金莲花多酚提取工艺及含量测定方法研究

阿力同其米克 姜湘英 胡君萍 扎克艳·地力夏提

摘 要 为了探讨淡紫金莲花中多酚提取工艺及含量测定方法，以没食子酸为对照品，采用Folin-Ciocalteu比色法测定金莲花中多酚含量，通过单因素试验和L9（34）正交试验确定金莲花中多酚的提取方法。结果表明，金莲花中多酚的提取方法为样品料液比为1∶125，回流2 h，提取3次所得的金莲花提取物中多酚含量为77.55 mg·g-1。没食子酸在0.988～8.587 μg·mL-1范围内与吸光度呈良好线性关系，平均回收率为97.25%，RSD为1.5%。该方法简便、快速、准确，可用于金莲花中多酚提取物制备以及质量控制。

关键词 淡紫金莲花;多酚;Folin-Ciocalteu比色法;含量测定

中图分类号：R284 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.29.073

金莲花（Flos Trollii）为毛莨科植物金莲花（Rollius chinensis Bunge.）和亚洲金莲花（Trollius asiaticus L.）的干燥花[1]。金莲花在天山山区广泛分布，在巩乃斯班禅沟作为优势种群大面积分布，在蒙医中用于风湿、急慢性扁桃体炎、急性中耳炎等病症。金莲花属植物全世界应用广泛，用药历史悠久。淡紫金莲花（Trollius lilacinus Bunge）隶属毛茛科，是天山山区雪域早春开花植物，长期以来，被新疆蒙医们用作清理陈旧性肺热及清热解毒。

目前文献对金莲花的研究主要是围绕着金莲花黄酮类成分，但是对多酚类成分的研究较少。经研究证明，植物多酚对人类健康具有独特作用，多酚化合物的抗炎、抗氧化、抗微生物，抗肿瘤作用已成为现在的热门[2-3]。前期调查研究表明，金莲花中多酚类含量高，具有很大开发利用价值。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

金莲花（产地吉林，厂家上海封浜中药饮片公司，批号140917）。

没食子酸对照品（天津市光复精细化工研究所，批号CNAB035-Q）;钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂，均为国产分析纯。

T6紫外分光光度计，购自新世纪北京普析通用仪器有限责任公司;SB-1000型水浴锅，购自上海爱郎仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 总酚测定

对金莲花中多酚含量采用Folin-Ciocalteu法进行测定。

1.2.1.1Folin-Ciocalteu试剂配制

精密称取钼酸钠6.3 g、钨酸钠25 g置圆底烧瓶中，用175 mL蒸馏水溶解，加入浓盐酸溶液25 mL和85%磷酸溶液12.5 mL，加热回流10 h，放冷，再加硫酸锂3.75 g和双氧水18.50 mL，加热沸腾至颜色亮黄色（约10 min），冷却过滤置棕色容量瓶中，加水稀释至250 mL即得。

1.2.1.2对照品溶液配制

精密称取没食子酸对照品4.49 mg，置于50 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，稀释至刻度，得标准溶液，浓度为0.098 mg·mL-1。

1.2.1.3金莲花多酚样品溶液制备

精密称取金莲花粉末0.2 g，加25 mL水，回流2 h，提取3次，过滤，提取滤过液，滤液浓缩并定定容至50 mL，即得供试品溶液。

1.2.1.4标准曲线的绘制

分别精密量取标准品溶液0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL和0.9 mL于10 mL容量瓶中，各加6 mL水，摇匀，再加0.5 mL福林试剂，摇匀。1 min之后加入碳酸钠溶液（浓度75 g·L-1）1.5 mL，混匀，用蒸馏水定容至刻度，水浴75 ℃反应10 min，在760 nm波长处测定吸光度。建立标准曲线，以浓度c（mg·mL-1）为横坐标，吸光度A为纵坐标，得到回归方程为A=147.12c-0.0143，相关系数R2为0.995 1。

1.2.1.5测定多酚的方法

精密吸取1.2.1.3中溶液0.1 mL，置于10 mL容量瓶中，依次加入水6 mL、福林试剂0.5 mL、75 g·L-1的碳酸钠溶液1.5 mL，加蒸馏水稀释至刻度，充分混匀，在75 ℃加热10 min后冷却，在波长760 nm处测定吸光度。

1.2.1.6精密度实验

取样品，按1.2.1.5方法重复测定6次吸光度。

1.2.1.7稳定性实验

取样品，按1.2.1.3方法，分别于制备后0 h、2 h、4 h、6 h测定其吸光度。

1.2.1.8重复性实验

照1.2.1.3方法制备6份样品溶液，按1.2.1.5方法测定吸光度。

1.2.1.9加样回收率实验

精密稱取供试品溶液9份（各0.1 mL），分别加入浓度为1.02 mg·mL-1的对照品溶液0.01 mL、0.02 mL、0.03 mL，按1.2.1.5方法，测定吸光度，计算回收率。

1.2.2 筛选金莲花中多酚提取工艺

1.2.2.1筛选提取溶剂

精密称取0.2 g药材共12份，分别加入甲醇、乙醇、水、丙酮各25 mL，超声30 min，过滤;精密吸取滤液适量，按1.2.1.5测定吸光度，另取20 mL滤液，浓缩干燥，计算浸膏得率。

1.2.2.2提取方法的筛选

精密称取金莲花0.2 g，加入25 mL水，分别采用回流法（90 ℃水浴回流30 min）和超声法（超声30 min）提取，过滤，分别吸取滤液0.2 mL，方按1.2.1.5测定吸光度，另取20 mL滤液浓缩干燥，计算浸膏得率。结果见表2。

1.2.2.3金莲花中多酚提取工艺优化

在以上单因素试验的基础上，采用L9（34）正交设计（表1），确定金莲花中多酚最佳提取工艺。精密称取金莲花各0.2 g，以水为溶剂，采用回流提取法，优选溶剂体积、提取时间和提取次数，提取滤液，滤液浓缩并定容至50 mL。精密吸取上述溶液0.1 mL，按1.2.1.5测定吸光度，按回归方程计算多酚的含量。

2 结果与分析

2.1 溶剂的筛选结果

由表2结果得知，水的吸光度和浸膏得率最高，初步推断水是提取最佳溶剂。

2.2 提取方法筛选结果

不同的提取方法所得提取液的吸光度和提取率见表3。结果表明，不同提取方法中超声法所得的浸膏得率略高，回流法所得的多酚含量较高，故采用回流法提取金莲花中多酚。

2.3 金莲花中多酚提取工艺优化

从表4极差分析可得，以上因素对多酚工艺提取的影响顺序为A（溶剂体积）>B（提取时间）>C（提取次数），金莲花多酚最佳提取工艺为A1B3C3，即精密称取供试品粉末0.2 mg，加入125倍水，回流提取3次，每次2 h。

2.4 精密度实验结果

取金莲花样品，按1.2.1.5方法测定吸光度，重复测定6次。6次结果分别为0.348、0.348、0.350、0.350、0.351、0.351，RSD为0.39%，表明方法精密度良好。

2.5 稳定性实验结果

取金莲花样品，按1.2.1.3方法，分别制备后0 h、2 h、4 h、6 h测定吸光度，结果分别为0.377、0.378、0.386、0.391，RSD为1.74%，结果表明，样品的稳定性较好。

2.6 重复性实验结果

照1.2.1.3方法制备样品溶液6份，按1.2.1.5方法測定吸光度。6次结果分别0.453、0.430、0.437、0.440、0.443、0.450，RSD为1.92%，表明重复性较好。

2.7 加样回收率试验

按1.2.1.9方法测定回收率的结果见表5，测得平均回收率为97.25%，该回收率较高，达到实验要求。

2.8 样品中多酚含量测定

分别取金莲花和淡紫金莲花样品，按1.2.1.3制备样品溶液，按1.2.1.5测定吸光度，计算多酚含量并计算浸膏得率。结果金莲花中多酚含量为77.55 mg·g-1，浸膏得率为50.79%;淡紫金莲花中多酚含量为37.71 mg·g-1，浸膏得率为57.85%。通过试验可知，金莲花中多酚含量比淡紫金莲花的高，淡紫金莲花的浸膏得率略高。

3 结论

采用Folin-Ciocalteu比色法，以没食子酸为对照品，测定金莲花中的总酚含量，没食子酸在0.988～8.587 μg·mL-1浓度范围内与吸光度呈良好线性关系。该法设备要求低、操作简便快捷、稳定性和重现性好，可作为检测金莲花总酚的可靠方法。

本实验采用单因素和正交试验，考察溶剂的筛选、提取方法、提取次数、料液比等参数，对金莲花多酚的提取工艺进行研究，金莲花以水作为溶剂，料液比为1∶125，90 ℃回流提取3次，每次2 h时所得的金莲花提取物浸膏最多，浸膏率为50.79%，多酚含量77.55 mg·g-1。说明该方法浸膏率高，多酚含量高，简单，快速，材料易得等特点，具有一定的推广价值。

参考文献：

[1] 白云娥，漆晓梅，高运玲.金莲花的生药学研究[J].山西医科大学报，2001，32（1）：27

[2] 李艳梅.金莲花质量标准规范化研究[D].石家庄：河北师范大学，2012.

[3] 王宏.苹果渣中多酚物质的提取分离，抗氧化活性研究[D].西安：陕西师范大学，2006.

（责任编辑：刘 昀）