液相色谱法测定食品中的糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸

□ 张作松 施震地 启东市综合检验检测中心

食品很容易因为温湿度、环境等出现变质，给企业带来巨大经济损失，也会制约食品行业发展。防腐剂的添加很好地延长了食品的保质期，因此被广泛添加到食品中。目前常添加的有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、丙酸及其盐、脱氢乙酸等。甜味剂能够改善口感进而增加食欲，常用的甜味剂有糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜与阿力甜等[1]。近些年的研究表明食品添加剂超量使用也会危害人体健康，食品安全国家标准对防腐剂和甜味剂的添加量作出明确规定，以保证食品安全[2]。本文采用液相色谱法同时测定食品中所添加的苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、糖精钠和安赛蜜。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

Waters allianc acquity e2695液相色谱仪；涡旋混合器；HR/T20 MM 立式高速冷冻离心机；KH-250DB数控型超声波清洗器。

甲醇（HPLC 纯）；乙酸铵、亚铁氰化钾、乙酸锌均为分析纯；标准试剂：山梨酸、安赛蜜、苯甲酸、糖精钠纯度均＞99%。

1.2 色谱条件

色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇+乙酸铵溶液=8+92；柱温：35 ℃；进样量：10 μL，检测波长：230 nm；流速：1 mL/min。

1.3 样品前处理

取2.5 g 左右样品于50 mL 离心管中，加入25 mL 水涡旋振荡，加入2 mL 10.6%的亚铁氰化钾溶液涡旋20 s 混匀，再加入2 mL 22%的乙酸锌溶液涡旋1 min 后定容至刻度线，超声30 min，于10 000 r/min 离心10 min，上清液转移至50 mL 容量瓶中，残渣再加水混匀后离心提取一次，上清液合并至原容量瓶中，用水定容至刻度线混匀，取上清液2 mL 过0.22 μm 滤膜，供液相色谱上机检测。

2 结果与讨论

2.1 流动相条件的选择

参 照GB 5009.28—2016《食 品 安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》检测标准，通过改变甲醇的比例[1]对比验证标准品目标峰的分离和出峰时间，最后确定流动相条件为：甲醇+乙酸铵溶液=8+92。

2.2 标准曲线的建立与分析

准确称取标准品（精确到0.000 1 g），以空白样品为基质制备基质空白标准溶液，用空白标准基质配制成梯度为1、5、10、25、50、100 mg/L 与200 mg/L的混合系列标准工作液,使用前配制，然后对标准工作液进行检测。图1 是4 种标准品的色谱图，从图1 中可以看出，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠的出峰时间分别在10.68、12.41、17.13 min 与26.24 min， 实现了4 种样品的同时检测。将色谱检出的峰面积与标准溶液浓度进行拟合，计算出目标物的线性回归方程、相关系数、线性范围和检出限，如表1 所示。4 种样品拟合曲线的线性相关系数达到0.999 以上。回收率试验的加标浓度分别为1、2.5、5 mg/kg，每份样品分别重复测定4次，结果表明样品的平均回收率在78.3% ～117.4%，相对标准偏差（RSD）在1.6%～4.1%。

图1 4 种添加剂的色谱图

图2 4 种添加剂的线性回归曲线图

表1 4 种添加剂的线性回归方程与相关系数

3 结论

本文通过液相色谱法检测食品中的苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、糖精钠和安赛蜜，参考GB 5009.28—2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》，为防腐剂和甜味剂的检测提供了一种高效、快捷的检测方法。利用液相色谱技术建立了同时测定多组分防腐剂和甜味剂的方法，提高了检测效率、缩短了样品的检测时间，并能确保检测结果的准确性，这也为以后的食品检测工作提供了思路上的借鉴。