鸵鸟弯曲杆菌病的临床初诊和实验室检疫

吴立茵

（辽宁省葫芦岛市绥中县农业事务服务中心，辽宁 葫芦岛 125200）

禽弯曲杆菌主要是由空肠弯曲杆菌引起的一种细菌性传染病。弯曲杆菌病曾被称之为弧菌性肝炎。本文针对鸵鸟弯曲杆菌病进行临床初诊和实验室检疫的阐释。

1 流行病学

Blakemore等（1939）首先对幼鸡感染本病病变进行了描述，Delaplane等（1955）最早分离出本病原菌并对其进行了复制。现已知除鸡、火鸡、鸭等家禽外，包括鸽、鹧鸪、鹌鹑、雉鸡和部分狩猎鸟能感染本病。还从某些海鸟及水禽体中分离到了弯曲杆菌，鸵鸟患弯曲杆菌病也见有资料报道。本病主要传染源为病鸟，通过所排出带菌的粪便所污染的饲料、饮水构成本病的主要传播途径。现已从与污染环境有接触的家蝇、蟑螂等昆虫以及野生鸟类（麻雀）体中分离出空肠弯曲杆菌，并证明对易感动物具有感染性。另据介绍，从5日龄～4周龄间的幼年鸵鸟对本病有较强的易感性。

2 临床症状

幼龄鸵鸟在良好的饲养条件下病程往往是缓慢的，个别情况下也可能出现急性死亡（据报道，死亡率可高达40%），这取决于受感染鸟的体况、日龄、感染细菌的数量和菌株的毒力等因素。病鸟表现精神沉郁，不愿活动，间歇性或持续性腹泻，食欲不振、生长发育受阻，体重逐渐下降，排绿色尿液，后期多因脱水、极度衰竭而死亡。

3 病理学检疫

3.1 病理剖检变化

病程稍长死后的幼鸟可见尸体消瘦，腿部肌肉消耗、干燥呈深紫红色，皮肤干燥、弹性降低，部分病例肝脏出现点状坏死及出血点。受感染的肠管扩张，肠壁变薄、肠腔内有多量黏液或水样液体蓄积。部分病例还可能伴有心包积液及局限性心肌炎等病理变化。

3.2 病理组织学变化

肝表现浆膜水肿，病变区肝细胞索排列紊乱，肝静脉窦间隙内有淋巴细胞和颗粒性白细胞浸润，使用硝酸银浸渍处理，可发现胆小管增生、肥厚。受感染肠道固有层充血，单核细胞浸润，有不等量的菌体存在。肠黏膜充血肿胀和白细胞浸润，上皮细胞间出现大量杯状细胞。腺泡和排泄管扩张，黏液腺分泌亢进，分泌黏液中有数量不等的白细胞、红细胞，脱落的被复上皮薪液腺及其排泄管的上皮细胞聚集，并可检出弯曲杆菌的存在。

4 病原学检疫

4.1 病料采集及处理

鸵鸟全身感染时，可从肝、心、心包液、胆汁和血液中采集病料，制成细胞悬浮液进行病原体分离。也可使用无菌拭子直接由泄殖腔中采集粪便，或在剖检时无菌采集泄殖腔、空肠或盲肠内容物作为样品。为抑制粪便等病料中杂菌的生长，应在选择性培养基中添加杆菌肽、新霉素、三甲氧苄二氨嘧啶、先锋霉素Ⅰ和黏菌素抗微等生物药物。

4.2 菌体形态观察

弯曲杆菌的菌体可直接用感染病鸟胆汁制成涂片用相差显微镜进行观察，还可取盲肠内容物用碱性品红代替藏红复染的改良革兰氏染色法制成抹片检查。弯曲杆菌为革兰氏阴性，形态为逗点形、S型及螺旋状的杆菌，在老龄培养物中，本菌呈球形，能运动，通常有单根鞭毛。

4.3 鸡胚接种

取所制备含有抑菌物质的组织悬浮液0.1～0.2 mL注入5～8日龄鸡胚卵黄囊内或尿囊腔。弯曲杆菌可使被接种鸡胚3～5 d发生死亡，取其卵黄或尿囊液制成抹片染色，或直接用相差显微镜进行检查，能观察到本菌的存在。死胚表现血管充血和肝出现局灶性病变。

4.4 细胞培养

弯曲杆菌可在Hela细胞和人上皮细胞中生长繁殖。定位于细胞内部的侵袭性菌株，可通过固定、染色后，在电子显微镜下被发现。

4.5 分离培养

选择及增菌培养：弯曲杆菌为微嗜氧菌，在含5%的氧气、10%的二氧化碳和85%氮气，42℃（最低37℃）的培养环境下生长良好。可使用含抑菌物质的布鲁氏琼脂，基础血琼脂等作为选择性培养基。国外使用肉汤增菌培养基（BEM）可明显提高本菌检出率，其配方如下：2号营养肉汤（Oxoid）1 000 mL、3号琼脂（Oxoid）0.75 g、硫酸铁0.5 g、偏重亚硫酸钠0.5 g、丙酮酸钠0.5 g、酵母浸膏（Difco）1.0 g、3号胆盐（Dirco）1.5 g、Skirrow's抗生素添加剂（Oxoid）1瓶、脱纤人血50 mL。配制方法为将前7种成分混合，121℃高压15 min灭菌（最终pH 7.4），凉至50℃加入后两种成分，分装备用。操作方法是取10 g样品与50 mL BEM混合，制成匀浆，于微含氧环境中42℃培养24 h后，取增菌培养物转接于固体选择培养基继续培养24～72 h观察菌落。

细菌培养性状：菌落不溶血，呈半透明或灰色、扁平状，具有融合生长的倾向；在少数情况下，可生长出隆起、无光泽、边缘不整齐、不透明呈棕灰色的菌落。

生化特性：弯曲杆菌不发酵糖类，均能还原亚硒酸盐，氧化酶和过氧化氢酶阴性，吲哚阴性。空肠弯曲杆菌对萘啶酮酸敏感，水解马尿酸盐。

5 血清学检疫

使用兔制备的抗血清及被动血凝技术对菌体O抗原进行分型，已确定了空肠弯曲杆菌的60个血清型（Penner方法）；但此血清型方法，仅限于对流行病调查时用于进行菌体鉴定，而用于本病临床实验室检疫似乎意义不大。