常用消毒剂对鸡场分离大肠杆菌的消毒效果研究

袁晓娟/湖南省长沙市农业综合行政执法局 410013

大肠杆菌疾病是一类传染病笼统的总称，致病菌是大肠埃希氏菌内部的一些血清型，是非常重要的一类胚胎疾病。在整个生产活动中，禽类活动的所有周围环境里都有大肠杆菌，这种疾病在幼鸡以及成年鸡大肠杆菌疾病在临床上分为许多种类，其中包含大肠埃希氏菌致病性的卵黄性腹膜炎、关节炎、脑病、孵化率低、死胚、败血症、气囊炎、心包炎、肿头综合征、肠炎等。鸡群发病的概率是，致死的概率是[3]。由此可见，家禽大肠杆菌疾病的爆发严重损害了养殖户的利益，造成了养殖户经济上的巨大损失。

该病原体对于畜禽的生产安全造成了严重的损害，而最有效的防控措施就是消毒。本试验通过测量几种类型的消毒药剂对于分离的病原菌的最小杀菌浓度、消毒药剂的浓度、作用时间对消毒效果的影响，对大规模集约经营养鸡场现场进行消毒操作的实际效果观测，为疫病的预防控制以及确定消毒的方案提供理论依据。

1 材料

1.1 试验动物试验用的染病鸡来自某蛋鸡企业养殖厂。

1.2 试验材料LB培养基、伊红美蓝琼脂培养基、营养琼脂培养基、TSA琼脂培养基、肠杆菌科生化鉴定培养基，电热恒温培养箱、超净工作台、电子天平、高压蒸汽灭菌锅、恒温空气摇床、漩涡混合器、显微镜。

1.3 消毒药剂百毒杀、84消毒液、菌毒灵、新洁尔灭、新欧福、氨酚。

2 方法

2.1 病料采集及涂片染色将送检的病鸡进行解剖，在无菌的环境中取具备明显大肠杆菌病病变特点的组织器官比如气囊、心包、肝表渗出物进行涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察，在无菌环境中用接种环把疑似的病料接种在液体培养基上，完成菌群扩增过程。

2.2 分离培养病原把接种过疑似菌种的培养基继续接种在麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板上，37℃培养24h；再在无菌的环境中，挑取表面生长为红色菌落的半个菌落接种在营养琼脂斜面培养基进行纯培养，与此同时把另外半个菌落进行涂片，革兰氏染色，显微镜下检测；纯培养物放置在4℃的冰箱以备之后使用。

2.3 消毒剂的配制将百毒杀、84、菌毒灵、新洁尔灭、氨酚、新欧福分别用灭菌生理盐水按1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640的比例稀释成为浓度各异的消毒试剂。

2.4 制备大肠杆菌菌悬液把已经完成分离测定的大肠杆菌接种在营养琼脂培养基表面继续进行扩大培养，取5mL灭菌生理盐水加入培养基中，反复洗下菌苔至无菌管中，用漩涡混匀30s制成菌悬液，采用麦氏比浊管将菌悬液稀释为107CFU/mL待测菌液，保存在4℃冰箱内备用，12h内使用。

2.5 消毒剂在不同时间内的杀菌结果及最小杀菌浓度确定逐一取上述种类浓度各异的消毒试剂2ml跟大肠杆菌的菌悬液0.1ml进行均匀混合，经过1min、10min、30min和1h、5h的时长，取菌液与消毒液的混合液0.5ml加入4.5ml中和剂的试管中混匀，经中和作用10min，从中取0.1ml的样本涂布在营养琼脂培养基里上，在37℃的恒温培养箱内完成48h的培养，仔细观察各浓度杀菌剂在不同时间内的杀菌效果，以无菌生长的最低倍数作为该消毒剂在该时间内对试验菌的最小杀菌浓度。

3 结果

3.1 病料涂片染色镜检结果疑似病料经涂片染色镜检查得出：革兰氏阴性、无芽孢短杆菌，多单个或成对存在。

3.2 细菌培养特性及形态特征分离出来的菌株在每一种培养基上长成典型的大肠杆菌应该呈现的菌落形态，可以判断符合大肠杆菌典型的菌落形态特征。

3.3 消毒剂的消毒效果的测定结果百毒杀对某蛋鸡企业养殖厂分离的大肠杆菌菌株的杀菌效果最好，1:160比例稀释在5min内可以达到杀菌率100%；1:80比例的菌毒灵在5min内可以达到杀菌率100%；1:80比例的新洁尔灭在10min可以达到杀菌率100%；1:80比例的新欧福在5min可以达到杀菌率100%；1:40比例的氨酚在5min可以达到杀菌率100%。

4 讨论

几种消毒剂对大肠杆菌均具有杀菌能力，但稀释倍数各不相同，杀菌能力与消毒剂浓度呈正相关，而且杀菌效果与杀菌时间呈正相关;本次试验中6种消毒剂对大肠杆菌的杀菌效果与杀菌时间有关，作用10min后6种消毒剂都可以达到杀菌率100%。百毒杀的稀释比例相对来说也是最大的，所以在养殖场的日常消毒中，建议使用百毒杀，但是如果长时间使用单一消毒剂，养殖厂中致病细菌会逐渐产生耐药性，因此建议菌毒净和百毒杀定期交替使用。