好,干扰小。
精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、1.2、2.4mL放入10mL 量瓶中,经内标溶液稀释定容。依次取样1μL注入气相色谱仪进行测定,以龙脑、异龙脑与内标物比值峰面积为纵坐标,浓度的比值为横坐标,绘制其回归方程为:①异龙脑Y =6.7912X-2.4605 ;②龙脑Y =7.1395X-3.9138。结果显示异龙脑、龙脑分别在65.2~84.9ng、55.8~98.1ng 范目内呈现出良好的线性关系(r=0.9982、0.9993)。
取对照品溶液,稀释定容后取样按上述色谱条件进行重复测定6次。测定结果显示异龙脑,龙脑与内标物的峰面积比值较为稳定,其RSD分别为0.93%,0.98%.
取批号19040513的供试品溶液,稀释定容后,在室温下放置,每间隔2h进行进样测定,重复测定6次,结果显示龙脑、异龙脑与内标物峰面积的比值的RSD分别为0.93%、0.90%,显示供试品溶液在12h内可保持稳定.
取批号19040513的复方丹参片供试品溶液6 份,按之前的色谱条件进行重复测定,结果显示龙脑和异龙脑的RSD分别为0.92%, 0.89%(n=6)。
精密称取批号19040513的样品制成供试品溶液,分别加入样品含量50%,100%,150%的异龙脑,龙脑对照品,按上述色谱条件进样测定,计算异龙脑,龙脑的含量,结果显示异龙脑、龙脑的回收率分别为98.4%、99.1%,RSD分别为1.14%,0.97%。
对于三个批号的复方丹参片供试品分别制备供试品溶液,均进行进样测定,结果可见三批的龙脑含量分别为1.523、1.518、1.530mg/片,异龙脑分别为0.913、0.891、0.930mg/片,详见表1。
表1 复方丹参片样品的龙脑、异龙脑含量测定
冰片也称为合成龙脑,由龙脑和异龙脑构成,其挥发性较强,对于复方丹参片的质量也一定的影响[8-9]。本次研究建立气相色谱法测定复方丹参片的冰片含量,内标物选用水杨酸甲酯,其出峰时间与龙脑相近[10],而柱温选择,我们考量了不同温度下的色谱图,结果显示在150-160时,色谱图最佳。结果显示应用气相色谱法测定复方丹参片中冰片含量,方法简便准确,可用于其质量控制。