急性脑梗死患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42蛋白变化与认知功能损害的关联性

翟夏音

脑梗死主要是由于供应脑部血液的动脉出现粥样硬化和血栓形成，使管腔狭窄甚至闭塞，导致局灶性急性脑供血不足而发病；也有因异常物体(固体、液体、气体)沿血液循环进入脑动脉或供应脑血液循环的颈部动脉，造成血流阻断或血流量骤减而产生相应支配区域脑组织软化坏死。前者称为动脉硬化性血栓形成性脑梗死(atherothrombotic brain infarction，ABI)，占本病的40%～60%，后者称为脑栓塞(cerebral embolism，CE)占本病的15%～20%。 对于急性脑梗死(ACI)患者认知功能障碍的病情评估具有重要的意义，其能够在疾病的诊疗及ACI患者随访方面发挥作用[1]。血清生物学指标的研究，能够在ACI的诊疗过程中发挥作用。血管内皮生长因子(VEGF)表达上升，能够通过提高损伤脑组织血流灌注水平，增加脑组织血氧含量，进而促进损伤神经元细胞的修复和再生[2]；视锥蛋白样蛋白-1(VILIP-1)的表达上升，能够通过增加钙超载，进而促进神经元细胞的损伤[3]；可溶性CD40配体(sCD40L)的表达上升，能够通过提高趋化因子或者补体成分C4的激活，最终提高其对于神经元细胞的浸润程度[4]；β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)是神经元细胞变性相关蛋白，其能够通过反应神经元细胞的退行性病变，进而参与到ACI的病情进展过程[5]。为了揭示VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表达与ACI患者的病情关系，为临床ACI患者的诊疗提供参考，本次研究选取我院收治的110例ACI患者，探讨了VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42表达及其与患者病情的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年1月—2018年2月我院收治的ACI患者110例，依据MoCA量表评分分为认知障碍组(<26分，54例)和认知正常组(≥26分，56例)。选取60例同期住院的其他疾病患者作为对照组。纳入标准：(1)ACI患者均符合《实用神经病学》诊断标准[6]；(2)脑梗死后24 h内入院，在我院治疗后出院；(3)起病至认知功能评测时间间隔为3个月；(4)患者具备基本的听说功能。排除标准：(1)高血压脑出血患者；(2)急慢性感染；(3)颅内肿瘤、颅脑外伤患者；(4)既往伴有精神疾病、认知功能疾病。其中认知障碍组，年龄52～77(64.6±8.4)岁；男32例，女22例；体质量指数(BMI)22.0±2.2 kg/m2。认知正常组，年龄49～79(65.2±9.0)岁；男36例，女20例； BMI(22.2±2.1)kg/m2。对照组，年龄45～79(65.8±8.1)岁；男33例，女27例； BMI(22.4±2.6)kg/m2。

1.2 检测方法 采集患者发病后3～7 d肘部静脉血4 mL，一部分待血凝后采集上层清亮液体，放置冰箱-20 ℃保存。采用贝克曼库尔特公司生产的DX800免疫发光仪器及配套试剂进行VEGF检测，室内质量控制符合标准；另一部分1 500 r/min离心15 min，收集上清液，在每个聚苯乙烯板中加入上述液体0.1 mL，4 ℃过夜孵育，加入磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，每次3 min，在每个聚苯乙烯板孔中加入VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42抗体(1∶800 购自南京伯斯金生物公司)，37 ℃孵育30 min，加入磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，每次3 min，每孔中加入TMB溶液底物0.1 mL,37 ℃ 20 min，加入2M硫酸0.05 mL终止反应，采用DG5033A酶标仪(南京华东电子科技公司)进行OD值检测。

1.3 观察指标 (1)蒙特利尔认知量表(MoCA)：评价ACI患者认知功能，该量表主要包括执行功能、注意与集中、语言、记忆、抽象思维、视结构技能、计算机定向力等8个领域11个检查项目，量表总分30分，MoCA≥26分为正常。 (2)血清分子水平：依照上述1.2检测方法检测所有研究对象的VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42水平。

2 结果

2.1 3组患者一般资料比较 3组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组患者一般资料比较

2.2 2组ACI患者入院时病情指标比较 认知障碍组患者入院时NIHSS评分高于认知正常组，GCS评分低于认知正常组，差异有统计学意义(P<0.05),2组患者脑梗死部位比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 2组ACI患者入院时病情指标比较

2.3 3组患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42水平比较 认知障碍组、认知正常组、对照组3组的血清VILIP-1、sCD40L水平依次降低，Aβ1-42蛋白水平依次升高，且组间比较均差异显著(P<0.05)；认知功能障碍组血清VEGF水平低于认知正常组，高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 3组患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42水平比较

2.4 ACI患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42蛋白水平与MoCA评分的相关性 ACI患者血清VILIP-1、sCD40L水平与MoCA呈显著的正相关关系(P<0.05)，Aβ1-42蛋白水平与MoCA评分呈显著的负相关关系(P<0.05)，VEGF水平与MoCA无显著的相关关系(P<0.05)。见表4。

表4 相关性分析结果

2.5 多因素分析 以ACI患者是否发生认知功能损害作为因变量，以单因素分析具有统计学意义指标作为自变量，采用Logistic回顾分析矫正混杂因素，结果显示NIHSS评分增高，VILIP1及sCD40L高水平，Aβ1-42蛋白表达降低是ACI患者并发认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。见表5。

表5 Logistic回归分析

3 讨论

脑血管的痉挛、动脉粥样硬化或血管微血栓形成，均能够促进ACI的发生[7]。流行病学调查表明，ACI发病率超过4.9%，临床上ACI的发生，能够导致患者致残率显著上升，并能够增加患者并发认知功能障碍风险[8]。长期观察发现，合并有认知功能损害的ACI患者比例超过15%，同时随着病程迁移、病程严重程度加剧，认知功能损害程度可进一步上升[9]。影像学检查虽然能够在ACI患者认知功能损害评估过程中发挥作用，但影像学检查费用较高、检查耗时较长，同时影像学检查不具有定量化指导意义。本文通过对ACI患者血清VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表达分析，不仅揭示ACI患者的病情进展机理，同时为临床上ACI患者的认知功能评估提供参考。

VEGF能够通过促进脑血管新生内皮细胞形成，加剧脑组织的血流灌注水平。受体VEGFR1是为造血干细胞的招募和单核细胞、巨噬细胞的迁移工作需要，受体VEGFR2调节血管内皮功能，VEGFR3调节淋巴管内皮细胞的功能。VILIP-1是视锥细胞特有的一种钙结合蛋白。鸡的此类蛋白质与牛的恢复蛋白类似，由191个氨基酸残基组成，有3个钙结合位点。视锥细胞是视细胞的重要部分。视细胞是视网膜的感光神经元，分为视杆细胞和视锥细胞，均属双极神经元，由树突，胞体和轴突三部分构成。树突由较细的外节和稍膨大的内节组成。VEGF表达上升，能够提高损伤脑组织的修复能力，促进损伤神经元细胞膜完整性修复[10]；VILIP-1是视锥细胞相关因子，其主要参与神经元细胞的钙离子通道调控，并影响下游信号通路的转导。VILIP-1上升能够反应神经纤维鞘膜完整性的破坏程度，神经纤维的分解能够显著促进胞浆内VILIP-1释放[11]；sCD40L是细胞粘附相关因子，其对于下游炎症性因子的诱导，能够加剧巨噬细胞募集，进而促进脑组织损害[12]；Aβ1-42是卷曲蛋白因子，其能够通过诱导神经纤维的变性和凋亡，促进脑组织退行性改变[13]。有研究探讨了VEGF表达与ACI的关系，发现ACI患者VEGF表达明显上升[14]，但对于VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的研究较少。

由于糖尿病、高血压或者体重指数等指标，能够影响到ACI患者的病情，本次研究首先探讨了3组患者的基础性疾病，发现不同组患者的一般临床资料并无明显差异，排除了相关临床资料对于ACI患者病情的影响，体现了本次研究的科学性。本研究重点探讨了VEGF、VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表达与ACI患者认知功能关系，发现在认知功能障碍的患者中，VILIP-1、sCD40L的表达明显上升，而Aβ1-42的表达明显下降，提示了相关细胞因子的表达均能够影响到ACI患者的病情进展。分析其机制，可能由于VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的下列几个方面改变有关[15-17]：(1)VILIP-1、sCD40L表达上升，能够提高下游肿瘤坏死因子a的富集程度，加剧其对于神经突触结构的损害，导致神经电冲动完整性的破坏；(2)Aβ1-42的表达下降，主要与损伤的脑组织对于其清除能力的降低有关，而Aβ1-42的下降还能够影响到卷曲蛋白的沉积，最终导致神经元生理功能的障碍，促进认知功能损伤。陈健明等[18]研究发现，在ACI患者中，sCD40L的表达浓度显著上升，其平均上升幅度超过30%，在合并有明显的空间定向障碍或者言语功能障碍的患者中，sCD40L的表达浓度可进一步上升。在认知功能障碍患者中，VEGF的表达虽然比正常对照组有所上升，但相比认知功能正常组，VEGF表达有所下降，提示了VEGF表达呈现出先上升后下降的趋势，这主要由于VEGF的半衰期较短、发病后不同病情阶段检测所得的VEGF浓度不同有关。MoCA量表是评估患者认知功能的指标，MoCA量表评分越高，患者的认知功能越为理想[19]。本次研究中VILIP-1、sCD40L水平与MoCA呈正相关关系，Aβ1-42蛋白水平与MoCA评分呈负相关关系，提示了VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42的表达与ACI患者的认知功能密切相关。 VILIP-1、sCD40L、Aβ1-42可能通过调节小胶质细胞介导的神经炎症介质和补体系统在认知障碍病程中发挥作用。

本研究由于总体样本数量较低，对于入选患者梗死的部位及梗死灶体积没有作对比分析，因此还存在一定不足，旨待对以上问题进一步的探讨。

综上所述，在ACI患者中，VILIP-1、sCD40L的表达明显上升，而Aβ1-42的表达明显下降，与认知功能受损程度存在关联性。