江苏省泰兴地区300例听力正常孕妇药物性耳聋的基因筛查

肖 颖, 吴玉璘, 赵永秀, 林 宁

(1. 江苏省泰兴市妇幼保健院 妇产科, 江苏 泰兴, 225400;2. 江苏省卫生健康发展研究中心, 江苏 南京, 210000)

耳聋是较为常见的感觉神经系统缺陷性疾病，研究[1]统计约2/3的听力损害是由遗传缺陷所致，其中线粒体遗传是一种母系遗传，而线粒体DNA 12S rRNA是氨基糖苷类抗生素诱导的非综合征性耳聋研究中的热点区域[2]，其中A1555G和C1494T这2个位点的突变是目前公认的与药物性耳聋密切相关的致病性突变，可引起突变携带者对氨基糖苷类抗生素表现出高度敏感[3-5]。目前，江苏省泰兴地区孕妇药物性耳聋基因筛查知识普及率较低，有关药物性耳聋基因的突变率等基础数据及相关研究报道较少。本研究对孕妇进行A1555G、C1494T基因突变筛查，早期发现药物性耳聋敏感个体、迟发型遗传性耳聋个体，为药物性耳聋遗传咨询及预防提供理论依据和干预措施，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取 2019年5月—2020 年6月江苏省泰兴市妇幼保健院定期参加产前检查的孕妇300例，筛查前均详细告知线粒体DNA 12S rRNA基因突变筛查相关知识和风险，所有研究对象均自愿签订知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 资料收集: 收集所有研究对象的基本信息，包括耳聋家族史、耳聋发病原因等资料。

1.2.2 样本采集: 抽取研究对象的外周静脉血2 mL, 乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，样本保存于-20 ℃冷冻备用。

1.2.3 药物性耳聋基因筛查: 应用药物性耳聋基因检测试剂盒(山东英盛生物技术有限公司，货号191201), 采用碱基突变全血检测法，在1.5 mL离心管中分别加入抗凝血液200.0 μL; 加纯水600.0 μL, 震荡混匀，室温放置10 min; 12 000 转/min离心5 min后弃上清; 加纯水600.0 μL, 震荡混匀，室温放置5 min, 期间混匀1次, 12 000转/min离心5 min后吸弃上清; 加200.0 μL DNA提取液, 100 ℃水浴 8 min; 短暂震荡, 12 000转/min离心5 min, 取上清用于检测。

在96孔板上摆放2套八连管，标记检测位点(1555A>G、1494C>T)、样本编号、阴性/阳性质控; 每管分装23.0 μL待测位点的聚合酶链式反应(PCR)的反应液于PCR反应管内; 确认离心好的样本、阴性/阳性质控品与PCR反应管的排列顺序一致; 向分装好试剂的PCR管内分别加入2.0 μL待测DNA模板、阴性/阳性质控。开启ABI7500荧光PCR仪，设置PCR扩增参数，并设定FAM、HEX(VIC)检测通道; 核对扩增程序及扩增体积25.0μL无误，按顺序放入待扩增样本，开始扩增。最后根据“反应孔信息表”项目下仪器自动读取的Ct值进行结果判读。

1.2.4 子代听力筛查: 采用丹麦MADSEN耳声发射仪和自动听性脑干反应筛查仪，对出生48 h至出院前的新生儿进行听力筛查。

1.3 评估指标

统计300例孕妇药物性耳聋基因筛查突变率; 对突变基因携带者提供科学用药指导，对子代进行药物性耳聋基因筛查，对子代进行听力筛查并随访跟踪。

2 结 果

300例孕妇中, 298例通过了药物性耳聋基因筛查, A1555G基因突变携带率为0.67%(2/300), 未发现C1494T基因突变。子代耳聋基因筛查结果显示，未通过筛查的2例孕妇子代均为A155G携带者。2例A1555G基因突变携带者的子代均通过了新生儿听力筛查。

3 讨 论

药物性耳聋是指使用某些药物引起的位听神经系统中毒性损害而诱发的一种非综合征性耳聋，具有遗传易感性[6-7]。线粒体DNA 12S rRNA突变是其主要致病机制, A1555G和C1494T是较为常见的突变位点。研究[8-10]报道，线粒体DNA 12S rRNA突变携带者出生时听力正常，若使用氨基糖苷类抗生素可出现感应神经性耳聋。氨基糖苷类抗生素具有较强的毒副作用，对听觉、前庭系统都会造成不可逆的损伤[11], 因其具有抗菌谱广、临床起效快等特点，目前仍广泛应用于临床，导致氨基糖苷类抗生素诱发致聋成为新发耳聋的主要原因。

本研究对300例孕妇进行药物性耳聋基因筛查，研究对象均为首次就诊，说明泰兴地区的孕妇及家属对耳聋基因筛查的重要性认知不足，因此需要加强专业卫生人员相关培训，大力宣传孕妇耳聋基因筛查的重要性。本研究采用PCR法检测出孕妇线粒体DNA 12S rRNA的A1555G携带率为0.67%, 子代线粒体DNA中A1555G携带率也为0.67%, 因线粒体基因具有母系遗传特点，故突变位点在母体与子代中的携带率并无差异。

线粒体12S rRNA突变可导致氨基糖苷类抗生素耳聋[12]。在中国，线粒体DNA 12S rRNA基因以A1555G突变为主, C1494T突变概率较低[13-14]。本研究共检出2例A1555G基因突变，说明携带者应避免使用氨基糖苷类药物，防止药物性耳聋的发生。本研究孕妇A1555G突变率仅为0.67%，且未检测到C1494T突变，低于研究[13-14]报道的突变率，可能与本研究样本量较少、各地区间存在差异等因素有关。本研究孕妇线粒体DNA 12S rRNA中A1555G突变2例，突变率为0.67%, 原因可能为本研究仅筛查了线粒体DNA 12S rRNA的2个热点区域，即A155G和T1494T, 而线粒体DNA上其他位点突变造成的药物性耳聋存在漏筛。因此，需进一步完善本研究中线粒体DNA其他位点上的筛查。

综上所述，在江苏省泰兴地区对孕妇人群开展药物性耳聋基因突变筛查，不仅可指导携带者合理用药，为携带者家庭揭示分子病因，避免孕期药物性耳聋的发生，还可对孕妇子代进行跟踪随访，进行专项管理，及早干预并构建完整的药物性耳聋防控体系。