蛹虫草的优化栽培及其成分分析

王 哲 王升厚 柳叶飞 王 泽 赵洪新 赵晓云 徐方旭

（1.沈阳师范大学生命科学学院，辽宁沈阳 110034；2.沈阳师范大学实验教学中心，辽宁沈阳 110034；3.浙江理工大学生命科学与医药学院，浙江杭州 310018；4.沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁沈阳 110016）

野生蛹虫草主要分布在我国的东北地区及河北、广西等省区，辽宁省在1986年便发现蛹虫草[1]，其化学成分和药理作用与冬虫夏草相近，是冬虫夏草的最理想替代品[2]。近年来，蛹虫草经过人工驯化培育，技术手段趋向成熟，已经实现规模化生产。沈阳市是我国最早人工栽培蛹虫草的地区[3]，经分析证实，人工培育的蛹虫子实体中含有丰富的：虫草素、腺苷等活性物质，虫草素作为一种核苷类似物，有着广泛的生物学功能，不仅可以作为抗癌的药物[4]，还对治疗白血病有显著功效[5]，目前开发前景广阔[6]。

1 材料与方法

1.1 试验材料供试菌种的编号为C02，是实验过程中筛选出来的菌种之一，由沈阳市农业科学院食用菌研究所提供。培养基分为3种，即母种培养基、液体菌种培养基和栽培种培养基。

1.2 测定方法

1.2.1 母种制作 （1）将新鲜无芽无病变的马铃薯去皮，切成0.3～0.8 cm的条状，加水煮汁，约10 min后，煮至熟而不烂状，用8层纱布进行过滤。

（2）将滤液定容后加入琼脂粉搅拌均匀，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、无水硫酸镁、维生素B1等，加热煮沸，分装到试管中。

（3）在121℃的环境中，高压灭菌25 min，灭菌结束温度降至80℃以下，趁热取出试管摆斜面，培养基稍低于试管的2/3处即可（切勿沾到棉塞，防止杂菌滋生），冷却凝固后备用。

（4）接种，将 10种编号为 C01、C02、C03、C04、C05、C06、C07、C08、C09、C10的母种分别继代，用无菌接种铲在母种最前端取黄豆粒大小，接种到新的培养基上，在20℃的环境中避光黑暗培养，空气湿度控制在65%左右，10d后见自然光，共培养15 d，观察其长势及转色情况。

1.2.2 液体菌制作 （1）将玉米粉充分溶于水后，再加热煮沸。

（2）定容后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、无水硫酸镁，蛋白胨、维生素B1碾碎煮沸，搅拌均匀后分装到250 mL的三角瓶中，装液量占三角瓶的1/3～1/2，迅速封口。

（3）装入立式高压灭菌锅中，在123℃的环境中灭菌40 min，冷却后备用。

（4）接种，将剩余8种编号为C02、C03、C05、C06、C07、C08、C09和C10的母种进行液体种接种，在超净工作台上将母种试管取0.5 m3大小的菌块，接种于液体培养基中，温度控制在21℃，摇床频率120 r/min，培养6 d，观察菌球生长速度及菌球是否均匀一致。5

1.2.3 瓶载培养基制作 （1）将14种杂粮（燕麦、小米、高粱米、玉米、糙米、黄豆、荞麦、薏米、绿豆、红豆、黑豆、黑米、大米和小麦），分别装入750 mL的罐头瓶中，每瓶35 g。

（2）按常见小麦培养基的料水比1∶1.6加清水，即56 mL/瓶，封口。

（3）水平装入立式高压灭菌锅中，在123℃的环境中灭菌2 h，待冷却后备用。

（4）在超净工作台上接种，取8种液体菌种，用无菌水将菌种稀释，稀释倍数为1∶5，每瓶接种稀释液5 mL。

1.2.4 出草管理 （1）出草室消毒。发菌前，对出菇室进行消毒。1 m3空间用15 mL的40%甲醛加入14 g高锰酸钾消毒45 min，开窗通风24 h后可进入发菌。

（2）发菌温度保持在18℃，当菌种萌发后升至20℃，将空气相对湿度控制在60%左右，避光黑暗培养7 d。

（3）当菌丝长满料面、穿透底面近2/3后，见光培养，每天光照18～20 h，白天散射自然光，夜晚采用日光灯补充光照。温度控制在20℃，空气湿度控制在80%，每天通风0.5 h。当原基出现后，将瓶口塑料膜封口膜扎眼通氧，加强瓶内外气体交换，温度保持在22℃，待草芽长出3～4 cm后补充水分，空气湿度调为85%，每天通风2～3次，每次30～50 min，连续培养60 d左右，观察子实体的长势及商品性。收获后，将其在55℃的恒温箱中干燥至恒重，干重称重，并计算生物转化率。

1.2.5 优化料水比 当料水比为1∶1.6时，观察14种碳源的发菌情况、转色情况、原基形成情况等，观察结束后记录其长势情况，并对不适宜的料水比进行调整，直至调整到适宜蛹虫草生长为止。

2 结果与分析

2.1 发菌转色结果由图1可知，培养基F发菌比较缓慢，见光后边缘轻微转色，料面中心内不发菌；培养基I和培养基J不转色；培养基K仅边缘发菌，见光转色不均匀，菌丝不吃料。图2发菌均匀，见光转色快，菌丝吃料。

图1 未发菌及发菌不转色的碳源培养基

图2 发菌及转色正常的碳源培养基

2.2 料水比优化栽培试验结果通过多次栽培，观察发菌、转色及原基情况，根据实际情况调节料水比，得到表1。

表1 料水比调节表

由表1可知，第一批料水比为1∶1.6，发现培养基F、I、J、K未发菌或发菌少，故直接淘汰，其他除培养基D水分偏少外，其余水分都偏多；根据第一批栽培结果进行料水比调整，直至得到最适料水比。通过图3可知，菌丝要平铺料面，无气生菌丝及厚菌皮，培养基不能太干燥，发菌后不能露出杂粮颗粒等。

图3 优化料水比后发菌情况

3 结语

通过优化试验得到适宜的料水比：A为1∶1.4，B为1∶1.1，C为1∶1.4，D为1∶1.7，E为1∶1.1，G为1∶1.4，H为1∶1.6，L为1∶1.1，M为1∶1.1，CK为1∶1.6。研究结果能够为虫草产业发展奠定基础。