金线莲化学成分的研究

钱丽萍 李 唯 彭华毅 阙慧卿 郭舜民 林 绥▲

1.福建省医学科学研究院 福建省医学测试重点实验室，福建福州 350001；2.福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心 福建省检验检疫技术研究重点实验室，福建福州 350003

金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）Lindl为兰科（Orchidaceae）开唇兰属（Anoectochilus）珍贵药材。野生金线莲资源正趋于濒绝，1990年被福建省人民政府列入“福建省重点保护野生药材物种”。金线莲在保护肝肾[1]，预防癌症[2]、糖尿病[3-4]、心血管疾病[5]、抗衰老[6-9]、免疫调节[10-12]等方面具有一定的功效，本文对金线莲有效部位进行化学和药理的研究，为金线莲的临床应用、药物的质量评价与控制奠定基础，为大量种植与开发利用金线莲提供科学的依据。

1 仪器与药材

Unity inova 500型核磁共振波谱仪（美国瓦莱纳公司），Q-Tof micro YA019质谱仪（沃特世公司），WFH-201（B）型暗箱式紫外透射反射仪（上海精科实业股份有限公司），2545制备液相色谱仪（沃特世公司），Avatar-330型智能傅里叶变换红外光谱仪（美国热电集团），7200型可见-紫外分光光度计（上海尤尼柯科技股份有限公司），APAⅡ自动探针熔点分析仪（德国Schorpp Geratelechik公司），RE-2000B型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），KHW-S-8精密电热恒温水浴锅（上海科恒实业发展有限公司）。

实验用药材为林下种植6个月的福建产金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）Lindl，购 自 福建省华芝韵生物科技有限公司，样本经福建中医药大学药用植物学专业中药鉴定方向的褚克丹教授鉴定为金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）Lindl。薄层硅胶和柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂产品，乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余化学试剂均为分析纯。

2 提取与分离

将林下种植6个月的金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）Lindl洗净晾干，称取全草20 kg，加8倍量75%乙醇常温浸泡24 h，加热回流提取2次，合并提取液，在减压状态下回收乙醇，浓缩得粗浸膏，加入与粗浸膏相同质量的超纯水，混匀制得混悬的药液，加入等体积石油醚振摇萃取三次，收集三次上层石油醚层备用。取下层水溶液加入等体积的乙酸乙酯振摇萃取三次，合并上层的乙酸乙酯层备用。取下层水溶液加入等体积的预先用水饱和的正丁醇，振摇萃取三次，收集正丁醇液备用。此时分别得到金线莲的石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分及正丁醇的萃取部分，将上述3个部分的提取物减压旋蒸，除去溶剂，得各3个萃取部位的浸膏。取正丁醇及乙酸乙酯部位浸膏分别经硅胶柱层析色谱分离，第一次硅胶柱层析用石油醚作为洗脱液：乙酸乙酯梯度洗，收集流份，每250 ml收集一份，在旋转蒸发仪挥干洗脱剂，用TLC检查显色，将收集到相同的相关流份合并，在旋转蒸发仪挥干溶剂；针对有意义斑点的流份进行第二次硅胶柱层析，用三氯甲烷：甲醇梯度洗脱，收集流份，每50 ml收集一份，在旋转蒸发仪挥干洗脱剂，用TLC检查显色，将收集到相同的相关流份合并，在旋转蒸发仪挥干溶剂；最后用半制备液相纯化得到化合物1（81 mg），化合物2（89 mg），化合物3（78 mg），化合物4（85 mg），化合物5（129 mg），化合物6（133 mg）。

3 结构鉴定

化合物1，白色粉末（甲醇），改良的碘化铋钾试剂显色，阳性反应，推测为含生物碱基团的化合 物，EI-MS m/z：230 [M]+，分 子 式：C13H14N2O2，UVλmax nm（MeOH）：222，279，289。IRυmax cm-1（KBr）：3373（NH），3300（OH），2990，1653（C=O）。1HNMR（DMSO-d6）δ：4.54（1H，d，J=6.6Hz，H-3），3.61（1H，dd，J=5.1Hz，J=11.8Hz，H-6），3.17（1H，ddd，J=2.6Hz，J=4.8Hz，J=15.2Hz，H-7），7.45（1H，d，J=8.0Hz，H-10），7.01（1H，ddd，J=2.0Hz，J=7.6Hz，J=8.0Hz，H-11），7.07（1H，ddd，J=2.0Hz，J=7.6Hz，J=8.0Hz，H-12），7.38（1H，d，J=8.0Hz，H-13），1.77（3H，d，J=6.8Hz，H-15）。13C-NMR（DMSO-d6）δ：133.2（C-2），49.1（C-3），169.5（C-5），57.9（C-6），23.3（C-7），106.9（C-8），126.3（C-9），118.3（C-10），118.7（C-11），121.5（C-12），111.4（C-13），136.9（C-14），17.1（C-15）。经鉴别化合物1的其理化性质、质谱特征、核磁共振特征、紫外吸收、傅里叶红外光谱及熔点分析结果与文献[13]报道的ginsenine一致，化合物1确认为ginsenine，是首次从金线莲植物全草中分离得到的。

化合物2，针状结晶，mp 139～141℃（CHCL3-MeOH），EI-MS m/z：424 [M]+，分 子 式：C30H48O，UVλmax nm（MeOH）：255，373。IRυmax cm-1（KBr）：3433（OH），2920（CH），1465（C=C）。1HNMR（CDCl3）δ：1.08（1H，m，H-1），1.88（1H，m，H-1），1.51（1H，m，H-2），1.86（1H，m，H-2），3.53（1H，m，H-3），2.22（1H，m，H-4），2.28（1H，m，H-4），5.36（1H，brd，J=5.4Hz，H-6），1.52（1H，m，H-7），1.98（1H，m，H-7），1.47（1H，m，H-8），0.95（1H，m，H-9），1.48（2H，m，H-11），1.19（1H，m，H-12），2.01（1H，m，H-12），1.01（1H，m，H-14），1.54（2H，m，H-15），1.26（1H，m，H-16），2.21（1H，m，H-16），1.16（1H，brd，J=4.0Hz，H-17），5.23（1H，dd，J=15.4Hz，J=8.0Hz，H-22），0.68（3H，s，H-18），1.02（3H，s，H-19），2.06（1H，m，H-20），1.01（3H，d，J=4.5Hz，H-21），5.15（1H，dd，J=15.4Hz，J=7.6Hz，H-23），2.41（1H，ddd，J=7.0Hz，J=7.0Hz，J=7.0Hz，H-24），1.42（1H，m，H-241），1.51（1H，m，H-241），0.85（3H，t，J=7.4Hz，H-242），1.99（2H，m，H-26），1.04（3H，t，J=7.6Hz，H-261），4.74（2H，dd，J=1.4Hz，J=1.2Hz，H-27）。13C-NMR（CDCl3）δ：37.4（C-1），31.9（C-2），71.8（C-3），42.5（C-4），140.7（C-5），121.8（C-6），31.8（C-7），32.3（C-8），50.4（C-9），36.6（C-10），21.1（C-11），39.7（C-12），42.4（C-13），57.2（C-14），24.4（C-15），28.8（C-16），56.1（C-17），12.2（C-18），19.4（C-19），40.2（C-20），20.7（C-21），137.1（C-22），130.5（C-23），51.2（C-24），154.7（C-25），26.8（C-26），26.8（C-241），12.3（C-242），12.4（C-261），106.9（C-27）。经 鉴别化合物2的理化性质、质谱特征、核磁共振特征、紫外吸收、傅里叶红外光谱及熔点分析结果与文献[14]报道的[anoectosterol（26-Methylstigmasta-5，22，25，（27）-trien-3β-ol]一致，化合 物2确 认为anoectosterol，是首次从金线莲植物全草中分离得到。

化 合 物3，无 色 针 晶，mp151～153℃，EIMS m/z：264 [M]+，分子式：C10H16O8， UVλmax nm（MeOH）：219，257，371。IRυmax cm-1（KBr）：3405（OH），2973（CH），1778（C=O）。1HNMR（pyridine-d5）δ：2.89（1H，dd，J=17.6Hz，J=2.8Hz，H-2），2.92（1H，dd，J=17.6Hz，J=5.2Hz，H-2），4.88（1H，dddd，J=5.2Hz，J=4.6Hz，J=2.8Hz，J=1.6Hz，H-3），4.45（1H，dd，J=10.4Hz，J=4.6Hz，H-4），4.72（1H，dd，J=10.4Hz，J=1.6Hz，H-4），4.93（1H，d，J=8.0Hz，G-H-1），3.97（1H，t，J=8.0Hz，G-H-2），4.24（1H，m，G-H-3），4.21（1H，m，G-H-4），3.94（1H，m，G-H-5），4.39（1H，dd，J=11.8Hz，J=5.8Hz，G-H-6），4.59（1H，dd，J=11.8Hz，J=2.4Hz，G-H-6）。13CNMR（pyridine-d5）δ：176.6（C-1），35.8（C-2），75.9（C-3），74.7（C-4），104.7（G-C-1），75.3（G-C-2），78.9（G-C-3），71.8（G-C-4），78.9（G-C-5），62.7（G-C-6）。经鉴别化合物3的理化性质、质谱特征、核磁共振特征、紫外吸收、傅里叶红外光谱及熔点分析结果与文献[15-16]报道的kinsenoside[β-D-glucopyranosyl-（3R）-hydroxybutanolide]一 致，化合 物3确 认 为kinsenoside。

化合物4，黄色固体，改良的碘化铋钾试剂显色，阳性反应，推测为含有生物碱的化合物，EI-MS m/z：216 [M]+。分 子 式：C12H12N2O2， UVλmax nm（MeOH）：223，275，280，285。IRυmax cm-1（KBr）：3353（NH），3090，3025（-CH），2929，2855，2790（C-H），1795（C=O），1639（C=C），1618，1555，1485，1455。1HNMR（DMSO-d6）δ：7.45（1H，d，J=8.0Hz，H-4），6.96（1H，dd，J=7.0Hz，J=8.0Hz，H-5），7.09（1H，dd，J=7.0Hz，J=8.0Hz，H-6），7.33（1H，d，J=8.0Hz，H-7），4.17（1H，d，J=16.0Hz，H-8），4.24（1H，d，J=16.0Hz，H-8），3.63（1H，dd，J=5.0Hz，J=10.6，H-11），2.81（1H，dd，J=10.6Hz，J=16.0Hz，H-12），3.15（1H，dd，J=5.0Hz，J=16.0Hz，H-12），10.7（1H，s，N1-H），8.81（1H，brs，OH），6.08（1H，s，N9-H）。13C-NMR（DMSO-d6）δ：126.3（C-2），106.9（C-3），127.5（C-3a），117.6（C-4），118.3（C-5），121.5（C-6），111.4（C-7），136.5（C-7a），40.1（C-8），169.5（C-10），56.9（C-11），23.1（C-12）。经鉴别化合物4的理化性质、质谱特征、核磁共振特征、紫外吸收、傅里叶红外光谱及熔点分析结果与文献[17-18]报道的anoectochine一致，化合物4确认为anoectochine。

化合物5，黄色针晶（MeOH），mp 315～316℃，Molish反应阴性性，盐酸镁粉反应呈阳性，推测为黄酮类化合物，EI-MS m/z：301 [M-H，10]，302 [M+，100]，275，155，139，分 子 式：C15H10O7， UVλmax nm：210，260，373（MeOH）。IRυmax cm-1（KBr）：3430（OH），1655（C=O），1615，1519，1435（Ar）。1HNMR（DMSO）δ：6.17（1H，d，J=2.0Hz，H-6），6.39（1H，d，J=2.2Hz，H-8），6.88（1H，d，J=8.6Hz，H-5'），7.53（1H，dd，J=8.6Hz，J=2.2Hz，H-6'），7.73（1H，d，J=2.0Hz，H-2'）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：146.8（C-2），135.7（C-3），175.6（C-4），160.2（C-5），98.2（C-6），163.6（C-7），93.7（C-8），157.3（C-9），103.1（C-10），122.6（C-1'），115.8（C-2'），145.1（C-3'），147.6（C-4'），115.1（C-5'），120.3（C-6'）。与槲皮素标准品对照，进行薄层显示，结果一致，其质谱特征、核磁共振特征、紫外吸收、傅里叶红外光谱及熔点分析结果与文献[19-21]报道的槲皮素（quercetin）一致，化合物5确认为槲皮素。

化 合物6，黄 色 固体 颗 粒，mp 251～253℃（MeOH），Molish反应呈阴性，盐酸镁粉反应呈阳性，推测为黄酮类化合物，EI-MS m/z：408[M]+，分子式：C22H16O8，UVλmax nm372，260，254（MeOH）。IRυmax cm-1（KBr）：3450（OH），1650（C=O），1620，1515，1435（Ar）。1HNMR（DMSO-d6）δ：6.33（1H，s，H-6），7.75（1H，d，H-2'），6.88（1H，d，H-5'），6.57（2H，d，H-3'，H-5'），7.46（1H，dd，H-6'），7.04（2H，d，H-2'，H-6″），3.69（2H，s，H-7'）。13C-NMR（DMSO-d6）δ：146.1（C-2），134.9（C-3），176.3（C-4），162.1（C-5），97.5（C-6），158.6（C-7），105.9（C-8），153.7（C-9），103.3（C-10）。与8-对羟基苄基槲皮素标准品对照，进行薄层显示，结果一致，其质谱特征、核磁共振特征、紫外吸收、傅里叶红外光谱及熔点分析结果与文献[22]报道的8-对羟基苄基槲皮素一致，化合物6确认为8-对羟基苄基槲皮素。

4 结果与展望

金线莲具有广泛的药用价值，近年来主要用来治疗高血压、心脏病、肺炎、急慢性肝炎及肾炎等症，而且对金线莲的研究主要集中在人工栽培、组培等方面的研究居多[23-28]，虽然目前对金线莲有较多的化学与药理学的研究，但是对该植物的研究还不够完善，我们认为应着重从寻找金线莲的生物活性物质出发，对金线莲的化学成分和生物活性进行研究的同时应对种植金线莲、野生金线莲、组培的金线莲进行化学成分的比较研究。

本研究从福建永安林下种植6个月金线莲中分离到6个化合物，根据理化性质、光谱数据及文献数据，6个化合物依次归属为：ginsenine（1），anoectosterol（2），kinsenoside（3），anoectochine（4），槲皮素（5），8-对羟基苄基槲皮素（6）。化合物（1）、（2）为首次从金线莲植物全草中提取分离得到。但是福建永安林下种植6个月金线莲提取的成分未与金线莲瓶苗（组培）及野生金线莲提取物的成分进行比较。研究在不同的栽培条件下金线莲的化学成分是很有意义的。我们后续将进行不同的栽培与采收时期的金线莲化学成分进行比较研究。为解决金线莲野生品种稀缺的问题提供理论支撑，同时为临床应用金线莲提供理论依据。