胶体金法和ELISA法检测梅毒抗体假阴性观察分析

刘冬梅，闫晓武，王东

（1.西安市高陵区医院，陕西 西安 710200；2.陕西省新安中心医院，陕西 西安 710048）

梅毒是由苍白密螺旋体（Treponema Pallidum，TP）感染所导致的慢性全身性传播疾病，该病有较强的传染性，可通过性接触、输血、母婴垂直传播、注射等多种途径传播[1]。梅毒病原体对人体的黏膜及皮肤有很强的亲和性，可引起全身各组织和脏器的损害，从而严重危害人类健康[2]。而当前梅毒发病率呈逐年上升的趋势，因此选择理想的检测方法对梅毒的早期诊治有重要的价值[3]。血清学检测是诊断梅毒的重要依据之一，包括胶体金法、酶联免疫吸附实验（ELISA）法、梅毒螺旋体特异抗体测定（TPPA）法等[4-5]，其中TPPA法是疾控中心推荐的梅毒确证实验，但是有操作繁琐、费用昂贵、操作和结果判断难以自动化等不足，不适合在临床工作中进行大规模筛查[6-7]。胶体金法与ELISA法检测都有操作简便、灵敏度高，可适用于大样本筛查，但是在检测过程中的特异性较差，容易发生抗体假阴性情况[8-9]。为了进一步完善梅毒患者的早期诊断效果，本文观察与分析了胶体金法和ELISA法检测梅毒抗体假阴性情况，重点探讨了2种方法在梅毒检测中的效果。现总结报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2017年7月—2019年12月选择在本院诊治的疑似梅毒患者84例作为研究对象。

纳入标准：①患者年龄20～80岁；②自愿配合研究，并已签署知情同意书；③本院伦理委员会批准了此次研究；④患者临床表现为生殖器四周有斑块或丘诊、硬下疳、腹股沟淋巴结可见肿大。

排除标准：①妊娠与哺乳期妇女；②有精神疾病史者；③合并严重心及脏器功能障碍者；④合并恶性肿瘤者；⑤合并内分泌疾病、血液系统疾病、代谢性疾病者；⑥资料不全者。

1.2 方法 抽取所有患者的空腹静脉血2～3mL，3 500转/min离心10 min，取上层血清，放置-20℃冰箱保存，检测时避免反复冻融。

胶体金试剂由广州万孚生物科技有限公司提供，批号为W0348114；ELISA试剂由上海生化工程股份有限公司提供，批号为20183051；TPPA试剂由珠海丽珠试剂股份有限公司提供，批号为VN80822。由陕西省皮肤病研究所提供310份检测标本作为室间质量评价标本，所有试剂均在有效期内使用。

胶体金法：将试纸条置于干净平坦的台面上，用加样器将100 μL血清加入金标测试卡样品孔内，静置20 min左右读取结果。

ELISA法：用TP抗原TP47和TmpA包被微孔板，加样后37℃温育60 min，洗板后加底物显色，用双波长450/630 nm空白调零，读取吸光度（OD）值。

1.3 判断标准 胶体金法：失效为对照区未出现紫红色条带；阳性为测试卡在检测区和对照区位置出现2条紫红色条带；阴性为测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。

ELISA法：以弱阳性对照的OD值为临界值，≥临界值为阳性，初试结果为阳性时必须进行双孔复试，复试双孔为阳性时判为阳性，双孔为阴性时判为阴性，双孔为阳性时判为阳性，一孔为阴性、一孔为阳性时判为阳性。

以TPPA作为金标准，所有试验与判断严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计学分析 选择SPSS 19.00，计数资料以例数、百分率（例、%）表示（对比为卡方 χ2分析）；计量数据以±s表示（对比为t检验，多组间对比为方差分析），P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 梅毒确诊情况 经TPPA法确诊为梅毒64例，一期组（一期梅毒）38例，二期组（二期梅毒）26例，非梅毒组20例。3组的一般资料对比差异无统计学意义（P>0.05），见表 1。

2.2 检出率对比 胶体金法和ELISA法对一期梅毒的检出率为94.7%和97.4%，对二期梅毒的检出率为88.5%和92.3%，对非梅毒的检测率为5.0%和0.0%，见表 2。

2.3 诊断效果 胶体金法和ELISA法检测梅毒的敏感性与特异性为 90.6%（58/64）、93.8%（60/64）和95.0%（19/20）、95.0%（19/20），见表 3。

表1 3组一般资料对比 （±s）

表1 3组一般资料对比 （±s）

组别 n 性别（男/女） 年龄（岁） 体质量指数（kg/m2） 收缩压（mmHg） 舒张压（mmHg） 血糖（mmol/L） 心率（次/min）一期组 38 19/19 54.19±1.48 22.66±2.18 127.83±11.84 76.77±7.14 5.10±0.33 89.76±7.18二期组 26 14/12 54.87±1.38 22.76±1.74 128.09±12.47 77.01±6.28 5.08±0.12 89.14±6.56非梅毒组 20 11/9 55.02±1.11 22.56±1.22 127.88±13.11 76.76±4.10 5.12±0.13 89.28±7.88 F 0.164 0.394 0.284 0.492 0.389 0.098 0.533 P 0.921 0.533 0.679 0.322 0.539 0.873 0.413

表2 3组梅毒检出率对比 例（%）

表3 胶体金法和ELISA法检测梅毒的敏感性与特异性例

2.4 假阴性情况 在84例患者中，胶体金法检测假阴性5例（一期梅毒2例，二期梅毒3例），ELISA法检测假阴性3例（一期梅毒1例，二期梅毒2例）。

3 讨论

梅毒是危害人类健康的传播疾病之一，主要通过与感染者性接触而被传染，可与其他性传播疾病协同传播[10]。该病患者在临床上表现多样，主要以皮肤表现为特征，有危害大、传染性强等特点，在临床上极易出现误诊与漏诊等情况。选择有效的方法对梅毒的早期诊治、控制传播与避免不必要的医疗纠纷有重要的意义[11]。

TP侵入人体后，人体可产生抗心磷脂的非特异性抗体与抗菌体的特异性抗体。其中前者不是机体针对菌体本身所起的反应，是针对菌体破坏患者组织后释放的类脂产生的反应，为此其检出时间相对比较晚[12]。比如常规的梅毒检测方法-快速血浆反应素与甲苯胺红不加热血清试验虽然有检测迅速、检测成本低、操作简便、结果易读等特点，但是由于检测结果易受主观因素影响，常出现生物学假阳性与假阴性，灵敏度和特异性较差[13-14]。TPPA作为梅毒螺体确认实验，有很高的敏感性与特异性，但是操作复杂、反应时间长，不适合做大批量的筛选实验[15]。胶体金法采用胶体金免疫检测技术和层析原理，可定性检测血清样本中的梅毒螺旋体抗体[16]。ELISA法采用用基因工程方法生产的抗原包被微孔板，也可检测梅毒螺旋体特异性抗体，准确度高、灵敏度高、特异性强[17]。本研究结果从机制上分析，由于机体感染苍白密螺旋体4～10周左右，血清内才能出现数量不等的非特异性及特异性抗体，且经治疗后非特异性抗体可转为阴性，所以胶体金法的敏感性较差，不适用于一期梅毒的检测[18]。ELISA法可以重组TP的特异性抗原，检测对象包括IgM与IgG混合抗体，一次操作即可对多样本进行检测。并且ELISA法为定量检测方法，检测数据比较客观，克服了肉眼判读的主观性缺点[19]。

虽然不同地区之间的梅毒流行情况差别很大，但其依旧成为了严重的医学与社会问题。有研究指出，相较于正常人群，梅毒感染者艾滋病的感染风险可提高5～10倍左右，且梅毒潜伏期较长，为此在临床上容易被忽视[20]。当前由于用于梅毒血清学检验的方法较多，不同检测方法都有其特征，实验室如何更合理地选用检测方法，对避免假阴性情况而引发的后续问题尤为重要[21]。本研究显示胶体金法和ELISA法检测梅毒的敏感性与特异性为90.6%、93.8%和95.0%、95.0%。从机制上分析，胶体金法有可单份操作、简便、快速的优点，适用于基层的快速检验，但胶体金法为肉眼判读结果，易漏诊一些弱阳性标本，导致出现检测假阴性情况。ELISA法检测不受样本中纤维蛋白和溶血等影响，一次上机进行自动化检测，避免了主观因素对结果的影响，结果判读科学准确，能提高梅毒的检出率[22]。当前也有学者对30例梅毒感染者分别应用了胶体金法和ELISA法检测，结果发现后者的假阴性与假阳性率明显低于前者，主要在ELISA法检测通过基因重组合成抗原，对梅毒感染检测有更高的灵敏度与特异性[23]。

本研究显示在84例患者中，胶体金法检测假阴性5例（一期梅毒2例，二期梅毒3例），ELISA法检测假阴性3例（一期梅毒1例，二期梅毒2例）。胶体金法是一种应用现代生物工程技术制备的高度纯化单克隆TP的基因工程抗原，但是该方法在临床上的应用存在一定的假阴性，在梅毒潜伏期尤其是一期梅毒时容易漏诊[24]。ELISA法可采用双抗原夹心法原理检测血清中的特异性抗体，对一期梅毒与二期梅毒的检出率较高，但是其检测结果阳性只能说明正在或曾经感染过梅毒，而不能判断梅毒的活性情况。有研究显示，当人体标本中的梅毒抗体浓度过高或过低时，也容易出现假阴性而漏检[25]。本研究也存在一定的不足，调查的人群数量比较少，且没有分析影响检测结果的因素，将在后续研究中深入探讨。

总之，胶体金法和ELISA法检测梅毒抗体的敏感性与特异性都比较高，但是都有一定的假阴性情况，临床检测应根据实际需要，采用联合检测可减少漏诊情况的发生。