张传师, 雍 康, 王方国, 罗正中, 沈留红, 曹随忠
(1.重庆三峡职业学院动物科技系, 重庆万州404155 ; 2.四川农业大学动物医学院, 四川成都611130)
奶牛乳房炎主要分为临床型和隐性型,其中隐性乳房炎的发病率远远高于临床型乳房炎[1]。造成奶牛乳腺炎中临床常见的菌属有:链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和支原体等[2]。当奶牛患乳房炎时,会导致奶牛泌乳能力降低、牛奶体细胞数上升,造成牛奶品质下降,对奶牛业造成了巨大的经济损失[3]。
美佑壮的主要成分是博落回提取物,博落回〔Macleaya cordata(Wild)R.Br.〕为罂粟科(Paperveraceae)博落回属植物,多年生高大草本,主要生长于丘陵或低山林的灌丛或草丛中,分布在我国的贵州、广西、广东、福建等南部省份,少量分布在日本中部[4]。博落回含有异喹啉类生物碱,约为干重的1%,已分离鉴定的成分有10余种,主要为血根碱(Sanguinarine)和白屈菜红碱(Chelerythrine)[5-6]。有研究表明,博落回提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等有抗菌的作用[7],还有杀虫、改善肝功能、增强免疫力、抗炎和抗肿瘤等作用[8-9]。由于博落回活性有效成分是天然物质,使用后易降解无残留,在动物养殖上具有良好的保健和生产作用[9-10]。博落回注射液对仔猪的白痢、黄痢有较好的治疗效果,其注射液被载入2003年版《兽药质量标准》[11]。Wang等[12]对博落回安全性的试验结果表明,博落回提取物对奶牛的体况评分、产奶量和乳成分无显著影响。本试验的目的是在患有隐性乳房炎的奶牛日粮中添加美佑壮,评价其对奶牛隐性乳房炎和血清生化指标的影响。
1.1 仪器与试剂 全自动兽用血液生化分析仪(型号SMT-12V,成都斯马特科技有限公司);检测试剂板(成都斯马特科技有限公司);离心机(型号TD-4Z台式低速离心机)。美佑壮(博落回提取物)由湖南美可达生物资源有限公司(批号:170303;规格100 g:0.375 g)惠赠。兰州隐性乳房炎诊断液(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药厂)。
1.2 试验方法 试验奶牛来自四川某规模化奶牛养殖场。采用加利福尼亚州乳房炎试验(California mastitis test,CMT)随机筛选出患有隐性乳房炎的奶牛。检测方法:兰州隐性乳房炎诊断液与蒸馏水1∶3稀释(现配现用)。待检测乳区弃去前3把奶,然后将乳样挤在检测杯,弃去多余乳样,检测杯内约留2 mL乳样,然后加入2 mL稀释液,做水平同心圆摇动,摇动10~30 s,使乳样与稀释液充分混合。
在检测出来患有隐性乳房炎的奶牛日粮中添加美佑壮,添加剂量为10 g/(d·头),添加周期为14 d。饲喂0 d、7 d、14 d三组之间相互比较。
1.3 样品采集 试验牛只分别在饲喂美佑壮0 d、7 d和14 d经尾静脉采血5 mL,室温静置30 min,3 000 r/min离心5 min收集血清,-20 ℃冷冻保存待检。
1.4 测定指标与方法
1.4.1 隐性乳房炎的检测及评分 将筛选出的患隐性奶牛乳房炎39头奶牛,测量其在饲喂0 d、7 d、14 d乳汁中体细胞数。判定标准见表1。隐乳检查结果采用计分法统计,阴性(-)为0分,弱阳性(+)为1分,阳性(++)为2分,强阳性(+++)为3分。CMT分值与乳区感染水平呈正比关系。
1.4.2 血清生化指标测定 使用全自动兽用血液生化仪检测3个时间段血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、总胆红素(TB)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、淀粉酶(AMY)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、钙(Ca)、无机磷(PHOS)和血糖(GLU)的水平。
1.5 数据分析 血清生化指标采用SPSS 2.3.0软件进行单因素方差分析,以P<0.05(差异显著)、P>0.05(差异不显著)作为差异显著性的判定标准,试验结果用平均值±标准差表示。
2.1 饲喂美佑壮对隐性乳房炎的影响 通过CMT筛选的用于治疗的隐性乳房炎奶牛共计39头,根据试验前、后奶牛隐性乳房炎的计分差判定疗效,饲喂美佑壮后有5头奶牛计分为负数,表示隐性乳房炎等级增加,占比12.8%;有13头奶牛试验前、后隐性乳房炎计分没有变化(无疗效),占比33.3%;有9头分数减低的等级为1,占比23.0%;有9头分数减低的等级为2,占比23.0%;3头奶牛分数减低的等级为3,占比7.7%。试验后共计有21头奶牛隐乳等级下降,即有疗效的占比53.85%,而其中有8头奶牛等级降低为0(即痊愈),占比20.51%。结果表明美佑壮有较好疗效。
2.2 饲喂美佑壮对奶牛血清生化指标的结果 由表2可知,添加美佑壮饲喂7 d和饲喂前相比较,ALT、AST、ALP、LDH、CK、TB、TP、ALB、AMY、CREA、Ca、GLU的含量差异不显著(P>0.05),UREA差异显著(P<0.05)。添加美佑壮饲喂14 d和饲喂前相比较,ALT、AST、ALP、LDH、CK、TB、TP、ALB、AMY、UREA、CREA、Ca、PHOS、GLU差异均不显著(P>0.05)。
表2 美佑壮对奶牛血清生化指标的影响Table 2 Effects of Meiyouzhuang to serum biochemical indcators in dairy cows
3.1 美佑壮对乳汁体细胞数的影响 乳汁中的体细胞数和乳房炎密切相关。当奶牛患乳房炎时,其乳汁中的体细胞数会显著增加,故体细胞数可作为奶牛乳房炎的指示物[3]。通过在患有隐性乳房炎的奶牛日常饲料中添加美佑壮饲喂14 d,测量饲喂0 d和饲喂后隐性乳房炎的等级,共有53.85%的隐性乳房炎病例的等级降低,对隐性乳房炎的治愈率为20.5%,表明美佑壮对奶牛隐性乳房炎有明显的治疗效果,且能有效降低隐性奶乳房炎奶牛泌乳期时乳汁中的体细胞数。
3.2 美佑壮对血清生化指标的影响 机体血清生化指标能间接反映畜禽生理健康状况血清生化指标中,ALT、AST指标可反应肝细胞是否病变或坏死。ALT主要分布在肝脏,其次是骨骼肌、肾脏、心肌等组织中,AST主要分布在心肌,其次在肝脏、骨骼肌和肾脏组织中,当这些组织细胞受损时,细胞膜的通透性增加,胞浆中的酶释放进入血液,导致血清酶活性升高[13]。血浆碱性磷酸酶(ALP)在机体代谢过程中起着非常重要的作用,它能催化水解磷酸单酯、磷酸核苷以及6-磷酸糖等类似化合物,主要来自肝细胞和毛细胆管的微绒毛,当胆汁排出不畅,毛细胆管内压升高时,可诱发产生大量ALP[14]。药物的转化部位主要在肝脏,因此当机体出现药物中毒时,多表现为肝脏的病理变化。本试验中饲喂美佑壮7 d、14 d血清ALT、AST、ALP活性与饲喂0 d比较差异均不显著。
肝脏是蛋白质代谢的主要的器官,许多蛋白质如白蛋白、糖蛋白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等都由肝细胞合成。在肝脏疾病时,可表现出血液中蛋白质质和量的改变。TP、ALB含量在一定程度上可反映机体蛋白质的合成与代谢状况[15]。美佑壮饲喂7 d、饲喂14 d和饲喂0 d比较TP、ALB含量,差异均不显著。
血清UREA和CREA是反映肾小球的滤过功能的较好指标。本试验中,UREA的含量在饲喂7 d以后含量降低,且差异显著,14 d以后和饲喂0 d相比有降低,但差异不显著。UREA可以反映饲料中蛋白质利用情况和氨基酸的平衡情况[16],提示美佑壮可以降低血清中尿素的含量,促进蛋白质的吸收和利用。CREA在饲喂7 d和饲喂14 d以后和饲喂0 d相比,无显著差异。结果表明,美佑壮对肾脏功能无不良影响。
CK是一种能量转换酶催化三磷酸腺苷与二磷酸腺苷的相互转换,与细胞内能量运转肌肉收缩、三磷酸腺苷再生有直接的关系,可作为诊断肌肉萎缩、心肌梗死及肠梗阻的指标。本试验饲喂以后,CK活性略有升高,但差异不显著,表明日粮中添加美佑壮对奶牛心脏、肝脏等脏器健康无不良影响。AMY主要来自胰腺和唾液腺,一般多考虑胰腺的问题。本试验中,饲喂7 d和饲喂14 d以后AMY活性都比饲喂0 d降低,但差异不显著,说明美佑壮对胰腺的消化功能无实质性的影响。
美佑壮添加前、后对血清LDH活性无显著影响,与Zhao等[17]的研究结果一致。曾建国等[18]博落回提取物对大鼠的毒性研究发现,试验组对大鼠体重无不良影响,血清生化指标和阴性对照组比较无显著差异。
本试验结果表明,在患有隐性乳房炎的奶牛在日粮中添加美佑壮,可以有效降低奶牛乳汁中的体细胞数,对患隐性乳房炎的奶牛有较好的治疗效果,而对奶牛血清生化指标无不良影响。