液相色谱法同时分离测定8种人参皂苷

孔维恒 槐 硕 邱 烨 王 翔 祝天宇 刘 鑫* 郝 欣 李盈盈

(1.中国海关科学技术研究中心, 北京 100026；2.北京林电伟业电子技术有限公司, 100097；3.北京北分瑞利分析仪器(集团)有限责任公司, 北京 100095; 4.全国海关信息中心, 北京 100026)

1 引言

人参具有较高的保健、药用价值，具有“百草之王”的美誉，具有补益脾肺、生津养血、安神益智等多种功效[1]，在全球范围内被广泛应用于改善心血管循环、提高免疫力、抗肿瘤等治疗[2-4]。皂苷是人参中的主要活性成分之一，目前,国内外学者已经从人参属植物中发现了一百多种人参皂苷类化合物[5],其含量分析测定方法有很多，其中高效液相色谱法的应用较为普遍。

在全球主要国家药典中收载的人参药材质量标注多以Rg1、Re、Rb1的含量为指标进行质量控制[6]，为了对人参制剂或药材的质量更精确的把控，本实验在参考国家药典，应用高效液相色谱法对包含Rg1、Re、Rb1、Rd、Rc、Rf、Rb2、Rb3的8种人参皂苷实现了分离、建立了适用于8种人参含量测定的分析方法。

2 实验部分

2.1 仪器与设备

实验中所采用的仪器与设备详细信息见表1。

表1 仪器与设备

2.2 实验试剂

实验中所使用的试剂详细信息见表2。

表2 实验试剂

2.3 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱温：25℃；流动相：乙腈(A)-0.1% 磷酸水溶液(B)；进样量：20μL。梯度洗脱程序见表3。

表3 梯度洗脱程序

2.4 标准溶液的配制

2.4.1标准储备液

分别准确称取Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd，16.27mg、19mg、6.56mg、8.95mg、6.51mg、6.87mg、8.51mg、7.56mg于10mL容量瓶中，用色谱级甲醇定容，备用。

2.4.2标准溶液

分别准确取50μL、500μL、800μL、2500μL标准储备液，用甲醇定容至5mL，制备成8种皂苷混合工作曲线的4个浓度点，另取5mL标准储备液(2.4.1)为第5个浓度点。过0.45μm有机滤膜，装入液相进样瓶中，备用。

3 结果与讨论

3.1 色谱分离

在拟定的色谱条件下，8种人参皂苷的色谱峰可基本分离(图1)。

图1 8种人参皂苷的分离色谱图

3.2 线性关系考察

按照2.4.2制备好的各浓度标准，分别进样20μL，得到标准曲线结果见表4。

表4 线性考察结果

3.3 仪器精密度

取0.1mg/mL的8种人参皂苷混合标样，重复进样5次进行HPLC测试，计算8种皂苷的峰面积RSD值均小于1%，结果见图2及表5。

图2 精密度测试

表5 精密度测试数据

3.4 空白加标回收试验

本方法的准确性通过空白加标回收试验来考察。分别制备低、中、高3个不同浓度的8种皂苷的混合标液，加入到甲醇溶液中，进样3次取平均值。同时甲醇溶液进样3次作为空白数据，试验数据见表6。

表6 空白加标回收试验数据

4 实验总结

本实验中，通过使用SY-9100液相色谱仪，在25℃柱温条件下，采用梯度洗脱程序，实现了对8种人参皂苷的分离测定。为了保证实验方法的准确性，对仪器的精确度、8种皂苷的线性、空白加标回收等指标进行测定。实验结果表明，标准曲线线性良好，相关系数均大于0.999。0.1mg/mL的8种人参皂苷混合标样重复5次进样的测量结果，峰面积RSD<1.0%，仪器的精密度优越。空白加标回收试验，分别在甲醇中加入了低、中、高个浓度进行定量测试，回收率均在93.42%～108.58%，说明该方法具有良好的稳定性及准确度。